【推荐1】请回答基因工程方面的问题：
（1）基因工程中目的基因的来源是_________________________和____________________。
（2）在免疫学中把腺病毒基因组的关键区域“删掉”，再把其它对人类更危险的病毒“装上”，这样腺病毒就会像小车一样，绑着一个危险病毒，在人类的免疫系统里“游街”，让免疫系统记住该危险病毒的样子，生成抗体。腺病毒作为基因工程的运载体，进入人体细胞需借助____________（填“显微注射技术”或“细胞自身的内吞作用”）。它除对靶细胞具有较高的转化效率、在宿主细胞中不会引起免疫排斥反应外，还应该具有运载体具备的其它条件_________________________（列举两点）。
（3）基因工程中的单酶切法是指某一种限制酶可将含有目的基因的DNA片段和运载体质粒进行切割；双酶切法是指两种限制酶分别对含有目的基因的DNA片段和运载体质粒进行切割。请分析当用DNA连接酶进行连接时，单酶切法产生的由2个DNA片段之间连接产物有________________________三种情况；双酶切法较单酶切法的优势在于________________________。

【推荐2】人血清白蛋白（HSA）在临床上的需求量大，由于其来源有限和有生物污染的风险，重组人血清白蛋白（rHSA）成为其重要的替代品。科研人员将HSA基因转入酵母菌细胞，获得了重组人血清白蛋白。下图为酵母菌基因改造以及工业化发酵生产rHSA的过程示意图，其中I、II、III、IV是四种不同的限制酶，其各自识别的酶切位点如下表所示。回答下列问题：

限制酶	I	II	III	IV
识别序列及切割位点

(1)利用PCR技术扩增HSA基因需要设计引物，引物的化学本质是____________。
(2)构建的基因表达载体中需要使用酵母菌蛋白基因的启动子AOX，原因是____________。将受体酵母菌置于含有____________的培养基中进行筛选培养，以获得能表达HSA的细胞。
(3)图中启动子处存在RNA聚合酶结合位点序列，推测该序列的作用是____________。科研人员将HSA基因插入质粒中时，最好选择限制酶______________进行共同切割，原因是_____________（答出2点即可）。

【推荐3】研究者将动物体内的目的基因导入大肠杆菌的质粒中保存，该质粒含有氨苄青霉素抗性基因(Amp^R)、 LacZ 基因及一些酶切位点，其结构和操作步骤如下图所示。

(1)大肠杆菌等微生物是基因工程中研究最早、应用最广泛的受体细胞，这是因为微生物具有__________________等优点(至少两点)。一般使用__________种限制酶处理质粒和含有目的基因的DNA片段，这样做的优点是_______________________。
(2)步骤③中加入的物质是_______，目的是___________________。
(3)将连接产物导入大肠杆菌，先用__________处理大肠杆菌，目的是____________。
(4)酶切位点选择在LacZ基因上，目的是用于区分_______________的大肠杆菌，依据是_________________。

【推荐1】为研究干旱胁迫基因LEA和VOC对甘蓝型油菜油脂的积累机制，科研人员构建了两个基因表达载体。其中基因LEA与荧光素酶基因（Luc）构建成基因表达载体甲，基因VOC和标记基因构建成基因表达载体乙，相关序列及酶切位点如图所示。

(1)利用PCR扩增LEA基因时，需要在反应体系中添加的有机物质有引物、模板、___________还需要在引物的___________（填“3´端”或“5´端”）添加限制酶识别序列，添加序列对应的限制酶是___________，选择上述酶的依据是___________。
(2)为了构建基因表达载体甲，依据图中已知碱基序列，在PCR扩增仪中加入的引物的碱基序列为_________，扩增_____________代后会得到等长的8条DNA片段。
(3)农杆菌转化甘蓝型油菜细胞时，T-DNA的作用是___________，该过程发生的变异类型为___________
(4)乙酰-CoA羧化酶基因（AC）是油脂合成过程的关键酶基因，甘油三酯酯酶基因（ATGL）是油脂分解过程的关键酶基因。将基因表达载体甲、乙分别导入植物细胞培养成转基因植物A、B，在干旱胁迫的环境下培养两种转基因植物和正常植物，分别检测植物体内AC和ATGL基因的表达水平，结果如下图。

①在分子水平上，用____________方法检测AC酶和ATGL酶的含量可得到上述结果。
②基于以上研究，干旱胁迫基因LEA和VOC在甘蓝型油菜油脂积累中的机制是___________。

【推荐2】科学家将人的生长激素基因与大肠杆菌的DNA分子进行重组，并成功地在大肠杆菌中得以表达，但在进行基因工程的操作过程中，需要同特点的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选，已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是-G↓GATCC-，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是-G↓GATC-，请据图回答：

（1）过程①表示的是采取_____的方法来获取目的基因。
（2）根据图示分析，在构建基因表达载体过程中，应用限制酶____切割质粒，用限制酶____切割目的基因。用限制酶切割目的基因和运载体后形成的黏性末端通过_____原则进行连接。
（3）人的基因之所以能与大肠杆菌的DNA分子进行重组，原因是________。
（4）人体的生长激素基因能在细菌体内成功表达是因为______。写出目的基因在细菌中表达的过程_________。
（5）将得到的大肠杆菌B涂布在一个含有氨苄青霉素的培养基上，能够生长的，____（填能或不能）说明一定导入了重组质粒，以为________________。

【推荐3】为了研究低温诱导对某基因的启动子P活性的影响，科研人员进行了启动子P的PCR提取、特定表达载体的构建和转基因烟草的功能鉴定。该基因及其启动子P的结构及相应限制酶的切割位点如下图所示，图中浅灰色区域碱基序列是已知的，启动子P（图中深灰色区域）及上游碱基序列未知，片段Ⅰ和片段Ⅱ中的字母A~F均表示引物。请回答下列问题。

(1)启动子是_____________识别和结合的部位。不能直接根据片段Ⅰ扩增启动子P的原因是_____________。
(2)为了能扩增正常启动子P，科研人员先用__________酶处理上图中的片段Ⅰ，使片段Ⅰ成为环状DNA；再将环状DNA用酶_____________处理得到了片段Ⅱ，如下图所示。根据片段Ⅱ，用引物_____________组合（用C、D、E、F表示）能扩增出启动子P。

(3)已知卡那霉素可抑制烟草细胞的生长，基因M可在烟草的根部正常表达，其表达产物可将X-Gluc水解生成蓝色物质。将启动子P和基因M结合并与含有卡那霉素抗性基因的Ti-质粒重组构建基因表达载体。将表达载体加入含有烟草细胞的培养基中，筛选出所需的烟草细胞，然后经过培养获得转基因烟草植株。将上述转基因烟草植株分为A、B两组，A组在常温（25℃，对照组）下培养，B组在低温（4℃，实验组）下培养，一段时间后取A、B的幼根，浸入适量_____________溶液中，观察烟草细胞中基因M的表达情况（表达强度越大，细胞表现的蓝色越深）。若A、B组的结果分别为_____________，则说明低温抑制启动子P的功能。

【推荐1】回答下列关于细胞工程和基因工程的问题：
(1)植物内生菌是一定阶段或全部阶段生活于健康植物的组织和器官内部的真菌或细菌。放线菌是一种常见的植物内生菌，能抑制病原菌的生长。研究人员利用两种不同类型的放线菌获得新型工程菌的过程如下：

①制备工程放线菌需要先制备原生质体，制备放线菌的原生质体能否使用纤维素酶和果胶酶？________，理由是________。
②制备的原生质体能否置于清水中待用？________，原因是________。
(2)某真菌的 W基因可编码一种高效降解纤维素的酶，已知图中 W基因转录方向为从左往右。为使放线菌能产生该酶，以图中质粒为载体进行转基因。表中是几种限制酶识别序列和切割位点。

限制酶	BamH I	EcoRI	MfeI	KpnI	HindⅢ
识别序列和切割位点	G↓GATTC	G↓AATTC	C↓AATTG	GGTAC↓C	A↓AGCTT

①为了将目的基因与质粒重组且避免质粒和目的基因自身环化，最好选择________处理质粒，用________处理目的基因。
②将重组质粒导入放线菌时，需要用________处理放线菌，目的是________。初步筛选导入目的基因的放线菌，可以将放线菌置于含________的培养基中培养。

【推荐2】新冠肺炎病毒是一种RNA病毒，其表面的S蛋白是主要的病毒抗原，下图是利用基因工程生产2019-nCoV病毒疫苗的部分流程图，回答下列问题：

（1）获得S基因的方法为：提取病毒的RNA并利用特定的酶对其进行切割获得控制合成S蛋白的RNA片段，并以该片段为模板，通过逆转录过程得到相应的DNA片段即为S基因，该步骤中用于切割RNA的酶_________（填“是”或“否”）限制性核酸内切酶，理由是_____________。
（2）扩增S基因时需要根据________设计一对引物，为了使扩增后的S基因能够与载体相连，需要在引物的一端连上特定的______________。
（3）构建基因表达载体是基因工程的核心步骤，该步骤一般用两种不同的限制酶切割质粒和目的基因，目的是_________________。
（4）步骤②常需要用Ca²⁺处理大肠杆菌，其目的是__________________________。

【推荐1】骨缺损治疗是临床工作的一大挑战。骨髓间充质干细胞常用于骨和软骨的再生，但不适合长期培养。科学家基于CRISPR/Cas9同源定向修复（HDR）机制，将永生化癌基因SV40T靶向整合到小鼠Rosa26基因座，建立了永生化的BMSC，使用腺病毒载体转染BMP-9后可以有效地诱导异位成骨。HDR机制的原理是：用单个具有引导作用的sgRNA引导Cas9核酸酶对DNA进行定点切割（图1），DNA双链发生断裂后，在同源模板DNA存在时，通过HDR途径，根据模板供体DNA序列在预定位点精确整合DNA序列（图2）。回答下列问题：

（1）sgRNA之所以能引导Cas9核酸酶对DNA进行定点切割，是因为其序列能与小鼠DNA特定位点（靶位点）进行____________。据此分析，需确定靶位点序列在基因组中唯一性的原因是___________________________。
（2）运用CRISPR/Cas9系统时，可将sgRNA和Cas9mRNA元件导入小鼠的受精卵，使用的方法是____________。还可通过腺病毒将CRISPR系统运送到细胞内，腺病毒能够感染分裂和非分裂细胞，且不会将其DNA整合到宿主细胞基因组中，为基因治疗设计的腺病毒应具备的特点是_______________________（至少答出两点）。
（3）可提取小鼠的基因组DNA作为模板，利用PCR技术检测SV40T基因是否成功整合到小鼠Rosa26基因座中。利用PCR技术扩增目的基因时应使用____________种引物，需要合成引物的原因是__________________。

【推荐2】回答下列关于遗传信息的表达和生物工程问题：
图（1）为限制酶EcoRⅠ的识别序列，图（2）表示质粒，图（3）表示目的基因及限制酶切点。请回答下列问题：

（1）图（1）中限制酶EcoRⅠ的特点是______。
（2）为了使目的基因和质粒定向连接并且有利于受体细胞的筛选，提高重组效率，应该选择的限制酶是______。
（3）如果大肠杆菌是受体细胞，则其体内应不含______基因，以利于筛选出含重组质粒的受体菌。按此要求，成功导入重组质粒的大肠杆菌具有的特点是______
A．能在含有青霉素的培养基上生长
B．能在含有四环素的培养基上生长
C．在含有青霉素的培养基上不能生长
D．在含有四环素的培养基上不能生长
（4）为了获得含重组质粒的单个大肠杆菌的菌落，常用的接种方法是______。
（5）若该目的基因合成的是脂肪酶，在生产提纯分泌型脂肪酶工程中，加入硫酸铵使酶与其他杂质分离，该过程属于酶分离提纯步骤中的______。
A．过滤酶
B．干燥酶
C．层析酶
D．沉淀酶

【推荐3】某真菌的W基因可编码一种可高效降解纤维素的酶，已知图乙中W基因转录方向是从左往右。为使放线菌产生该酶，以图甲中质粒为载体，进行重组DNA技术的相关操作。回答下列问题：

限制酶	BamHⅠ	EcoRⅠ	MfeⅠ	KpnⅠ	HindⅢ
识别序列及切割位点（5′-3′）	G↓GATTC	G↓AATTC	C↓AATTG	GGTAC↓C	A↓AGCTT

(1)若要从土壤中筛选出纤维素分解菌，需要配制以为_____________唯一碳源的固体培养基并进行灭菌处理。为便于筛选可在培养基中加入____________染料。
(2)限制酶主要是从__________________（填“真核生物”或“原核生物”）中分离纯化出来的。结合上述图表分析应使用限制酶_________切割图甲中质粒，使用限制酶切割______图乙中含W基因的DNA片段，以获得能正确表达W基因的重组质粒。
(3)与质粒中启动子结合的酶是______________。启动子通常具有物种特异性，在质粒中插入W基因，其上游启动子应选择____________（填生物类型）启动子，有利于W基因在目的菌中的表达产生高效降解纤维素的酶。
(4)W基因转录的模板链是__________（填“甲链”或“乙链”）。利用PCR技术对W基因进行扩增时子链延伸的方向是______________。