1 . 科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ四种限制酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（amp^r为氨苄青霉素抗性基因），其中①~④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞。请据图回答下列问题。

（1）在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用限制酶____、___________进行切割。
（2）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体Ⅰ中含有________作为标记基因。
（3）研究人员通常采用______法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。通常采用_________技术，在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质。

2 . 科学家从苏云金芽孢杆菌中分离出杀虫晶体蛋白基因（简称Bt基因）培育转基因抗虫棉，下列分析正确的是（　　）

A．通过PCR技术扩增Bt基因时需用TaqDNA聚合酶打开DNA双链

B．构建基因表达载体需使用限制酶、DNA连接酶

C．在棉花细胞中检测出Bt基因转录出的mRNA是培育成功的标志

D．可直接将Bt基因导入棉花细胞

3 . 为了加快优良种牛的繁殖速度，科学家采用了以下两种方法，请根据图示信息回答下列问题。

（1）试管牛和克隆牛的培育过程中均用到的工程技术有____________、_____________等。
（2）在受精的过程中，首先发生________反应，释放出的酶直接溶解卵丘细胞之间的物质。判断卵子是否受精的标志通常是___________________________。此外受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生______反应，这为胚胎在受体内的存活提供了可能。
（3）要培育高产奶率的转基因牛，如建立生产生长激素的乳腺生物反应器，即科学家将__________和______________的启动子等调控组件重组在一起，通过显微注射等方法导入牛的受精卵中。

4 . 耐辐射球菌对射线具有超强耐受力，其P基因突变株受射线照射后生存率显著降低。研究者利用P基因成功转化不耐辐射的酵母菌，经射线照射后检测发现，与非转基因酵母菌相比，转基因酵母菌三种抗氧化酶含量显著增加。相关叙述不合理的是（       ）

A．采用划线法将酵母菌接种到液体培养基中培养

B．酵母菌的接种、培养等操作需保证无杂菌污染

C．耐辐射球菌对射线的耐受力与P基因密切相关

D．P基因通过增强细胞抗氧化能力使细胞具有耐受力

5 . 请根据基因工程、胚胎工程、生态工程的知识，回答下列问题：
（1）基因工程技术中获得目的基因后，利用PCR技术将该基因扩增，前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成___________。PCR技术中需要的关键酶是_____________。       
（2）将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是农杆菌转化法，农杆菌的作用是________。我国培育的转基因抗虫棉发展迅猛，在分子水平上，检测抗虫棉基因是否表达的方法是___________________。
（3）体外受精是胚胎工程的重要环节，来自母方的卵母细胞要在输卵管内进一步成熟，达到____________时期，才具备与精子受精的能力。胚胎移植是胚胎工程最后一道工序，其重要意义是___________________________。
（4）某生态系统能充分利用废弃物中的能量，形成无废弃物农业，这主要遵循了生态工程__________的原理。我国西北一些地区年降雨量较少，适宜种植灌木和草，却被硬性种植了属于乔木的杨树，结果许多杨树长得半死不活，防护林成为残败的“灰色长城”。其失败的原因主要是违背了_______________的原理。

6 . 我国科学家独创的花粉管通道法，可以使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞，是一种十分简便经济的方法，对此认识正确的是（     ）

A．不必构建重组载体就可以直接导入

B．此方法可用于转基因动物

C．受体细胞只能是植物的卵细胞

D．有时可以取代农杆菌转化法

7 . 科学家将人的生长激素基因与大肠杆菌的DNA分子进行重组，并成功地在大肠杆菌中得以表达。但在进行基因工程的操作过程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—，请据图回答：

（1）过程①所需要的酶是_________________
（2）在构建基因表达载体的过程中，应用限制酶______切割质粒，用限制酶______切割目的基因。用限制酶切割目的基因和载体后形成的黏性末端通过__________________原则进行连接。人的基因之所以能与大肠杆菌的DNA分子进行重组，原因是_______________________
（3）在过程③中一般将受体大肠杆菌用Cacl₂溶液进行处理，用以增大细胞壁的通透性，使________________________容易进入受体细胞。
（4）将得到的大肠杆菌B涂布在一个含有氨苄青霉素的培养基上，得到如图a所示的结果（圆点表示菌落），该结果说明能够生长的大肠杆菌中已导入了____________________，反之则没有导入；再将灭菌绒布按到培养基a上，使绒布表面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图b所示的结果（圆圈表示与图a中培养基上对照无菌落的位置）。与图b圆圈相对应的图a中的菌落表现型是__________________________，这些大肠杆菌中导入了________________。

8 . 利用外源基因在受体细胞中表达，可生产人类所需要的产品。下列各项中能说明目的基因完成了在受体细胞中表达的是

A．棉花二倍体细胞中检测到细菌的抗虫基因

B．大肠杆菌中检测到人胰岛素基因及其mRNA

C．山羊乳腺细胞中检测到人生长激素DNA序列

D．酵母菌细胞中提取到人干扰素蛋白

9 . 利用生物工程改造生物特性，从而生产人类所需的产品。下列关于生物工程的相关知识，叙述正确的是
①若要生产转基因抗病水稻，可将目的基因先导入到大肠杆菌中，再转入水稻细胞中
②植物体细胞杂交，能克服远缘杂交不亲和的障碍，培育出的新品种一定不是单倍体
③基因治疗主要是对具有缺陷的体细胞进行全面修复
④利用基因突变原理培育成生产人干扰素的酵母菌
⑤利用基因工程手段培育成生产人胰岛素的大肠杆菌
⑥利用细胞工程技术培育成生产单克隆抗体的细胞系

A．①③④

B．②⑤⑥

C．①②⑤⑥

D．①②③④⑥