2 . 上海生命科学研究院植物生理生态研究所的覃重军，薛小莉几位研究员在国际上首次人工创建了单条染色体的真核细胞，完成了将单细胞真核生物酿酒酵母天然的十六条染色体人工创建为具有完整功能的单条染色体。为了创建一个只具有单一染色体的活酵母细胞，重军等人利用基因编辑工具CRISPR--Cas9切割端粒结构（每条染色体末端的重复核苷酸序列区域），将两条染色体组合在起博士研究生邵洋洋从2013年开始尝试并发展高效的染色体操作方法，历经4年时间，通过15轮染色体融合，最终成功创建了只有一条线型染色体的酿酒酵母菌株SY14（去除了染色体中多余的着丝粒，只保留其中一个）。研究发现，虽然人工创建的单条线型染色体的三维结构发生了巨大变化，但SY14酵母具有正常的细胞功能，基因表达只发生了微小变化，这颠覆了染色体三维结构决定基因时空达的传统观念，揭示了染色体三维结构与实现细胞生命功能的全新关系。

1．左图为覃重军等科学家获得的酿酒酵母菌株SY14的落，获得该图菌落的微生物接种方法是______，若希望大量繁殖SY14菌株，可使用___________（液体/半固体/固体）培养基对其进行后续培养。
2．根据上述材料，基因编辑工具 CRISPR-C-Cas9在功能上接近（       ）

A．限制酶

B．DNA链接酶

C．RNA聚合酶

D．DA聚合酶

3．请将下列关于酿酒酵母菌株SY14构建过程进行排序（       ）

A．筛选导入成功的酿酒酵母菌株SY14

B．将重组的染色体导入去核酵母细胞中

C．利用CRISPR--cas9等技术重组酵母染色体

D．获取原始酵母染色体

4．关于酿酒酵母菌株SY14的叙述正确的是（       ）

A．SY14与野生型酿酒酵母相比，发生了染色体畸变

B．SY14的DNA并非双螺旋结构

C．SY14的代谢类型为异养兼气型

D．SY14去除染色体中多余的着丝粒的目的是为了避免染色体在细胞分裂时发生断裂

5．根据材料分析酿酒酵母菌株SY14能否应用于大规模酿酒生产?为什么?____

3 . 现代生物技术
中国科学院神经科学研究所利用 CRISPR-Cas9 基因编辑技术（图 1）构建了一批敲除调控生物节律关键基因 BMAL1 的生物节律紊乱猕猴，作为抗失眠治疗研究的动物模型。

                                                                                                                                                                                      
【CRISPR-Cas9 基因编辑的工作原理】
CRISPR-Cas9 基因编辑系统由单链向导RNA（sgRNA）和Cas9 蛋白组成，其中 sgRNA 的碱基序列可以人为任意设计，当其与靶 DNA 上某序列发生局部互补结合时，Cas9 蛋白就可以像“剪刀”一样切断此处的DNA 序列。
（1）sgRNA 和Cas9 蛋白组成的系统，在功能上最接近于_____。
A. DNA 水解酶       B. RNA 聚合酶       C. 限制性内切酶       D. 限制性外切酶
（2）图 2 所示为 DNA 分子局部结构示意图，方框中所示结构称为____________________________， Cas9 蛋白的作用位点是图 2 中的________________________（选填①、②或③）。在使用 CRISPR-Cas9技术从靶基因中切除一个片段后，细胞需对 DNA 分子上产生的断裂切口进行连接修复， 参与这一修复过程的酶在功能上最接近于_________。
A. DNA 聚合酶       B. RNA 聚合酶       C. DNA 连接酶       D. RNA 连接酶
（3）在构建 BMAL1 基因敲除的生物节律紊乱猕猴时，应通过何种技术将 CRISPR-Cas9基因编辑系统导入猕猴的何种细胞_______________。
A. 干细胞技术、受精卵       B. 干细胞技术、去核卵细胞
C. 显微注射技术、受精卵       D. 显微注射技术、去核卵细胞
【生物节律紊乱猕猴的批量生产】
中国科学院神经科学研究所采用 CRISPR-Cas9 基因编辑技术所获得的第一代生物节律紊乱猕猴中，个体之间 BMAL1 基因被编辑的程度各不相同，导致每只猕猴所表现出的生物节律紊乱程度存在差异。
（4）科学家认为，第一代生物节律紊乱猕猴无法直接作为抗生物节律失常治疗研究的动物模型，请从实验设计基本原则的角度分析其原因___________________为了克服这一局限，在第一代生物节律紊乱猕猴基础上构建第二代能够直接用作抗生物节律失常治疗研究的动物模型时，应借助的现代生物技术是__________________。

4 . 回答下列有关现代生物技术的问题
亨廷顿舞蹈病是由单基因（ HTT）突变导致的神经退行性疾病，中科院利用基因编辑（ CRISPR/Cas9）技术首个成功培育出亨廷顿舞蹈病的基因“敲入”猪模型，为制备其它神经退行性疾病大动物模型提供了技术范本和理论依据。具体操作过程如图。

（1）基因编辑技术所使用的 CRISPR/Cas9 系统需要对特定的 DNA 序列识别并切割，其功能类似于基因工程工具酶中的____。
（2）过程①所利用的生物技术是____。 过程②体现的生物学原理是____。
（3）根据图中信息，结合已有知识，基因编辑技术与转基因技术所利用的遗传学原理均是____。
（4）图中成纤维细胞中的目的基因是____。
A.猪的 HTT 基因                                                B.人的 HTT 基因
C.含人突变 HTT 基因片段的猪的 HTT 基因          D.猪的突变 HTT 基因
（5）在此研究之前，研究人员已建立转基因亨廷顿舞蹈病的猪模型，但出生不久后即死亡。由图可知，基因“敲入”猪模型相比转基因猪模型优势在于_____。
A.可以表现出亨廷顿舞蹈病的症状 　     B.致病基因可遗传给后代
C.培育的时间较短 　　　　                  D.发生突变的概率更高