【推荐1】2A肽是一种来源于病毒的短肽，受2A基因序列控制。2A基因的转录产物可以通过“核糖体跳跃”断开位于2A肽尾端甘氨酸和脯氨酸之间的肽键，将2A基因前后编码的蛋白分割成2个独立蛋白。猪体内的PD基因能够提高猪肌细胞内脂肪含量，CS基因能够提高细胞的抗氧化性能，科研人员拟利用2A基因连接PD基因和CS基因，构建双基因共表达转基因猪，以提高猪肉品质。图1表示利用重叠延伸PCR技术成功构建融合基因的过程，图2表示构建成功的融合基因，其中F1~F5、R1~R5表示引物、GFP为绿色荧光蛋白基因，图3表示2A肽的剪切作用原理。回答下列问题：

(1)PCR过程需要引物，原因是_______。PCR1至少需要_______轮可以合成等长的PD-2A序列，若融合基因以a链作为模板链，则引物丁与融合基因中引物_______的大部分序列相同。进行PCR3过程不需要引物，高温变性后双链解开，其中_______（填序号）结合形成的杂交链不能延伸形成融合基因PD-2A-CS.
(2)GFP基因的作用是_______。除了利用PCR技术，还可以利用_______酶将GFP基因插入PD-2A-CS序列和终止子之间。若利用PCR技术检测GFP基因是否正确插入，可以选择的一对引物是_______。
(3)若2A基因正常表达，根据该融合基因的结构和表达原理，可以表达出_______这两种蛋白质。

【推荐2】为增加菊花的花色类型，研究者从其他植物的cDNA文库中提取出花色基因C(图1),拟将其与质粒（图2)重组，再借助农杆菌导入菊花细胞中。图3从上到下依次表示EcoRⅠ、BamHⅠ和Sau3AⅠ三种限制酶的识别序列与切割位点。请分析回答：

（1）利用PCR技术扩增目的基因C的原理是_____________。
（2）图2所示质粒被___________切割获得的产物可与图1所示基因C连接，理由是___________。
（3）经BamHⅠ处理后构建的重组质粒导入菊花细胞后，基因C不能表达，原因是质粒酶切部位的两端无_________，导致基因C不能_____________。
（4）在添加四环素的固体培养基上，___________(填“能”或“不能”）筛选出含有插入基因C的重组质粒的农杆菌单菌落，原因是_________________________。

【推荐3】甜蛋白是一种高甜度的特殊蛋白质，某甜蛋白基因编码区共含1178个碱基对（如图1）。为改善黄瓜的品质，科学家将该甜蛋白基因成功导入黄瓜细胞，得到了转基因植株。科学家利用PBI121质粒（如图2），以及两种限制酶，运用农杆菌转化法，将该甜蛋白基因导入黄瓜试管苗叶片细胞，再经植物组织培养获得甜蛋白基因过量表达的转基因黄瓜植株。请回答下列问题：

(1)限制酶切割DNA分子的时候破坏的化学键是___________。上述实现转基因技术过程中，科学家利用了如图2所示PBI121质粒，为了保证目的基因能够正确插入质粒，切割目的基因及PBI121质粒可用的限制酶为___________，若重组质粒利用SacI该过程属于基因工程的核心工作——__________和HindⅢ切割后能得到___________bp左右的片段，则表明目的基因正确插入质粒。
(2)转入甜蛋白基因后的黄瓜细胞，转化后应在培养基中添加___________（填“新霉素”或“卡那霉素”或“新霉素和卡那霉素”），筛选转化成功的愈伤组织。若要获得产甜蛋白能力更强的基因，可以对甜蛋白基因进行改造，最终得到更多的甜蛋白，该过程可以通过蛋白质工程完成，基本思路为__________（用文字和箭头表示）
(3)下表是鉴定含甜蛋白基因黄瓜植株的4种方法。请预测同一后代群体中，通过4种方法检出的含甜蛋白基因黄瓜植株的比例，从小到大依次是__________。

方法	检测对象	检测目标	检出的含甜蛋白基因植株的比例
PCR扩增	基因组DNA	甜蛋白基因	P1
分子杂交	总mRNA	甜蛋白基因转录产物	P2
抗原——抗体杂交	总蛋白质	甜蛋白基因编码的蛋白质	P3
测甜度	黄瓜	含甜蛋白基因黄瓜	P4

【推荐1】基因敲除是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。来源于λ噬菌体的Red同源重组系统可用于大肠杆菌等一系列工程菌的基因敲除。
(1)Red同源重组系统由λ噬菌体的exo、bet、gam3个基因组成，分别编码EXO、BET、GAM3种蛋白质，EXO为双链核酸外切酶，可以结合在双链DNA的末端，从5′向3′降解DNA单链，产生_________（3′、5′）端突出的黏性末端；BET结合在EXO外切产生的末端单链上，促进其与受体细胞内正在复制的靶序列进行同源重组，替换靶基因；GAM蛋白能够抑制受体细胞内核酸外切酶活性，进而_________（抑制、促进）受体细胞对外源DNA的降解。
(2)Red同源重组技术要用到质粒pKD46，该质粒含有以下特殊元件：温度敏感型的复制起点oriR101，在30℃培养时可以正常复制，而高于37℃时会自动丢失；调控exo、bet、gam基因表达的ParaB启动子，需要L-阿拉伯糖诱导。λ-Red系统介导的基因敲除过程见下图。

①过程A中，需要先用________处理大肠杆菌，便于pKD46导入，为使pKD46在细菌内正常复制、Red重组系统相关基因正常表达，需在________℃下培养，培养基中需要添加的特殊物质是________。已知只有成功导入pKD46的大肠杆菌才能在含有青霉素的培养基上生长，可推测________。
A.pKD46和大肠杆菌都有青霉素抗性基因
B.pKD46和大肠杆菌都没有青霉素抗性基因
C.只有pKD46含有青霉素抗性基因
D.只有大肠杆菌含有青霉素抗性基因
②为通过同源重组将大肠杆菌基因组DNA上的特定靶基因敲除，过程B除图示条件外，反应体系中还需添加________，需要在引物的________（3′、5′）端添加同源序列。若体系中有a个NpfII基因，扩增6次能得到________个带同源序列的NpfII。
③为筛选出同源重组成功（即靶基因被敲除）的大肠杆菌，过程C所用的培养基必需含有________；在高于37℃条件下培养，目的是________。

【推荐2】植物细胞壁中存在大量不能被猪消化的多聚糖类物质，如半纤维聚多聚糖，果胶质(富含有半乳糖醛酸的多聚糖)等。研究人员通过基因工程，胚胎工程等技术培育出转多聚糖酶基因（manA)，主要流程如下图(neo为新霉素抗性基因)，回答下列问题：

(1)运用PCR技术扩增DNA分子时，需经过变性→_______→延伸→重复过程，经过4轮循环后，得到的子代DNA分子中，不同时含有两种引物DNA分子占________。
(2)通过①过程获得的重组质粒含有4.9kb个碱基对，其中manA基因含有1.8kb个碱基对。现将该重组质粒成功导入受体细胞后，经培养，发现约有50%的细胞能正常表达目的基因产物，原因是_____________。若用BamH1和EcoRI联合酶切割其中一种重组质粒，只能获得1.7kb和3.2kb两种DNA片段，若用上述联合酶切割同等长度的另一种重组质粒，则可获得_________kb长度两种的DNA片段。
(3)在④过程的早期胚胎培养时，通常需要定期更换培养液，目的是________________。
(4)⑤过程前，通常需对受体母猪注射_____________，使其生理状态相同。与普通猪相比，该转基因猪的优势是________________。

【推荐3】小鼠癌症模型是目前最为常用、先进和公认的临床前抗肿瘤药物效应评价体系， 该模型随着肿瘤治疗策略的革新而不断发展，并为癌症的治疗手段提供重要的理论及实践指导。下图表示利用小鼠胚胎干细胞（ES 细胞）做的小鼠癌症模型，据图分析回答下列问题：

（1）a 过程表示基因工程，则其核心步骤是_____，该过程的目的_______________。
（2）b 过程可增加 ES 细胞的数量，若想从早期胚胎中获得更多的 ES 细胞，可将早期胚胎培养至_______ （时）期。d 过程移入的胚胎能够存活，从免疫学上来说，是因为代孕子宫不会 对其发生____________反应。d 过程进行前，要对代孕小鼠进行_______________ 处理。用肝癌细胞作抗原刺激   B 淋巴细胞，再将此淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合后获得细胞代谢产物______________，该产物与抗癌药物结合制成“生物导弹”，从而定向杀死小鼠体内的肝癌细胞。
（3）早期胚胎发育过程中，细胞逐渐开始分化，形成将来发育成各种组织的_______ 和滋养层细胞进一步扩大，会导致透明带破裂，胚胎从其中伸展出来，这一过程称为_______。
（4）图示研究过程中使用的技术有_____________________________（至少答出2个）。

【推荐1】电影《妈妈》于2022年母亲节上映，85岁的母亲为照顾阿尔茨海默病的女儿倾尽所有，母爱的无私付出让人泪目。阿尔茨海默病（AD）是一种神经退行性疾病，又名老年痴呆症。近期发现，resistin（抵抗素，化学本质为蛋白质）的表达与AD发病及进展可能有一定关联。在人体内，脂肪细胞，骨骼肌细胞，脑内巨噬细胞均可分泌resistin。但是在小鼠中，脑内的巨噬细胞并不分泌resistin，给希望通过AD模型小鼠研究脑内巨噬细胞分泌rsistin在AD进展中的研究带来了障碍。因此本实验拟将resitin基因导入到小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7细胞中，从而建立能够高表达resistin的单核巨噬细胞系统，为进一步探索resistin与AD之间的关系奠定基础。
(1)为大量获取resistin基因，可分离小鼠腹股沟部位脂肪组织提取的mRNA，经______后进行PCR扩增。PCR的原理是____________，反应体系需加入______种引物，引物的作用是使DNA聚合酶能从引物的______端开始连接脱氧核苷酸。
(2)下图1为所用质粒载体图谱示意图，图中限制酶的识别序列及切割位点见下表，为使resistin基因（该基因序列不含图1中限制酶的识别序列，图2中箭头表示resistin基因转录方向）与载体正确连接，在扩增的resistin基因的A端和B端应分别添加限制酶______的酶切位点，经过这两种酶酶切后的resistin基因和载体进行连接时，可选用______（“E.coliDNA连接酶”或“T₄DNA连接酶”）。

相关限制酶的识别序列及切割位点如下：

名称	识别序列及切割位点	名称	识别序列及切割位点
HindIII	A↓AGCTT TTCGA↑A	EcoRI	G↓AATTC CTTAA↑G
PvitII	CAG↓CTG GTC↑GAC	PstI	CTGC↓AG GA↑CGTC
KpnI	G↓GTACC CCATG↑G	BamHI	G↓GATCC CCTAG↑G

(3)为获得大量重组质粒，并鉴定重组质粒连接是否正确，可先将重组质粒导入经Ca²⁺处理的大肠杆菌中，Ca²⁺处理大肠杆菌的目的是________________________，再将完成转化的大肠杆菌接种在含______的培养基中培养。
(4)提取出鉴定连接正确的重组质粒导入到小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7细胞后，可以应用______技术检测resistin基因是否表达出resistin。

【推荐3】猪的基因和人类的基因存在一定的相似度，据报道经特殊处理的猪皮可在人身上存活3周左右，起保护创面免受感染作用，移植猪皮后，还要在猪皮上开很多小口，在小口处移植人患者的自体皮肤组织，自体皮肤慢慢生长，逐渐覆盖原先创面，而猪皮最终会掉光，为了使移植的猪皮存活更长时间，有人设法导入人的相关基因（用P表示），获得转基因小白猪，其简要流程如图所示：

据图中信息并结合课本知识回答：
（1）过程①中形成重组基因常用的酶有限制性核酸内切酶和_______；将目的基因导入成纤维细胞常用的方法是_____________。
（2）过程②中，常用_____________酶处理，将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞。在培养成纤维细胞时需要满足的条件是无菌、无毒、通气、适宜的温度、pH以及______。
（3）图中的卵母细胞应在体外培养到____________，并作除去细胞核的处理；过程③中所用的技术是_________；能代替图中卵母细胞的还可以是__________________。
（4）移植后的胚胎能在受体子宫中存活的生理基础是___________。

【推荐1】图1为某种普通质粒的示意图，质粒上3种限制酶的酶切位点如图所示（箭头表示识别序列）。图2表示制备抗体的两个途径的模式图。

（1）据图1提供的信息，你推荐最好采用_____酶去切割质粒较为理想。
（2）图2中 ③④⑤⑥过程中的目的基因是_____。 图中获取该目的基因的方法是_____。
（3）图2中①过程形成的Y细胞称为_____细胞，过程①的原理_____。
（4）抗体2在人体内引起免疫反应，这个过程属于_____。
A．细胞免疫            B．人工免疫             C．体液免疫             D．特异性免疫
（5）过程①需要采用的生物技术是_____。通过图2中①②过程获得的抗体1属于_____工程。
A．基因工程             B．细胞工程             C．发酵工程 D．酶工程
（6）下列①～④表示转基因技术的步骤，其中步骤④是_____；根据基因工程过程请将①﹣④步骤排序以实现获取抗体2，正确排序_____。
①重组DNA分子导入大肠杆菌细胞
②筛选含目的基因的受体细胞
③人工合成目的基因
④　 　
（7）为了检测目的基因是否导入大肠杆菌，需要进行筛选。其操作过程如下，请把下列各步填写完整：
第一步，配制培养基。除下表中的成分外，还必须添加_____。
第二步，菌液用_____法接种在第一步配制的培养基上。
第三步，选择目标菌落扩大培养。

牛肉膏	0.5g
蛋白胨	1g
NaCl	0.5g
琼脂	2g
水	200mL

【推荐3】苦荞是一种有名的经济植物，其含有的黄酮类化合物具有降血糖、血脂等功效。CHS是合成黄酮类化合物的关键酶。有人把经修饰的CHS基因导入苦荞细胞中，培育高产黄酮苦荞品系。按图示回答：

（1）过程①中将修饰后的CHS基因与Ti质粒连接成重组Ti质粒的酶称为_____________,这种酶主要有两类，一类是从T4噬菌体中分离得到的，另一类是从大肠杆菌中分离得到的，称为_______________。这两类酶都能恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的____________________键。
（2）图中将修饰后的CHS基因导入苦荞体细胞的方法称为__________________，除此外还可以利用的方法有________________________。对过程②操作前，需先用Ca²⁺处理农杆菌，使其成为___________细胞。
（3）检测转基因苦荞培育是否成功，不能用抗原﹣抗体杂交技术进行检测的原因是_______________________________________，可以比较转基因苦荞与普通苦荞的_______________含量或测定细胞中CHS含量进行鉴定。