【推荐1】重组质粒pMM085常用来生产工程疫苗，但因含氯霉素抗性基因cat．有增加环境中抗药基因的风险。pKD46是一种热敏感型工具质粒，只能在低于37℃的温度条件下稳定存在，它携带的Red基因在阿拉伯糖的诱导下表达Red重组蛋白，通过体内同源重组进行靶向基因敲除，原理如图1所示。asd基因是编码细菌二氨基庚二酸（DAP）合成途径的关键酶，DAP是大肠杆菌细胞壁的主要成分，当asd基因缺失时，将导致菌株生长对DAP的依赖性，研究人员将质粒pMM085和pKD46导入asd缺失型大肠杆菌中，通过Red同源重组，将pMM085中的cat基因替换为asd基因，构建无抗性菌苗株，如图2所示。

(1)据图1分析，与传统转基因技术相比，Red体内同源重组具有的特点是__________________。
(2)无抗药性菌苗的构建过程中（图2），①中应先用钙离子处理，使asd基因缺陷型大肠杆菌处于感受态，然后将pMM085和pKD46转入大肠杆菌，经阿拉伯糖诱导后，电击导入asd基因，获得重组质粒。将②中获得的菌液采用______（方法）接种到LB培养基上，37℃培养得到单菌落。37℃培养的目的是____________（请答出两点）。
(3)挑取步骤③中获得的10个单菌落细胞进行PCR鉴定，得到电泳图谱（图3），电泳结果说明____________。科研人员在上述实验基础上重新提取③中质粒再转化宿主菌，经选择性培养基筛选后获得仅含重组质粒的单菌落，请简要写出筛选的思路：_______________________________。

【推荐2】某种物质S（一种含有C、H、N的有机物）难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解S。研究人员按照下图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解S的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙两种培养基，甲的组分为无机盐、水和S，乙的组分为无机盐、水、S和Y。回答下列问题：

(1)实验时，盛有水或培养基的摇瓶通常采用_____的方法进行灭菌。乙培养基中的Y物质是_____，按照功能分类，甲、乙培养基均属于_____培养基。
(2)实验中初步估测摇瓶M中细菌细胞数为2×10⁷ 个/mL，若要在每个平板上涂布0．1mL稀释后的菌液，且保证每个平板上长出的菌落数不超过200个，则至少应将摇瓶M中的菌液稀释_____倍。培养过程中定期取样并用_____的方法进行菌落计数，评估菌株增殖状况。
(3)在步骤⑤的筛选过程中，发现当培养基中的S超过某一浓度时，某菌株对S的降解量反而下降，其原因可能是_____（答出一点即可）。
(4)上述实验中，甲、乙两种培养基所含有的组分虽然不同，但都能为细菌的生长提供四类营养物质，即_____。

【推荐3】为了研发高效抑菌洗手液，科研入员检测了A、B、C、D四种抑菌物质对常见细菌的抑制效果。
（1）前期准备：配置 ___（填“牛肉膏蛋白胨”或“麦芽汁琼脂”）固体培养基，同时将若干相同大小的圆形滤纸片放入培养皿，采用____方法灭菌。
（2）实验步骤：从下列选项中选择合适的操作，并排序。____。
a将用抑菌物质或无菌水浸泡过的滤纸片放入平板中央
b用平板划线法接种细菌
c用稀释涂布平板法接种细菌
d将培养皿倒置放入恒温培养箱，37℃培养24小时
e测量抑菌圈的直径
（3）实验结果与分析：

实验菌	不同抑菌物质处理后形成的抑菌圈直径/mm
	A	B	C	D	阴性对照
金黄色葡萄球菌	21.6	22.5	23.1	32.5	0
大肠杆菌	17.0	22.3	19.7	27.0	0

注：阴性对照为无菌水
①本实验设置阴性对照的目的是____。
②根据实验结果判断，____物质的抑菌效果最好，理由是____。为进一步确定该物质在洗手液中的最佳添加浓度，请设计实验进行探究（写出实验思路即可）。____。

【推荐1】幽门螺杆菌（Hp）被世界卫生组织归类为1类致癌物，感染Hp会引起一系列胃部疾病。Hp能产生脲酶，催化尿素分解为NH₃和CO_2．研究人员从胃炎患者体内分离出Hp进行研究。回答下列问题：
(1)与刀豆相比，Hp脲酶基因表达过程的不同之处是______。
(2)研究者应以_____法将样品接种在以尿素为唯一______的固体培养基上，便于分离和计数。培养Hp的适宜环境条件是______。
(3)若培养基中有酚红指示剂，则在Hp菌落周围会出现红色环带，其直径与菌落直径的比值大小可代表_____大小。
(4)固定产脲酶菌时，将海藻酸钠和产脲酶菌的混合液注入CaCl₂溶液后，若形成的凝胶珠颜色很浅且硬度大、易开裂，可能的原因是_______；若凝胶珠偏大，则会导致_______，使酶的作用效率下降。

【推荐2】回答有关微生物和植物组织培养的问题：
(1)在生产过程中，发现葡萄酒变酸，表面观察到菌膜，造成此现象的生物是____________。腐乳外部有一层致密的“皮”，这是__________的匍匐菌丝形成的。制作泡菜时，有时坛内会长一层白膜，这是__________繁殖形成的。
(2)微生物的接种方法很多，如平板划线法、稀释涂布平板法、斜面接种等方法，虽然这些技术的操作方法各不相同，但是其核心都是要_______________，来保证培养物的纯度。
(3)从土壤中分离出分解尿素的细菌之后，对其进一步鉴定，要在以尿素为唯一氮源的培养基中加入_____________，如果指示剂变红，可初步鉴定该种细菌能够分解尿素。
(4)下图为花粉植株的培育途径

为了挑选到单核期的花药，通常选择_______________的月季花蕾。选择花药时一般通过镜检确定花粉发育时期，此时需要对花粉细胞核进行染色，采用的染色剂是___________，它可以将细胞核染成蓝黑色。①表示的生理过程是_____________________。

【推荐3】立体农业是利用群落的空间结构原理，为充分利用空间和资源而发展起来的一种农业生产模式。秧藕养鱼是一种池塘立体生态种养模式：水体的上层主要是以浮游植物为食物的鲢鱼，中层主要是以水生植物为食的草鱼，底层主要是以软体动物为食的青鱼。某秧藕养鱼立体农业生态系统的能量流动如图，图中的英文字母表示能量（单位：KJ）。

(1)据图可知，生产者输入该生态系统的能量值为___________，该生态系统的正常运行需要有机物的不断输入，原因是_________。
(2)图中字母d表示______________，植食性鱼类到肉食性鱼类的能量传递效率可表示为___________。
(3)鱼塘的人工管理十分重要，若种植的莲藕数量过多，会造成鲢鱼减产，从种间关系的角度分析，原因是___________。在夏季，可利用昆虫的趋光性，用___________诱捕池塘上空的飞蛾作为鱼类的补充食物。
(4)秧藕养鱼立体生态种养模式在生产实践中获得了较高的经济效益，原因是______________________。
(5)科研人员对水体中某种微生物种群数量进行调查，将样液稀释100倍，再采用_______________进行计数。实验用具规格和观察到的计数室中细胞分布如图所示，则1L样液中，该微生物的数量是____________个。为了计数活的酵母菌数量，计数前先将台盼蓝与样液1 : 2混合计数以区分细胞死活,相当于稀释了_______倍。

(6)若该立体农业生态系统长时间人不管理，从而使一些群落被另一些群落代替，则发生代替的可能原因是_____________。

【推荐2】纤维素酶对于能否实现乙醇工业化生产、处理服装面料等具有重要的意义，研究者初步筛选到能合成纤维素酶的菌株MC-1，以下是该菌株的鉴定过程。
(1)为了获得能合成纤维素酶的单菌落，可采用__________法将初筛菌液接种在固体培养基上，这种培养基属于______培养基。
(2)关于制备固体培养基的叙述，错误的是_____________

A．制作固体培养基时可以加入琼脂

B．操作的顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌

C．待培养基冷却至50℃左右时进行倒平板

D．待平板冷却凝固约5-10min后将平板倒过来放置

(3)实验过程中如何防止其他微生物的污染？________________________。
(4)下表的培养液pH均为4.8，若对MC-1中纤维素酶的活力进行测定，则不能选择表中的_______的培养液。

培养液	纤维素	纤维素酶	NaNO2	牛肉膏	K2HPO4	KCl	MgSO4·7H2O	FeSO4
A	25g/L	—	—	—	1g/L	0.5g/L	1g/L	0.01g/L
B	—	—	3g/L	—	1g/L	0.5g/L	1g/L	0.01g/L
C	25g/L	1μg/L	—	3g/L	1g/L	0.5g/L	1g/L	0.01g/L
D	25g/L	—	3g/L	—	1g/L	0.5g/L	1g/L	0.01g/L

(5)分离获得了具有较高纤维素酶活性的菌株MC-1，为了在此基础上获得纤维素酶活性更高的菌株，最可行的做法是_______________________________。
(6)某同学在培养过程中发现培养基上感染了几种细菌。若在以尿素为唯一氮源的培养基中加入________指示剂培养几种菌后，指示剂变红就可以鉴定其中含有能够分解尿素的菌；若在以纤维素为唯一碳源的培养基中加入________染料，培养后，培养基中出现透明圈，就可以鉴定其中含有纤维素分解菌。

【推荐3】某兴趣小组试图从土壤中分离分解尿素的细菌，流程图如下图所示。回答下列问题：

（1）在该实验中，配制培养基需要以_____为唯一氮源，该培养基中_____（填“需要” 或“不需要”）添加葡萄糖。
（2）接种尿素分解菌后的培养基需要倒置培养，原因是____________。三个培养皿中分别形成了54个、46个、50个菌落，则1g土壤样本中的活菌数为_____________个。
（3）纤维素是地球上最大的可再生资源，纤维素分解菌的研究也成了相关科学家关注的课题，纤维素酶是一种复合酶，一般认为至少有三种组分，其中_____________、____________使得纤维素分解成纤维二糖，___________将纤维二糖分解成葡萄糖。筛选纤维素分解菌可以用__________法，通过颜色反应直接对微生物进行筛选。

【推荐1】亚硝酸盐对人体有害，我国卫生标准规定，亚硝酸盐的残留量在肉制品中不得超过30mg/kg，酱腌菜中不超过20mg/kg。某研究小组进行了泡菜制作和其中亚硝酸盐含量测定。
请回答：
（1）泡菜腌制
（2）绘制标准曲线：分别取0 ml，0．5 ml，1 ml，3 ml、5 ml标准样液（每毫升相当于5．0亚硝酸钠），分别加入4．5ml氯化铵缓冲液、2．5 ml 60%乙酸、5 ml显色液（显色液中含有N-1-萘基乙二胺和________________），容量瓶中定容到25ml，然后在黑暗中静置25分钟，利用__________________分别测其在550nm的光照射下的光密度值（OD值），借助excel绘制如下标准曲线。该标准曲线的横坐标的名称和单位为__________________。

（3）样品处理与亚硝酸盐的测定：取泡菜10g制成匀浆，提取液经蛋白质沉淀处理后得到滤液200ml，冷却到室温，转移到容量瓶，加蒸馏水定容至250mL，取10mL样品溶液，加入____________，定容于25mL的容量瓶中。反应后，用相同的方法测定其OD值。
（4）分析与讨论
①若测得的OD值为0．1，则该份泡菜中的亚硝酸钠含量约为_____________mg/kg。在一定的腌制时间内，随着腌制时间的延长，泡菜中亚硝酸盐含量逐渐降低，是由于在__________和____________环境下亚硝酸盐被乳酸菌中的亚硝酸还原酶降解。
②泡菜腌制前，需用热水洗泡菜坛内壁两次的目的是_________________。泡菜腌制过程中，会产生有机酸、醇类和亚硝酸盐，其中醇类是由___________________进行厌氧呼吸产生。

【推荐2】工业上所说的发酵是指微生物在有氧或无氧条件下通过分解与合成代谢将某些原料物质转化为特定产品的过程。利用微生物发酵制作酱油在我国具有悠久的历史。某企业通过发酵制作酱油的流程示意图如下。

回答下列问题：
(1)米曲霉发酵过程中，加入大豆、小麦和麦麸可以为米曲霉的生长提供营养物质，大豆中的____可为米曲霉的生长提供氮源，小麦中的淀粉可为米曲霉的生长提供_______。
(2)米曲霉发酵过程的主要目的是使米曲霉充分生长繁殖，大量分泌制作酱油过程所需的酶类，这些酶中的____能分别将发酵池中的蛋白质和脂肪分解成易于吸收、风味独特的成分，如将蛋白质分解为____。米曲霉发酵过程需要提供营养物质、通入空气并搅拌，由此可以判断米曲霉属于____(填“自养厌氧”“异养厌氧”或“异养好氧”)微生物。
(3)在发酵池发酵阶段添加的乳酸菌属于_______(填“真核生物”或“原核生物”)；添加的酵母菌在无氧条件下分解葡萄糖的产物是_______。在该阶段抑制杂菌污染和繁殖是保证酱油质量的重要因素，据图分析该阶段中可以抑制杂菌生长的物质是_______(答出1点即可)。

【推荐3】牛奶是微生物生长的良好培养基。生鲜牛奶中的微生物情况反映了奶牛的健康状况，也影响奶制品的运输和贮藏。牛奶在饮用前都要经过巴氏消毒,以杀死有害微生物。为检测消毒前后牛奶中细菌含量变化情况，做如图所示操作。用无菌吸管从锥形瓶中吸取1mL生牛奶稀释液至盛有9mL无菌水的试管中，混合均匀，如此再重复2次。请回答下列有关问题：

（1）巴氏消毒的方法是________________________________，使用这种方法对生鲜牛奶进行消毒的好处是_______________________。
（2）图中所示方法为稀释培养法，理想情况下，培养一段时间后可在培养基表面形成菌落。要计数0.1mL最终牛奶稀释液中活菌数量，应选择的工具是上图中的_________；运用这种方法统计的结果往往较实际值偏小，原因是___________________________________________。
（3）消毒后的牛奶中绝大部分细菌被杀死，若继续用该方法检测消毒后的牛奶中细菌的数量，则在操作步骤上应做什么改动？________________________________________________。
（4）从生牛奶取样培养得到的菌落中，混有各种杂菌，从中检测出大肠杆菌的方法是在培养基中加入______________，菌落具有金属光泽特征的可以认定为大肠杆菌。
（5）人们利用酵母菌酿制果酒、醋酸菌制醋、毛霉制作腐乳，以及乳酸菌制作泡菜。
①可以依据是否_______将酵母菌、毛霉与以上其他微生物区分开。
②没有经过严格的灭菌过程。却能够获得传统发酵产品，请说出两点理由。_________________、_______。
③自然界筛选的菌种需要进一步经过_____处理，才可能获得满足人类要求的能够高效降解石油成分的微生物。该育种方式的不足是：具有一定的盲目性，需要大量处理供试材料。