【推荐2】某科研小组欲用图1所示的质粒构建人胰岛素基因表达载体，让其在大肠杆菌中表达出人胰岛素前体物质，对人胰岛素基因所在的DNA片段进行测序，发现其两端附近无限制酶EcoRI、BamHI的酶切位点。已知人胰岛素基因表达时以②链为模板，且其3'端存在启动子，图1所示质粒上的amp^R为氨苄青霉素抗性基因，tel^R为四环素抗性基因。请回答下列问题：

(1)可采用_______来获得人胰岛素基因，这一方法需要先针对人胰岛素基因两端的序列来设计引物对。这一方法获得的产物一般通过______进行鉴定，若鉴定发现其中有许多种相对分子质量比人胰岛素基因小的DNA片段，则原因可能是______（答出一点）。
(2)为保证人胰岛素基因能正确连接到用限制酶EcoRI和BamHI处理的图1所示质粒上，且利用表达载体上的启动子在受体菌中以②链为模板进行转录，则应在配对到①链的引物5'端添加6个碱基，序列为5'-_______-3'。
(3)图1质粒上的amp^R和tet^R一般充当基因表达载体上的标记基因，其作用是______。利用质粒上的标记基因，结合微生物的培养，可以淘汰只转入质粒的大肠杆菌而获得被成功转入人胰岛素基因表达载体的受体菌，则应将重组载体导入经________处理后的________（填“不抗氨苄青霉素”“不抗四环素”或“不抗氨苄青霉素和四环素”）的受体大肠杆菌中。

【推荐3】为了增加油菜种子的含油量，研究人员尝试将酶D基因与转运肽基因相连，一起导入油菜细胞并获得了转基因油菜品种。回答下列问题。
   
(1)三种限制酶(ClaI、SacI、XbaI)的切点 如图所示，则用________酶处理两个基因后，可得到_______(填图中字母)端相连的融合基因。
(2)将上述融合基因插入如图所示Ti质粒的T-DNA中，构建_______并导入农杆菌中。将获得的农杆菌接种在含_______的固体平板上培养得到含融合基因的单菌落，再利用液体培养基振荡培养，得到用于转化的侵染液。
(3)剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是________，进一步筛选后获得转基因油菜细胞。
(4)用________法可检测转基因油菜细胞中的融合基因是否成功表达。

【推荐1】正常细胞不能合成干扰素，但含有干扰素基因。我国科学家采用基因工程技术生产干扰素a-2b已实现量产。具体做法是将产生干扰素的人白细胞的mRNA分离，反转录得到干扰素基因。将含有四环素、氨苄青霉素抗性基因的质粒PBR322和干扰素基因进行双酶切，用连接酶连接。将重组载体DNA分子在一定条件下导入大肠杆菌，在培养基中筛选培养，检测干扰素的表达量，选出高效表达的工程菌。请回答：
（1）在分化诱导因子作用下，正常细胞可以摆脱抑制、合成干扰素，该过程发生的实质是________________________________
（2）据下图分析，构建重组载体DNA分子时，可以选用_____两种限制酶对质粒pBR322和干扰素基因进行双酶切，目的是既能保证目的基因和质粒正向连接，又能防止_____________________________(答两点)。

（3）将重组质粒导入大肠杆菌中，然后将细菌涂布到含_____的选择培养基上培养，就可得到含质粒PBR322或重组质粒的细菌单菌落；再从每一个单菌落中挑取部分细菌转涂到含有_____的培养基上，不能生长的绝大部分是含有重组质粒的细菌，原因是_____
（4）干扰素在体外保存非常困难，如果将其分子中的一个半胱氨酸变成丝氨酸，在-70°C 条件下可以保存半年。实现这一转变需要直接对_____进行修饰或改造，这属于蛋白质工程的范畴。

【推荐3】四尾栅藻生长周期短、适应性强，是一种高潜力生物柴油新型原料，但油脂产量低。研究人员从含油量高的紫苏中提取DGATl（催化油脂合成的关键酶）基因，并成功导入四尾栅藻细胞内，获得转基因的产油四尾栅藻。其制备流程如图，图中Amp^r表示氨苄青霉素抗性基因，LacZ基因可使细菌分解培养基中的物质X-gal，进而使菌落呈现蓝色，无该基因或该基因被破坏，菌落呈白色。回答下列问题：

(1)从高表达的紫苏组织细胞中提取总的RNA，经_________获得cDNA，用于PCR扩增，PCR扩增DGATl基因时，使反应体系中的模板cDNA解旋为单链的条件是__________________。
(2)在DNA延伸的过程中，使用Taq DNA聚合酶而不使用大肠杆菌DNA聚合酶的主要原因是_____。
(3)构建的pMD19-DGATl导入经CaCl₂溶液处理的感受态大肠杆菌细胞中，并通过稀释涂布平板法接种到含_________的培养基中培养。一段时间后，挑选_________色的菌落以提取质粒pMD19-DGATl。
(4)用限制酶BamH I和Xba I切割pMD19-DGATl和pBI121，将其连接成重组表达载体pBI121-DGATl， 并将其导入四尾栅藻细胞中。与单酶切相比，双酶切的优点是________。

【推荐1】已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但其一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但其能不断分裂增殖。如图是科研人员为制备抗新冠病毒单克隆抗体而设计的流程图。回答下列问题：
   
(1)图中“免疫处理”的具体含义是________ 。过程①符合要求的淋巴细胞具有_____的特点。
(2)过程②的诱导方法有________________（答3种）等。过程③使用的HAT培养基中要有糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，通常还需加入_____等天然成分；除此之外，还必须加入________。
(3)从④中筛选出所需细胞的思路：____________。
(4)制备的单克隆抗体可以用于新冠病毒的诊断，其优点是________。

【推荐2】下图一是培养小鼠胚胎成纤维细胞(MEF细胞)的示意图，图二是在用MEF细胞制成的饲养层上培养胚胎干细胞(ES细胞)的示意图。

(1)图一所示，制备细胞悬液时，常用________酶来消化剪碎的组织块。配制培养液时，通常需要在合成培养基的基础上添加________等一些天然成分。当MEF细胞分裂生长到细胞表面相互接触时就停止分裂，这种现象称为细胞的________。
(2)ES细胞是由________中分离出来的一类细胞，ES细胞在功能上具有________________。
(3)MEF细胞能够分泌某些蛋白质，其合成与分泌至细胞外的过程是：核糖体→________→囊泡→________→囊泡，再通过________方式分泌到细胞外。在培养液中单独培养ES细胞时，ES细胞容易发生分化，结合图二可推知MEF细胞的作用是________。
(4)在治疗性克隆过程中，细胞核取自患者细胞，这是为了避免向患者移入组织细胞后体内发生________反应。