【推荐1】胚胎工程技术包含的内容很丰富，如图是胚胎工程技术研究及应用的相关情况，其中供体1是良种荷斯坦高产奶牛，供体2是黄牛，请据图回答下列问题。

（1）应用1中获得的小牛，其遗传物质来源于________，细胞B的名称是__________。
（2）应用2中牛完成体内受精的场所是_________，刚种植在子宫内的胚胎其发育程度一般为________，胚胎种植后可以通过___________从母体获得正常发育所需要的物质。
（3）应用3中细胞C、D分别取自__________、___________。
（4）应用4中通过__________技术获得二分胚①和②，同时，可以通过取样________进行分子水平的早期胚胎性别鉴定；也可以在细胞水平上通过对_______的分析进行性别鉴定。

【推荐2】已知青蒿素衍生物Art具有抗肿瘤的作用，且随着Art浓度的增加，对海拉细胞集落形成和细胞增殖的抑制作用逐渐增强。海拉细胞在培养过程中会出现贴着培养瓶壁生长的特征，集落是指贴壁生长的单个细胞增殖6代以上形成的细胞群体，肉眼可见。海拉细胞培养后，经显色剂处理，在分光光度计上测定波长为490nm的光密度值(OD 值)，计算细胞抑制率，细胞抑制率=（1-实验组OD值/对照组OD值）×100%，细胞的半数抑制率简称IC50，即为药物治疗的用药浓度。为验证Art的作用，请完善下列实验思路，预测实验结果并进行分析与讨论。
（要求与说明：细胞和集落计数、染色等具体过程不作要求，所用试剂的剂量不作要求，     营养均满足要求，各种条件适宜）
（1）完善实验思路：
① _______________________________。
②将已知细胞密度的海拉细胞悬液，用移液管加入到各个含细胞培养液的培养瓶中，并加入上述溶液，然后置于适宜的环境中培养3周。
③___________ 。
④各培养瓶用酶液处理集落使细胞分散，___________________________________________________。
⑤对所得数据进行统计与处理。
（2）预测实验结果___________（以坐标曲线图表示实验结果，要求标出IC50 的药物浓度）：
（3）分析与讨论：
①Art 能使海拉细胞的集落数下降的原因之一是影响其贴壁生长，从细胞水平分析，可能的原因是_____。
②除了上述实验方法外，测量细胞数量的多少还可用的检测方法是_____________________。已知Art 也能促进海拉细胞的衰老和凋亡，细胞衰老时细胞核的特征变化为________________。
③已知细胞初始浓度为200个/5mL至800个/5mL 浓度间，上述实验对照组产生的集落数与细胞初始培养浓度呈线性关系，当细胞初始培养浓度高于800个/5mL 时出现线性关系向下偏离现象如下图所示，分析偏离线性关系的原因是____________。

【推荐3】阅读下面的材料，完成（1）~（4）题。
CAR-T细胞疗法上市2周年了，它改变了癌症治疗吗？
2017年8月30日，美国食品药品管理局宣布由诺华公司制造的CAR-T疗法细胞治疗产品tisagenlecleucel正式获批上市，用于治疗25岁以下急性淋巴细胞白血病的复发性或难治性患者，由此CAR-T细胞治疗正式进入到人们的视线当中。目前CAR-T疗法上市已经超过了2周年，它对癌症的治疗产生了怎样的影响呢？
CAR-T细胞的全称是：

英文	翻译	简写
Chimeric	嵌合	C
Antigen	抗原	A
Receptor	受体	R

CAR-T细胞疗法是嵌合了抗原受体的T细胞疗法。因为癌细胞会表达和正常细胞不同的抗原，所以在实验室里制备可结合这些抗原的受体，让它在T细胞中表达，从而可以直接找到癌细胞并进行杀灭。相当于给T细胞加了一个可以定向导航追踪癌细胞的GPS。
当然在这个过程中，除了需要找到癌细胞的特征信息并传递到T细胞内让它可以识别肿瘤细胞，我们还需要在体外对改造后的T细胞进行培养，使其达到足够的数量，再将其回输到患者体内进行治疗。这就是CAR-T细胞疗法的整个过程。
截止到目前，全球范围内获批的2款CAR-T细胞治疗产品治疗的癌症都属于血液瘤范畴，指的是血液细胞发生癌变引起的肿瘤。最新的研究结果显示：在B细胞急性淋巴瘤患者中，很多患者在接受单次细胞治疗回输后便获得了长期有效的持续缓解；在接受治疗后，总体有60%~93%的患者获得了完全缓解。而传统疗法在血液瘤中仅有不到50%的缓解率。
然而这些并不是CAR-T细胞疗法的最终归宿。血液肿瘤只占恶性肿瘤中的很小一部分，目前对成年人健康危害最大的还是肺癌、胃癌等实体肿瘤。由贝勒医学院主导的一项针对神经母细胞瘤的治疗中，有27%的患者得到了完全缓解；另一项在肝癌、胰腺癌和结直肠癌中的研究中，肿瘤缩小的患者达到了13%，这表明CAR-T细胞疗法在实体肿瘤治疗中也有一定的作用，但仍需要进一步的优化。
相对于血液肿瘤而言，实体肿瘤中CAR-T细胞疗法需要解决的难题主要有：实体瘤特异性靶点数量有限、CAR-T细胞无法有效浸润到实体瘤中、CAR-T细胞的持久性不足等。
（1）CAR-T细胞与人体中原有的T细胞相比，其优越性在于___________________。
（2）CAR-T细胞的制备离不开转基因技术，请简要说出制备CAR-T细胞的基本技术流程_________。
（3）对CAR-T细胞进行体外培养，能否直接用动物细胞培养的方法？请说出理由_________。
（4）根据文中所提到的实体肿瘤治疗效果差的原因，请你提出一条改进措施_________。

【推荐1】马术比赛被称为贵族运动。英国纯血马是世界顶级马术比赛的常用马种，其数量少，生育力低。可利用下图1质粒和图2含有目的基因的外源DNA，结合其他现代生物技术，有效提高优质马的生育效率和品质。请回答下列问题：

（l）若将图l中质粒和图2中含目的基因的外源DNA通过限制酶处理后，进行拼接形成重组质粒，那么最好应选用限制酶_____。对符合设计要求的重组质粒用Sma I、EcoR I和HindⅢ三种酶同时进行酶切，假设所用的酶均可将识别位点完全切开，则可得到_____种DNA片段。若仅选用EcoR I处理后，形成重组质粒，经检测，部分含有重组质粒的受体细胞中目的基因不能正确表达，最可能的原因是_____。
（2）为了提高优良雌性个体的繁殖潜能，用_____激素处理适龄纯血母马，使其一次性排出比自然情况下多几倍到几十倍的卵子。体外受精前要对精子进行一定的处理，使其_____。为取得同卵双胎或多胎，可以在胚胎发育的_____期用机械方法进行胚胎分割。
（3）随着动物克隆技术的发展，人们可以将纯血马的细胞核移入其他马的_____细胞中，将其激活并发育成胚胎，植入代孕母马体内。为保证胚胎移植的成功，胚胎的供体和受体应保持_____。

【推荐2】自然界中能够产生生物荧光的酶的统称为荧光素酶。荧光素酶及其合成基因在生物研究中有着广泛的利用。
(1)荧光素酶基因常被作为基因工程中的标记基因，其作用是将___________________筛选出来。
(2)下表为4种限制酶的识别序列和酶切位点，右下图为含有荧光素酶基因的DNA片段及其具有的限制酶切点。若需利用酶切法（只用一种酶）获得荧光素酶基因，最应选择的限制酶是_________。

(3)利用PCR技术扩增荧光素酶基因是利用___________的原理，使荧光素酶基因数量呈_____方式增加。
(4)迄今为止，可将上述具有荧光素酶基因的运载体导入动物细胞的技术，应用最多的、最有效的是________。经一系列步骤，将所获得的胚胎早期培养一段时间后，再移植到雌性动物的_____或子宫内，使其发育成为具有新性状的动物。
(5)囊胚阶段的胚胎进行胚胎分割，可以提高胚胎的利用率，但在进行分割时应注意___。
(6)荧光素酶在ATP的参与下，可使荧光素发出荧光。生物学研究中常利用“荧光素－荧光素酶发光法”来测定样品中ATP的含量。某研究小组对“测定ATP时所需荧光素酶溶液的最佳浓度”进行了探究。
【实验材料】1×10^－8mol/LATP标准液、缓冲溶液、70mg/L荧光素溶液（过量）、浓度分别为10、20、30、40、50、60、70mg/L的荧光素酶溶液。
【实验结果】见下图。

【实验分析与结论】
①实验过程：为使结果更加科学准确，应增设一组_____________作为对照。除题目已涉及的之外，还需要严格控制的无关变量有________________（至少写出一个）。
②实验结果：由图C可知，___________点所对应的荧光素酶浓度为最佳浓度。
(7)食品卫生检验中，可利用上述方法测定样品中细菌的ATP总含量，进而测算出细菌的数量，判断食品污染程度。测算的前提是每个细菌细胞中ATP的含量___。

【推荐3】组织型纤溶酶原激活剂(tPA)在人体纤溶和凝血的平衡调节中发挥着关键性的作用，现欲利用基因工程技术将tPA基因导入奶牛成纤维细胞中，并通过核移植技术获得克隆转基因奶牛，最后从奶牛乳汁中获取组织型纤溶酶原激活剂。请回答：
（1）为获得大量tPA基因，可将其连接到______________上，通过大肠杆菌培养扩增。构建重组DNA分子时，需要用到的工具酶有__________________________，为了便于检测目的基因是否成功导入受体成纤维细胞中，重组DNA分子上要有________。
（2）核移植时，需将成纤维细胞的细胞核移人去核卵细胞中获得重组细胞，部分原因是卵细胞的细胞质具有调控__________发育的作用。通过__________技术,将重组细胞培养成早期囊胚。将早期囊胚移植到代孕受体之前需要经过__________处理，以便成功植入或着床。
（3）为了繁殖更多后代，可以通过胚胎分割技术，产生同卵多仔。下列关于该技术的叙述,错误的是_____。
A.增加胚胎数量，快速繁殖                       
B.可以采用相关酶处理卵裂球
C.该技术涉及显微操作技术                       
D.同卵多仔的表现型一定相同

【推荐1】据统计，维生素A缺乏每年导致67万名五岁以下儿童死亡。因此科学家研发了一种通过基因工程使得稻米的食用部分胚乳含有维生素A的前体——胡萝卜素的大米，胡萝卜素在人体内会转化成维生素A，可以缓解人体维生素A缺乏。这种大米因胡萝卜素含量极高因而呈现金黄色，被称为“黄金大米”。
黄金大米的制作过程应用了根癌农杆菌介导法进行转基因操作，将能够合成胡萝卜素的酶的基因重组后导入大米的基因组中，具体原理如下图所示。

(1)图中Y代表的过程是__________________。
(2)图中Z过程需要用到__________________________技术。
根癌农杆菌介导法转基因需要利用根癌农杆菌的Ti质粒完成，下图是Ti质粒的具体组成。

(3)为了便于筛选，若将胡萝卜素基因整合进入Ti质粒时，如果只能选一种限制酶，则应使用__________________（限制酶Ⅰ，限制酶Ⅱ，限制酶Ⅲ）进行酶切然后连接。下列有关限制酶的叙述正确的是_______
A．从反应类型来看，限制酶催化的是一种水解反应
B．限制酶的活性受温度、pH的影响
C．一种限制酶只能识别双链DNA中某种特定的脱氧核苷酸序列
D．限制酶识别序列越短，则该序列在DNA中出现的几率就越小
当整合后的Ti质粒进入农杆菌后，下表为培养农杆菌用的YEB培养基。

牛肉膏	酵母膏	蛋白胨	蔗糖	MgSO4·7H2O	水	琼脂	pH
5g	1g	5g	5g	0．4g	1L	15g	7．4

(4)据表分析农杆菌的同化作用类型为________型。
(5)该培养基从物理形态上分应属于________培养基。培养基配制完成后需要进行________。目的是_________________。
(6)为了筛选排除不含有Ti质粒的农杆菌，可以在培养基中加入________________________进行筛选。

【推荐2】Cry蛋白是苏云金芽孢杆菌的主要杀虫蛋白，CrylIa和Cry2Ab是两种Cry蛋白。如图是由CrylIa基因的结构域Ⅰ与Cry2Ab基因的结构域Ⅱ和Ⅲ融合后的杂交分子构建表达载体的过程示意图。质粒上限制酶旁括号内的数字表示限制酶切割位点与复制原点的距离（1kb表示1000个碱基对）。相关限制酶的识别序列及切割位点如下表，回答下列问题：

限制酶	EcoRⅠ	XbaⅠ	Sau3AⅠ	BamHⅠ	BclⅠ
识别序列及切割位点	G↓AATTC	T↓CTAGA	↓GATC	G↓GATCC	T↓GATCA

(1)过程①②③的原理是______。过程①②除需要图中的物质外，还需要4种脱氧核苷酸、______，过程①需要的引物是______。
(2)用双酶切法构建质粒B，则质粒B比质粒A多了______个碱基对。
(3)过程⑥表示将重组质粒导入大肠杆菌，其目的是____________。
(4)以下为图中的杂交分子在细胞中合成的mRNA部分序列示意。该mRNA控制合成的多肽链含有______个氨基酸。若某种原因使该mRNA中U¹缺失，则造成的直接后果是控制合成的多肽链比原多肽链少了______个氨基酸。（AUG：起始密码子，UAA：终止密码子）…GCAUGAA…（中间省略270个碱基）…UU¹UGCUAAUUUAAUGC

【推荐3】昆虫杆状病毒表达载体系统（BEVS）是以杆状病毒（遗传物质为双链环状DNA）作为外源基因载体，以昆虫细胞作为宿主。下图是利用BEVS生产人生长激素（hGH）的过程。该过程首先在大肠杆菌内利用质粒P将目的基因与杆状病毒基因B进行重组，形成重组杆状病毒基因B，再转染昆虫细胞，请据图回答下列问题。

   

（注：杆状病毒基因B中kanr为卡那霉素抗性基因；LacZ基因编码的β-半乳糖苷酶能将无色化合物X-gal形成蓝色物质，使菌落呈蓝色，若LacZ基因不能正常表达的菌落呈白色。）
(1)图中的人生长激素mRNA是从人体的________细胞中获取。图中①过程的进行需要引物（一般为色氨酸的tRNA），这是由于逆转录酶不能将单个的________聚合成DNA链。逆转录酶在引物tRNA________末端以________方向合成DNA．
(2)步骤②为重组质粒P的构建，分别用BglⅡ、EcoRⅠ切hGH基因，用BamHⅠ、EcoRⅠ酶切质粒P，再用DNA连接酶连接，若图1是BglⅡ的识别序列，则最可能是BamHⅠ的识别序列是_______。

   

A．

B．

C．

(3)步骤③需筛选含重组杆状病毒基因B的大肠杆菌，筛选用培养基必须加入______、_____、______，要获得图示培养结果后，应挑选______菌落进行重组基因的扩增与提取。
(4)昆虫杆状病毒可以作为表达载体，是利用其具有______的特性而将目的基因导入受体细胞。
(5)人生长激素基因在昆虫细胞培养中成功表达后，科研人员继续研究将重组杆状病毒基因转染昆虫幼体，希望在昆虫幼体中生产人生长激素，因为相对昆虫幼体培养，动物细胞培养的要求更高，结合相关知识，下列属于昆虫动物细胞培养要求的是_______。

A．无菌条件下培养

B．95%的O2和5%的CO2

C．调节适宜渗透压

D．控制温度在最适

E．配制固体培养基

F．配制液体培养基

【推荐1】近日，中国农业科学院深圳农业基因组研究所黄三文团队用马铃薯二倍体替代四倍体育种，用杂交种子替代薯块繁殖。这一研究成果，突破了百年来马铃薯育种的难题，为马铃薯杂交育种提供了全新的技术体系。请回答以下问题：
(1)目前大田种植的马铃薯一般为四倍体，依靠薯块无性繁殖。该繁殖方法的优点是_____；缺点是通过块茎进行无性繁殖的做法，使得它所积累的病毒难以去除，科学家们发明了脱毒技术，即选用_______，经脱分化与再分化形成脱毒苗来保障生产。但不论是块茎繁殖，还是脱毒技术，都会造成马铃薯生产成本的提高。
(2)2021年6月，该研究团队已培育出二倍体自交系和杂交优势显著的杂交马铃薯品系“优薯1号”。“优薯1号”的培育成功，基因编辑技术功不可没。自然界存在的二倍体马铃薯往往是自交不亲和的，使得它不能产生种子。下图是科学家用CRISPR/Cas9基因编辑技术定点敲除二倍体马铃薯的自交不亲和基因的示意图。

其原理是由一条单链向导RNA引导Cas9蛋白到一个特定的基因位点进行切割。通过设计向导RNA中20个碱基的识别序列，可人为选择DNA上的目标位点进行切割。
①Cas9和向导RNA结合形成的复合物能切割DNA，从功能上来看，其相当于基因工程中的____________酶；CRISPR/Cas9系统广泛存在于细菌中，推测该系统在细菌中的作用是______________。
②很显然向导RNA的设计非常关键。其中的识别序列必须根据________来设计，并通过________________的方式与目标位置结合，从而引导与其结合的Cas9蛋白对目标位置基因行使切割（㪣除）功能；
③通过基因编辑技术对该基因进行编辑后需要检测其作用效果，简便的方法是___________ 。

【推荐2】细胞内具有多种miRNA对基因表达有重要的调节作用，研究人员利用基因编辑技术建立miRNA-301a（某种miRNA）基因敲除的小鼠模型，用于研究miRNA-301a的调节功能。请回答相关问题：
（1）下图为miRNA形成和发挥作用的过程简图，据图可知miRNA基因通过___________形成前体miRNA，然后经过________过程形成miRNA，miRNA通过________调控翻译过程。

（2）构建miRNA基因敲除的小鼠。其作用机制如下图所示。

注：gRNA与Cas9蛋白结合后可以切割DNA
①取miRNA基因：根据miRNA基因序列设计并合成______________________，然后通过_________技术扩增得到miRNA基因。同理构建gRNA的模板DNA。
②构建基因表达载体：利用________________________酶构建如下图所示的基因表达载体。

③通过体外转录获得miRNA-gRNA，再将miRNA-gRNA与Cas9混合后采用显微注射技术注入小鼠__________________中。
（3）经上述操作获得的8只小鼠称为F₀代。
①经过限制酶Ⅰ剪切后电泳检测小鼠miRNA基因敲除情况如下图所示。

F₀代小鼠检测其中5号为野生型，M为标准物）F₀代中_____________号为基因敲除小鼠，经过基因测序后选择_____________与敲除碱基对数目最多的4号小鼠杂交，产生F₁代小鼠。
②用限制酶Ⅱ剪切后电泳检测F₁代小鼠如图1所示。

从F₁中选出4号和5号个体杂交产生F₂代小鼠，然后用同种方法检测F₂代小鼠结果如上图2所示，最终确定F₂代中________号小鼠为miRNA基因敲除纯合子小鼠。

【推荐3】黄瓜为雌雄同株异花植物，同一植株上既有雄花也有雄花，雌花率影响黄瓜产量。研究人员利用黄瓜纯合雌雄同株品系甲培育出全雌株（只有雌花）品系乙。为确定全雌性状形成的分子机制，研究人员进行了如下实验。
(1)品系甲与品系乙杂交，获得的F₁表现为全雌，说明全雌为______________性状。将F₁与品系甲杂交，获得的子代表现型是_____________，比例为______________，表明该相对性状由一对等位基因控制。研究人员发现给品系甲施加乙烯，也可以增加雌花的比例。以上事实说明性状是_____________的结果。
(2)进一步研究发现控制全雌性状的基因位于3号染色体上，可能与ASC基因或MYB1基因有关。为进一步确定控制全雌性状的基因，研究人员利用CRISPR-Cas9系统对相关基因进行编辑。该系统的核心组成包括gRNA和Cas9。gRNA可以识别并结合靶基因，引导Cas9蛋白对靶基因进行剪切，进而破坏靶基因结构。
①由于品系乙难以被直接编辑，研究人员以品系甲为背景选育了转基因植株丙和丁。若植株丙中导入以ASC基因为靶基因设计的gRNA基因和Cas9蛋白合成基因，则植株丁中应导入以_____________为靶基因设计的gRNA基因和Cas9蛋白合成基因。转入植株丙和丁的基因可随配子传递给子代，表达的CRISPR-Cas9系统可在受精卵中发挥基因编辑作用。
②将植株丙和植株丁分别与品系乙进行杂交，结果见表。根据表结果，植株丙减数分裂后产生含有与不含有转入基因的配子的比例为______________，含有转入基因的配子形成受精卵后，细胞中的_____________基因结构被破坏，表现为_____________。不含有转入基因的配子形成受精卵后，表现为______________。
③植株丁与品系乙杂交结果为______________，说明MYB1基因不是控制全雌性状的基因。

亲本 F1	全雌株	雌雄同株
植株丙×品系乙	15	18
植株丁×品系乙	？	？