1 . 科研人员将寒带地区海鱼体内的抗冻基因导入千禧果（一种番茄品种）细胞，成功培育出抗冻千禧果。下图为培育过程中使用的Ti质粒示意图，其中Vir区的基因活化能促进的加工和转移。回答下列问题：
   
(1)将抗冻基因的mRNA逆转录后，再进行PCR可获得抗冻基因，该过程中所需要的酶是________。每次PCR循环分为3步，其中所需温度最低的一步称为________，PCR扩增抗冻基因时需要添加特异性引物，目的是________。
(2)抗冻基因不能直接导入受体细胞，需要构建抗冻基因表达载体。构建抗冻基因表达载体的目的是________（答出1点）。
(3)选择图中Ti质粒构建基因表达载体时，不能选择限制酶Ⅱ切割Ti质粒，原因是________，最好选择限制酶________构建基因表达载体。
(4)为筛选成功导入抗冻基因的千禧果细胞，最好在培养基中添加________。将成功转化的千禧果细胞诱导培育成植株，最后在________条件下筛选出具有抗冻性状的千禧果植株。

2 . 干扰素(IFN)是一类蛋白质，它作用于靶细胞产生抗病毒作用，还具有抑制癌细胞生长和调节免疫功能等作用。用基因工程来研究和生产干扰素成为科学家努力的目标，下图为基因工程技术获取干扰素的三条途径。请回答下列问题：
   
(1)为了快速获得更多的干扰素基因，常采用PCR技术进行扩增，该过程用到的酶是_____。
(2)将IFN基因导入大肠杆菌一般先用_____处理大肠杆菌，使其处于感受态。图中①用到的技术为___。将IFN基因导入动物受精卵常用的方法是___。
(3)利用转基因牛生产干扰素时，需要将IFN基因与____的启动子等调控组件重组在一起；若要得到更多的乳腺生物反应器可以对图中②获得的_____阶段的早期胚胎进行分割。
(4)在胚胎移植前，需对早期胚胎进行筛选和鉴定，科研人员取囊胚的细胞，利用SRY基因（位于Y染色体上的性别决定基因）制成的探针进行____检测，将检测结果呈_____(填“阳”或“阴”)性的胚胎进行移植。
(5)利用农杆菌转化法将IFN基因导入植物细胞，常用Ti质粒作为载体的原因是____。

3 . 数字PCR技术是一种核酸分子绝对定量技术，其原理如图所示。下列有关叙述错误的是（       ）
   

A．每个反应单位中都需要加入解旋酶和耐高温DNA聚合酶

B．应根据目的基因的一段已知序列设计两种引物

C．PCR每一循环包括变性、复性和延伸三个过程

D．PCR结束后有靶分子的反应单位能检测出荧光

4 . PCR转基因检测技术被多国检测工作者使用，该技术通常包括核酸提取、核酸扩增、扩增产物检测3个步骤。某研究小组设计并完成了“转基因抗草甘膦大豆定性PCR检测”实验，请参与实验设计并回答相关问题(草甘膦为常用除草剂；转基因抗草甘膦大豆的外源基因构建图如图1所示)：
   
(PO为外源启动子、NOS为外源终止子、CP4-EPSPS为外源基因)
(1)提取DNA：取待测大豆组织裂解破碎，进行DNA提取和纯化，得到待测大豆基因组DNA。该过程的常用的试剂有EDTA、SDS、NaCl、酒精等。在研磨液中加入NaCl的目的是_________________，提取到的DNA可以用_____________试剂鉴定。
(2)DNA扩增：
①该小组拟定的引物设计如表所示，其中有一个基因的引物设计是不科学的，该基因是______________；不科学的原因是_________________________________。

基因	引物序列
PO	F-5'GGGATT-3' R-5'AATCCC-3'
NOS	F-5'GAATCCTGTTGCCGGTCTTG-3' R-5'TTATCCTAGTTTGCGCGCTA-3'
CP4-EPSPS	F-5'CTTCTGTGCTGTAGCCACTGATGC-3' R-5'CCACTATCCTTCGCAAGACCCTTC-3'

②PCR扩增：在反应体系中分别加入模板、相应引物、___________酶、__________等，在设定的PCR体系下可以特异性扩增目标DNA片段。
(3)扩增产物检测：扩增得到的PCR产物一般先通过_____________对产物进行初步鉴定.在凝胶中DNA分子的迁移速率与________________________________等有关。

5 . 二十碳五烯酸（EPA）是人体需要的一种营养物质。某实验室利用转基因技术从海洋细菌中提取了EPA合成途径的关键基因。下图表示通过PCR获取和扩增基因的部分过程。下列叙述正确的是（       ）
   

A．PCR体系中需要加入引物、原料和等

B．据图可知，可以选择引物①④或者②③

C．PCR第n次循环需要个引物

D．用于PCR的两个引物的碱基序列一般相同

6 . 下列关于利用PCR技术扩增目的基因的叙述，错误的是（       ）

A．PCR技术利用DNA半保留复制的原理，使核糖核苷酸序列呈指数方式增加

B．扩增目的基因前，需要设计可与目的基因的碱基序列互补的两种双链引物

C．基因的扩增依赖于模板、耐高温的DNA聚合酶和原料等物质

D．加热至90 ℃以上的目的是使基因的磷酸二酯键断裂

7 . 下面关于聚合酶链式反应（PCR）的叙述，错误的是（       ）

A．PCR利用了DNA的热变性原理，通过调节温度来控制DNA双链的解聚与结合

B．PCR过程中DNA聚合酶能够将4种脱氧核苷酸加到引物的5’端

C．PCR反应过程可以在PCR扩增仪中自动完成

D．PCR的每次循环一般可以分为变性、复性和延伸三步

8 . 土壤盐渍化影响水稻生长发育，将水稻耐盐碱基因OsMYB56导入不耐盐碱水稻品种吉粳88中，培育耐盐碱水稻新品种，其操作流程及可能用到的限制酶如图，其中bar为抗除草剂基因，Tet^r为四环素抗性基因，Amp^r为氨苄青霉素抗性基因，①~⑦表示操作过程。

限制酶	BamHⅠ	BclⅠ	SmaⅠ	Sau3AⅠ
识别位点及切割位点	-G↓GATCC-	-T↓GATCA-	-CCC↓GGG-	-↓GATC-

(1)OsMYB56基因游离的磷酸基团侧为__________（“5'”或“3'”）端，过程①PCR扩增OsMYB56基因时加入的酶催化__________键的形成，还需要添加引物，应选用引物组合__________。
①5'-CTTGGATGAT-3'             ②5'-TAAGTTGTCT-3'             ③5'-TAGTAGGTTC-3'
④5'-TCTGTTGAAT-3'             ⑤5'-ATTCAACAGA-3'             ⑥5'-ATCATCCAAG-3'
(2)根据基因表达载体的结构组成分析，Ti质粒中的CaMV35S是___________，其功能是___________。基因表达载体中，OsMYB56基因和bar基因编码链的方向___________（填“相同”或“相反”）。
(3)过程③应选用限制酶__________切割质粒，利用所选限制酶进行操作的优势是__________，切割后需要用___________进行连接才能获得重组质粒。
(4)为了筛选出含重组质粒的受体细胞，④过程应在添加___________的选择培养基上培养。培养后获得的菌落不能判定是否含有重组质粒，原因是___________。

9 . 红细胞生成素（EPO）是人体内促进红细胞生成的一种糖蛋白，可用于治疗肾衰性贫血等疾病。由于天然 EPO来源极为有限，某科研团队采用基因工程培育转基因羊作为乳腺生物反应器，使其能合成EPO。下列有关叙述错误的是（       ）

A．构建表达载体时需将EPO基因插入乳腺蛋白基因的启动子的上游

B．一般情况下，该转基因羊中的EPO基因只在羊的乳腺细胞中表达

C．可用显微注射技术将含有EPO基因的表达载体导入羊的受精卵中

D．用PCR扩增人EPO基因，需要一段已知的EPO基因核苷酸序列

10 . 研究人员发现，有一种称作XRCC2的启动子（负责RNA聚合酶识别、结合和开始转录的一段DNA序列）在正常细胞中表达水平很低，而在癌细胞中却高表达。利用该特性，研究人员结合DTA（白喉毒素A基因，其表达产物能够杀死细胞）做了如下图1实验。回答下列问题：

(1)组成XRCC2启动子的基本单位是_____。图2所示为XRCC2启动子两端的部分序列，通过PCR扩增XRCC2启动子，需要设计的两种引物的碱基序列为_____、_____（标明5'和3'端）。
(2)为了成功构建能够特异性杀死肿瘤细胞的质粒，需要先将XRCC2启动子与DTA形成融合基因。请结合图1简述构建融合基因的过程：_____。
(3)要验证重组质粒的表达产物能专一性杀死癌细胞，还需要设置一组对照实验，具体的实验方案为_____。
(4)基因驱动是指特定基因有偏向性地遗传给下一代的自然现象。遗传学家研究发现，基因驱动技术几乎可以百分之百地使突变基因在同一生物的不同种群个体之间传播，某些生物学家曾提出把这种技术应用于消灭一些入侵物种，从而保护那些濒危物种，一些遗传学家立即呼吁增强这种技术的管制。请从生物技术安全性的角度简要谈谈你对该技术的看法：_____。