【推荐1】由腊梅凝集素基因控制合成的某种蛋白质能与蚜虫肠道黏膜上的受体结合，从而抑制蚜虫吸收营养物质。通过基因工程将腊梅凝集素基因转入烟草，可增强其抗蚜虫的能力。请回答下列问题：
（1）在逆转录酶的作用下，能以腊梅凝集素基因产生的mRNA作为模板按照____________获得cDNA片段，以获取腊梅凝集素基因片段。为使腊梅凝集素基因在烟草细胞中高效表达，需要把目的基因片段插入表达载体的____________之间。
（2）将表达载体导入烟草细胞常用的方法是______________，在该过程中需添加酚类物质，目的是____________。腊梅凝集素基因的遗传特性能在烟草体内维持和表达的关键是____________。
（3）将转基因烟草幼苗与非转基因烟草幼苗隔区种植，并接种等量的蚜虫，一定时间后用____________法统计蚜虫的种群密度，若____________，则说明转基因烟草具有抗蚜虫能力。

【推荐2】噬菌体展示技术是将外源蛋白或多肽的编码基因插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，使外源基因随噬菌体外壳蛋白基因的表达而表达，同时，外源蛋白或多肽随噬菌体的重新组装而展示到噬菌体表面的生物技术。利用该技术可以获得单克隆抗体（最新技术）。请回答下列问题：
（1）传统单克隆抗体的获得需先对小鼠进行_______处理，整个过程中涉及的现代科学技术有________（答出两项即可）。
（2）限制酶是基因工程常用的三大工具之一，此类酶主要是从原核生物中分离纯化出来的，请推测它在原核生物中的作用是：___________________________。
（3）为了得到大量的外源蛋白基因，可使用PCR技术进行体外扩增，合成引物________（填“需要”或“不需要”）知道整个外源DNA序列。
（4）为了扩增重组噬菌体的数量，你觉得应该如何操作？________________________。

【推荐3】图（a）中的三个DNA片段上依次表示出了EcoR I、BamH I和Sau3A I三种限制性内切酶的识别序列与切割位点，图（b）为某种表达载体示意图（载体上的EcoR I、Sau3A I的切点是唯一的）。

根据基因工程的有关知识，回答下列问题：
（1）限制酶和DNA连接酶作用的化学键分别是____________和____________。
（2）限制酶对DNA分子的切割位点是否有特异性？_______；DNA连接酶是否有特异性？_______。
（3）经BamH I酶切割得到的目的基因可以与上述表达载体被____________酶切后的产物连接，理由是____________。
（4）若某人利用图（b）所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组子，如图（c）所示。这三种重组子中，不能在宿主细胞中表达目的基因产物的有__________，不能表达的原因是____________。

【推荐1】GRFT是一种来源于红藻的外源凝集素，能作为治疗艾滋病的候选药物。某实验小组将GRFT基因导入烟草细胞的染色体基因组中，发现烟草中GRFT基因的表达量可达60%~90%。请回答下列问题：
（1）将GRFT基因导入烟草细胞的染色体基因组的方法为__________，该方法能将GRFT基因导入烟草细胞的染色体基因组，利用的是T—DNA具有_________的特点。
（2）构建重组质粒时可插入NPTII基因，具有该基因的转基因植物的叶绿体离体培养时会出现退绿现象，据此可知重组质粒中的NPTII基因实质上是一种_________，其作用是_________。基因工程中的运载体除了质粒外，还有___________。
（3）欲大量获得GRFT，可利用植物组织培养技术将转基因烟草细胞培育到______阶段，原因是该阶段的细胞具有______________________的特点。

【推荐2】利用基因工程技术可将不同种生物的优良基因集合起来达到人类的生产目的。某科学家将人的血清白蛋白基因转入牛的体内构建乳腺生物反应器获得血清白蛋白。请回答：
（1）在人体内获取目的基因时要用到的工具是________，为了确保该血清白蛋白只在牛乳汁中出现，在构建基因表达载体时需要将__________等元件和人血清白蛋白基因重组在一起。乳腺生物反应器有一定的局限性，只能在雌性动物中应用，若要打破性别限制，科学家还可以构建_________生物反应器。
（2）要确认转基因牛是否表达出相应的血清白蛋白，可以采用的方法是__________，该方法的原理是____________。
（3）单克隆抗体的制备是细胞工程应用的重要范畴，通常使用灭活病毒促进__________和骨髓瘤细胞的融合来制备单克隆抗体，单克隆抗体的优点是__________。

【推荐3】基因工程、细胞工程、胚胎工程和生态工程技术飞速发展，在生产中获得了越来越广泛的应用．请回答下列相关方面的问题：
（1）基因工程的核心步骤是_____，其结构组成中启动子的作用是_____．相同的基因在不同生物体内都能表达出相同的产物，其原因是_____。
（2）单克隆抗体的制备是利用了B淋巴细胞能_________的特点和骨髓瘤细胞的_______的特点，因此单克隆抗体具有化学成分单一、特异性强、灵敏度高的特点。
（3）在胚胎工程中，需要给供体注射促性腺激素，其目的是_____．体外受精时，精子首先要进行获能处理，通常采用的体外获能方法有_____和_____两种。
（4）我国西北土地沙化严重，其中一个重要原因是过度放牧，导致草场退化，这主要违背了生态工程中的_____原理。

【推荐1】β-淀粉样蛋白（Aβ）在脑组织内堆积会导致阿尔茨海默病。小胶质细胞是脑组织中的能够吞噬并清除Aβ的重要免疫细胞。蛋白CD22分布在胶质细胞表面，是调控其吞噬作用的因子。研究人员利用小鼠制备了抗CD22单克隆抗体，制备流程如下图所示。回答下列问题：

(1)上述制备抗CD22单克隆抗体的正确技术流程是_________（用箭头和序号表示）。其中图④细胞群能合成并分泌_________（填“一种”或“多种”）抗体。
(2)细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基蝶呤阻断。人体淋巴细胞尽管有这两条途径，但不能无限增殖，肿瘤细胞尽管没有S途径，但能无限增殖。结合该原理设计获得图④细胞的实验思路：配制动物细胞培养液→加入_________（填药剂）→接种图_________（填序号）细胞→置于恒温培养箱中培养。
(3)图⑤细胞的获取需要经过用96孔板培养和筛选阶段，其中筛选的原理是_________。
(4)上述抗CD22单克隆抗体作为鼠源性抗体，理论上可应用于阿尔茨海默病的治疗，但临床上，在注射前需要对其进行人源化改造，仅保留鼠源单抗的6个CDR区（抗原结合区），其他区域均替换成人抗体区段，其目的是_________。

【推荐2】生物工程在医疗卫生方面得到了广泛应用，请回答下列问题。
（1）利用_______技术制备的杂交瘤细胞，可用于制备单克隆抗体。与体内抗体相比，单克隆抗体具有理化性质单一、______、可大量制备等优点。
（2）干扰素、胰岛素等物质可以通过工程菌来大量生产。该技术中目的基因和运载体要用同种_______切割，以产生相同的_____。
（3）在完成体外受精的过程中，对已取得的精子要进行_______处理，为了获取更多的卵细胞，一般要对雌性个体注射______，使其超数排卵。
（4）利用细胞培养技术可以获取自身健康的皮肤，用于皮肤移植。在此过程中通入CO₂的目的是________，在培养液中加入_______酶，可防止细胞出现接触抑制现象。

【推荐3】多不饱和脂肪酸（PUFAs）是人体必需脂肪酸，为解决猪肉中PUFAs含量不足的问题，研究者从线虫中获得控制PUFAs合成的必需酶基因fat1。培育转fat1基因猪，操作过程如图所示。图中GFP基因表达出绿色荧光蛋白。据图回答下列问题：

(1)用PCR技术在体外扩增目的基因时，PCR扩增仪中要加入缓冲液、目的基因、_________（至少答两点）等。
(2)从图中可知，在构建基因表达载体时，为克服目的基因自身环化（即线性DNA的末端相互连接，变圆环），以及便于目的基因与载体的连接，切割含目的基因的DNA和载体的限制酶应选用_________。
(3)构建的基因表达载体中，GFP基因的作用是_________。
(4)猪成纤维细胞在培养瓶中培养时，除必须保证环境是无菌、无毒外，还必须定期_________，以防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成伤害。培养到一定程度后，需要分瓶再继续培养，分瓶后的培养过程称为_________，操作时首先用_________等处理成细胞悬液。
(5)经检测，fat1基因成功整合在猪基因组DNA后，若想获得该转基因动物，需经过胚胎移植过程，该过程需对受体进行_________处理，移植胚胎后需要对受体进行是否妊娠的检查。

【推荐1】为研究胰岛素和生长激素对动物细胞克隆形成率的影响，请根据提供的实验材料，以细胞数为检测指标，提出实验思路，并预测实验结果。
材料与用具：经克隆过的小鼠肝癌细胞纯系、动物细胞培养液、胰岛素溶液、生长激素溶液、胰蛋白酶、细胞培养瓶、CO₂培养箱、滋养细胞、血细胞计数板等。
（要求与说明：分离单细胞和细胞计数的具体操作过程不作要求；培养过程中不更换培养液；培养液成分变化不利于细胞生长不作要求；不考虑加入激素后的体积变化等误差。实验条件适宜）
（1）完善实验思路：
①取细胞培养瓶若干个，均分为4组，编号为A、B、C、D，每组设置多个重复样本；
②实验分组：（用表格表示）（说明：“+”表示添加试剂）
_________
③按上表情况向各组加入等量且适量的试剂；
④从经克隆的小鼠肝癌细胞纯系中分离若干个单细胞，并分别向每个动物细胞培养瓶中加入_______个肝癌细胞，将各组置于___________培养；
⑤每隔一段时间，从4组动物细胞培养瓶中选取一个样本，用___________处理获得细胞悬液，并用血细胞计数板进行细胞计数；
⑥对所获得的实验数据进行统计分析。
（2）分析和讨论：
①在该实验中，是否肝细胞比肝癌细胞更适合作为实验材料? ___________，原因是____________________________________________________________。
②两种激素均能提高克隆形成率的原因可能是，胰岛素可促进细胞____________________；生长激素可刺激细胞生长，包括____________________。
③本实验所用的滋养细胞是使用射线处理____________________的小鼠成纤维细胞。

【推荐2】我国科学家利用体细胞诱导产生诱导多能干细胞（iPS细胞），并将其注入无法发育到成体阶段的四倍体囊胚中，最终获得克隆鼠X。经鉴定证实克隆鼠X确实从iPS细胞发育而来，并可繁殖后代。实验流程见下图，回答下列问题：

   

(1)从黑鼠体内获得体细胞后，对其进行的初次培养称为_____，培养的细胞在贴壁生长至充满培养皿底时停止分裂，这种现象称为_____。
(2)若需对移植前的胚胎进行性别鉴定，最好取囊胚中的_____细胞进行染色体分析。图中重组囊胚通过_____技术移入白鼠子宫内继续发育；为了提高成功率，代孕母鼠需进行激素处理，使其_____。
(3)若要利用图中的三只鼠（黑鼠作为体细胞核供体，灰鼠作为卵母细胞供体）通过核移植技术得到克隆鼠Y。不考虑环境因素的影响，克隆鼠X和克隆鼠Y的性状不完全相同，理由是克隆鼠X的基因全部来源于_____，克隆鼠Y的细胞核基因来源于_____，细胞质基因来源于_____。
(4)小鼠胚胎干细胞（ES细胞）可由囊胚的_____分离培养获得。iPS细胞与ES细胞同样具有发育全能性，有望在对人类iPS细胞进行定向_____后用于疾病的治疗。

【推荐3】基因工程技术在动物科学领域有广泛应用，其中嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）技术是一种新兴的免疫疗法，用于治疗某些癌症。简要流程是：先从患者体内分离出T细胞，利用基因工程技术将能识别肿瘤抗原的抗体基因与T细胞的受体基因拼接，再将拼接的基因导入T细胞，体外扩增后回输到患者体内。请回答下列问题：
(1)基因工程的核心步骤是_____，该过程需要的工具酶是______。
(2)在目的基因的首端和尾端需分别加上启动子和终止子，启动子是______识别和结合部位，终止子则起到____的作用。为保证目的基因被顺利切割，限制酶切割位点应加在PCR引物的______（填“3”或“5”）端。
(3)在体外扩增T细胞需要加入细胞培养液，该培养液通常含有_____（至少填3种）等物质。此外，气体环境也是细胞培养的重要条件，所需气体主要有_______。
(4)CAR-T细胞在患者体内能与肿瘤细胞密切接触，并使其裂解死亡。该事实说明细胞膜具有______的功能。
(5)简述CAR-T细胞免疫疗法相比传统化疗在治疗癌症时的优势：_______。（至少答出两点）