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题型:非选择题-解答题 难度:0.4 引用次数:677 题号:10356230
截止2020年5月,新冠病毒(2019-nCoV)已在全球210多个国家和地区蔓延传播,引发了全球性的“防疫大战”。在防疫战中,尽早确诊并及时隔离是防止新冠病毒过度传播的有效手段。在现有的检测新冠病毒的方法中,最常用的是“荧光PCR法”。其基本原理是:将新冠病毒RNA逆转录为DNA,通过采用多重荧光RT一PCR技术,以2019—nCOV的两个独立基因ORF1ab基因和N基因的保守区为靶位点设计特异性的引物和一定量的荧光标记的DNA探针,单管双检同时测定新型冠状病毒两个独立基因,消除由于病毒变异带来的漏检风险。
请回答下列问题:
(1)“荧光PCR法”所用的试剂盒中通常都应该含有:______________________、引物、四种脱氧核苷酸、缓冲体系。
(2)如果要成功将上述两个独立基因分别扩增出来,则在试剂盒中的引物应该有___________种,下图为“基因ORFlab”对应的cDNA片段结构示意图,则与之对应的引物结合的部位应该是图中的___________(用图中数学作答)。

(3)在检测过程中,随着PCR的进行,反应产物不断累积,“杂交双链”荧光信号的强度也等比例增加。可通过荧光强度变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线图(如图)。

①“平台期”出现的最可能原因是:______________________
②理论上,在检测过程中,有荧光标记的“杂交双链”出现,则说明检测结果呈___________(填“阴”或“阳”)性,但为了保证检测结果的准确性,一般会设定“双链荧光强度”的阈值(如图虚线),即达到或超过阈值时才确诊。现有甲、乙两个待检样本,在检测过程中都出现了上述形态的曲线,但甲的a点比乙的a点明显左移。请给这种结果做出科学合理的解释(试剂盒合格且正常,操作过程规范且准确):______________________
(4)某些“阴谋论者”认为新冠病毒是“生物武器”,但这显然是不攻自破的,因为任何热爱和平的国家、组织和个人都不可能去研究这类“人类公敌”。早在1998年,中美两国元首在关于《禁止生物武器公约》议定书的联合声明中,重申:______________________

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非选择题-解答题组 | 较难 (0.4)
【推荐1】抗癌药物紫杉醇是从红豆杉树皮中提取出来的生物活性物质,与化学药抗癌原理不同的是,紫杉醇能与细胞内的微管蛋白结合,使微管在细胞内大量积累,这些微管的积累导致细胞停留在G2期和M期直至死亡。由于红豆杉生长缓慢,资源短缺,生长过程中易发生立枯病、茎腐病、白绢病、疫霉病等病害,使紫杉醇的提取受到了极大限制。科研人员正试图通过多种方法提高紫杉醇的产量。
I.利用组织培养技术
有研究数据表明,通过下图所示的方法来生产紫杉醇,组培细胞中的紫杉醇含量是野生成年红豆杉树皮中含量的12倍。组织培养已成为扩大紫杉醇来源的一条重要途径。
   
(1)紫杉醇属于红豆杉属植物体产生的_____________代谢产物。紫杉醇能促进微管聚合并使之稳定,阻碍了____________的形成,从而阻碍肿瘤细胞的分裂,直至死亡。
(2)外植体常选取红豆杉植物的茎尖,其优点是____________(写出两点)。图中①过程称为____________。若再利用上图中愈伤组织进一步获得红豆杉植株的过程中,发现愈伤组织只分裂而不能分化出芽和根,则最可能的原因是____________
Ⅱ.利用微生物发酵途径
植物体内普遍存在内生真菌,它们可以产生与宿主相同或相似的生物活性物质。近年来,研究人员从红豆杉树皮中分离到了能产生抗癌药物紫杉醇的内生真菌。这一发现为解决红豆杉资源短缺,寻找紫杉醇供应问题,开辟了一条用微生物发酵生产的新途径。具体过程如下:
(3)菌株的分离与纯化
取红豆杉的老树皮,_____________后,削去表层从内部切取小块,斜插入半固体培养基中。28℃培养3-7d,挑取向培养基基质生长的菌丝体于固体培养基中,纯化2-3次。培养时,通常会添加一定浓度的青霉素和链霉素,主要作用是_____________
(4)菌株的鉴定
①形态学鉴定:将分离的菌株置于固体培养基上,经培养后观察_____________
②分子生物学鉴定:提取菌株基因组DNA作为_____________,扩增ITS序列(存在于真核生物中的一段rDNA转录间隔区,被广泛应用于真菌分类、鉴定),通过____________检测并回收扩增产物,将纯化后的产物测序,与_____________比对分析。
发酵培养:将待培养菌株接种至固体培养基,培养4-5d,无菌生理盐水洗下孢子,接种至液体培养基振荡培养。
(5)紫杉醇的提取:发酵结束后,离心收集上清液,所得菌体用4层纱布挤压过滤,滤后纱布拧干并收集拧出液。合并上清液与纱布过滤及拧出液,____________至原过滤体积1/10后,利用紫杉醇易溶于有机溶剂的特性,采用_____________的方法进一步分离纯化。
2023-10-11更新 | 375次组卷
【推荐2】人血清白蛋白(HSA)具有重要的医用价值,在临床上需求量很大,下图是通过基因工程技术获取HSA的两条途径,图中报告基因表达的产物能催化无色物质K呈现蓝色。据图回答下列问题:

(1)若要体外获得大量的HSA基因,可采用PCR技术进行扩增。扩增的前提是要根据___________设计引物,而后经过变性、______________________循环对目的基因进行扩增。
(2)过程①需将植物细胞与农杆菌混合后共同培养,这种导入目的基因的方法是___________;过程②还须转接到含___________的培养基上筛选出转化的植物细胞。
(3)要想通过转基因绵羊分泌的乳汁来生产HSA,需将HSA基因与___________等调控组件重组到一起,过程③再通过___________技术将其导入绵羊受体细胞。
(4)为检测HSA基因的表达情况,可提取受体细胞的____________,用抗血清白蛋白的抗体进行杂交实验。若_____________表明转基因绵羊体内出现了HSA。
2024-01-29更新 | 112次组卷
非选择题-解答题 | 较难 (0.4)
名校
【推荐3】白花蛇舌草是我国民间常用的中草药,科学工作者用RPMI-1640培养基配制出不同浓度的白花蛇舌草提取物(HDE)工作液,分别处理人白血病细胞株(K562),测得线粒体内膜跨膜电位的变化如图1,测得凋亡抑制基因Survivin+和原癌基因Bcl-2表达的变化情况如图2。

FL1/FL2比值越大,说明跨膜电位下降越显著
图1: HDE对线粒体内膜跨膜电位的影响             图2:HDE对基因表达的影响
(1)K562细胞是由于________基因发生突变,导致正常细胞的生长和分裂失控而变成癌细胞。
(2)图1中HDE处理________h后K562细胞内线粒体内膜跨膜电位下降最显著。跨膜电位下降影响线粒体的功能,导致________合成停止,并释放凋亡诱导因子,最终引起细胞的凋亡或死亡。
(3)收集用HDE处理的K562细胞中Survivin和Bcl-2的mRNA,在________酶的作用下合成cDNA,再通过________技术扩增cDNA,然后测定其含量,结果如图2所示。其中对照组的处理是使用等量________。β-Actin基因在各组织和细胞中的表达相对恒定,在PCR中的作用是________。从图2数据可知,用HDE处理2周的K562细胞中Survivin和Bcl-2的表达________未经处理的细胞。
(4)综上所述,HDE可能通过________,抑制抗凋亡基因的表达,从而________K562白血病细胞增殖。
(5)如果白花蛇舌草没有明显的毒副作用,依据本实验的结果,用它制药的最佳用量是使人体的血药浓度达到________ml/L。
2016-11-26更新 | 546次组卷
共计 平均难度:一般