【推荐1】我国是糖尿病患者第一大国，胰岛素市场广阔，目前我们国家已经成功通过基因工程生产出胰岛素，下图是进行基因工程生产胰岛素的部分示意图。据图回答下列问题

(1)已知DNA链的合成方向是5′→3′，若要扩增出胰岛素基因并用于表达载体的构建，应该选择的引物是___________________，选择这两种引物的原因是____________________。
(2)结合图1和图2，应该选择的限制酶是____________________________。
(3)能够发挥作用的胰岛素是由两条链盘曲折叠形成的，如果选择大肠杆菌作为受体菌，只能从大肠杆菌中提取到两条单链肽链，不能得到有活性的胰岛素，原因是________________________。

【推荐3】CRISPR-Cas12a系统是第二类用于编辑哺乳动物基因组的CRISPR-Cas系统，该系统主要包含crRNA和Cas12a蛋白两部分，crRNA能特异性识别并结合特定的DNA序列，从而引导Cas12a蛋白到相应位置剪切DNA。某科研团队基于CRISPR-Cas12a系统对宫颈癌细胞中的KIFC1基因进行敲除，来探讨KIFCI基因在宫颈癌细胞中的功能及对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响。

(1)在CRISPR-Cas12a系统中，crRNA的序列与目的基因特定碱基序列部分结合，结合区域最多含____种核苷酸；细菌细胞中的____也能起到类似Cas12a蛋白的作用。若要将KIFCI基因从目标DNA上剪切下来，需要设计____种crRNA。
(2)为保证目的基因与PX458质粒正确连接，在扩增目的基因时，应在引物端加入相应的限制酶序列，其中P1的碱基序列为5′CAGCTGCTC3′。采用PCR技术对一个DNA进行扩增时，第n次循环共需要引物____个。
(3)在目的基因与PX458质粒连接时，可用____（填“E.coliDNA连接酶”或“T₄DNA连接酶”）进行连接。
(4)将crRNA-Cas12a重组载体成功转染至HeLa细胞，与对照组相比，实验组中KIFCl蛋白表达量如图2所示，细胞数目的变化如图3所示，由此可得出的结论是____，判断依据是____。

【推荐1】肌肉生长抑制素MSTN是骨骼肌生长发育负调控因子，MSTN在肌肉组织中特异性表达，其活性的丧失或降低会引起动物肌肉的过度发育，表现为肌纤维直径变大或肌纤维数增加，口感良好。因此，通过基因敲除获得具有育种能力的MSTN基因突变牛十分必要。

限制酶	KpnI	MfeI	HindIII	EcoRI	BamHI
识别序列及切割位点

图2
(1)科研人员利用打靶载体敲除牛MSTN基因（以下简称M基因），载体构建及M基因敲除过程如图1所示。为构建能够敲除M基因的打靶载体，需先设计引物，通过PCR技术扩增M基因。在引物上添加PstI限制酶识别序列，限制酶识别序列添加至引物的____（填“5'端”或“3'端”），据图1应选择的引物是____（从a、b、c、d中选择），将得到的PCR产物酶切后连入打靶空载体，鉴定正确后进行后续实验。
(2)为将抗生素抗性基因neo（抵抗抗生素新霉素）从原载体中切下，随后插入M基因中。据上图1及表中限制酶信息，应选择限制酶____分别对M基因和neo基因进行酶切，并用____连接，完成打靶载体构建。
(3)将构建好的打靶载体通过____法导入牛受体细胞中。据图1，受体细胞基因组中的M基因通过交换被替换为打靶载体上插入neo基因的M基因片段。交换后的打靶载体以及未成功交换的打靶载体（线形DNA片段）很不稳定，在相关酶的作用下随即降解。
(4)载体可整合到受体细胞基因组DNA的其他部位，引发K基因表达，使细胞在加入物质Q的培养基上无法存活。在选择培养基中除有细胞培养的必需成分外，还需要加入物质Q和____，可筛选出成功敲除M基因的受体细胞，其原因是____。

【推荐3】为实现目的基因与运载体结合，以便在大肠杆菌中大量表达相应的蛋白质，研究人员进行了如图所示操作。请分析回答下列问题：

（1）图表示用BamH I切割含目的基因的__________，质粒经相同限制酶处理后，经 ________酶的作用获得a，a称作_________。将a与感受态大肠杆菌混合后，混合物应接种在含有________的培养基上。质粒中抗氨苄青霉素基因称为______，在筛选过程起作用。若要证明培养基是否符合实验要求，培养基上需接种________的感受态大肠杆菌，培养后不出现菌落则培养基合格。
（2）DNA分子中，一条链中的两个核苷酸通过_________相连，已知碱性磷酸酶能除去核苷酸末端的5’磷酸，构建a的过程中用该酶处理质粒，但目的基因不用碱性磷酸酶处理，这样做的目的是___________。如果要检测目的基因 是否成功表达，须提取培养后大肠杆菌的__________，用相应抗体检测

【推荐1】科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图，请回答下列问题：

（1）图中卵母细胞应在体外培养到______期，步骤①应先对卵母细胞进行______处理。
（2）由图可知，步骤②要分离出ES细胞，需将重组胚胎培养到______期。
（3）步骤③选择ES细胞作为受体细胞而不是上皮细胞，是因为ES细胞______，该过程需要先利用______技术扩增干扰素基因，其前提是要有一段已知干扰素基因的核苷酸序列以便合成______。
（4）步骤④应在培养液中加入______。为检测干扰素基因是否在小鼠体内成功表达，可以采用______技术。

【推荐2】通过胚胎工程建立的转基因动物模型，常用于基因表达调控的研究、良种动物的筛选以及基因药物的生产等。制备转基因鼠的流程如图所示，请回答下列有关问题：

(1)体外受精时，人工采集的动物精子必须经过__________处理才能完成图示中的①过程。判断卵子是否受精的重要标志是_________。
(2)以体细胞为供体进行⑤过程成功率较低，而以胚胎干细胞为供体成功率会显著提高，原因是_________。
(3)胚胎移植过程中，是否需要通过注射免疫抑制剂以避免代孕鼠对植入的胚胎产生排斥反应？_________（填“是”或“否”）。为获得更多转基因鼠，可在胚胎移植前对胚胎进行_________。
(4)试管婴儿技术与胚胎分割技术获得后代的繁殖方式_________（填“是”或“否”）相同。
(5)进行胚胎移植的优势是可以_________。

【推荐3】如图是科学家对小鼠进行核移植实验的示意图，回答下列问题：

(1)采集到的卵母细胞需在体外培养至________期。
(2)图中从“内细胞团到胚胎干细胞”的培养过程中，必须用____________处理内细胞团，使之分散成单个细胞。干细胞形成组织、器官的过程中要经历____________（填细胞生命历程）。
(3)培养胚胎干细胞时，为保证无毒无菌环境，除对____________进行无菌处理外，通常还需在培养液中加入一定量抗生素，同时对气体条件的要求是__________________________________________________________。
(4)克隆胚胎一般发育至________期时进行胚胎移植，此时还需对代孕母鼠进行同期发情处理，其生理学意义是____________________________________。

【推荐1】国家863计划项目“利用崂山奶山羊乳腺生物反应器制备药用蛋白”取得重大进展。目前，已经成功获得经纯化的抗凝血酶Ⅲ蛋白，达到国际先进水平。下面是制作崂山奶山羊乳腺生物反应器的流程图，回答下列相关问题。

(1)与崂山奶山羊相比，一般不选用小鼠作为乳腺生物反应器的主要原因是_______。
(2)PCR扩增抗凝血酶Ⅲ基因，复性时冷却温度的设定是成功的关键，因为温度过高会破坏_______之间相应碱基的配对。过程③为_______，此过程需将该药用蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，目的是_______。
(3)过程④需将重组质粒注入受精卵内，而不是动物体细胞内，其原因是_______。
(4)在进行过程⑤之前，需取囊胚期的_______细胞做性别鉴定；随后对筛选的胚胎进行分割获得同卵双胎。胚胎分割时，要将囊胚的_______均等分割，其原因是_______。

【推荐2】应用生物工程技术可获得人们需要的生物新品种或新产品。据图回答下列问题：

(1)在培育转人生长激素基因牛过程中，②过程常用的方法是_____________，采用胚胎分割技术对处在_____________的胚胎进行分割，可以获得多头基因型相同的转基因牛。这些基因型相同的转基因牛的产生属于_____________繁殖。
(2)转人生长激素基因牛可通过乳腺细胞分泌乳汁来生产人生长激素，在构建基因表达载体时，人生长激素基因的首端必须含有______________________________。
(3)prG 能激发细胞不断分裂，通过基因工程将该基因导入_____________细胞可用于制备单克隆抗体，图中III代表的细胞具有__________________________________的特点。
(4)在抗虫棉培育过程中，④过程常采用的方法是_____________，⑤过程采用的技术是__________________；在分子水平上可采用_____________技术检测转基因抗虫棉的抗虫基因发挥作用的第一步是否成功。
(5)下面是获取目的基因的几种方法，其中核酸序列要求已知的是             
①通过DNA合成仪，利用化学方法人工合成目的基因 ②从基因组文库中获取目的基因 ③构建cDNA文库的目的基因④利用PCR技术扩增目的基因

A．①②

B．②③

C．②④

D．①④

【推荐3】请回答有关下图的问题：

（1）图甲中①〜⑤所示的生物工程为_______________。
（2）图甲中序号④所示过程叫做_________________。
（3）如图乙，一个基因表达载体的组成，除了目的基因外，在基因尾端还必须有[2]________；图中[3]_______的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。
（4）若预期蛋白质欲通过乳腺生物反应器生产，则构建基因表达载体时，图乙中序号[1]代表的是_______；且在图甲中⑨过程之前，要对精子进行筛选，保留含性染色体_________的精子。
（5）为获得较多的受精卵进行研究，图甲中⑥过程一般用激素对供体做________处理；为提高培育成功率，进行⑩过程之前，要对_______动物做______处理。若图甲中的卵母细胞来自从屠宰场收集的卵巢，则其在⑧之前需进行体外培养到_________期方能受精。
（6）用_______技术处理发育到_______期或囊胚期的早期胚胎，可获得同卵双胎或多胎。若是对囊胚进行处理，要注意将____________均等分割。