研究发现，增强子是基因转录的调控序列，具有促进启动子表达下游基因的作用；增强子可以位于基因的5'端，也可以位于基因的3'端。人肺特异性X蛋白（LUNX）基因是某种肺癌诊断的标志物，为了研究LUNX基因的增强子是否具有增强基因表达的功能以及其发挥作用的位置是位于启动子的上游还是下游。科研人员从人类全基因组序列数据库中利用生物信息学的方法筛选并利用PCR技术扩增了3个LUNX基因增强子片段（En，表示E1～E3），分别定向连接到pGL3载体中荧光素酶报告基因（luc＋）启动子（SV40启动子）的上游和下游，如图所示，并通过相关技术检测荧光素酶的活性从而对增强子的功能进行判断，luc＋的表达强度越强，荧光素酶的活性越高。

(1)为了扩增以上3个LUNX基因增强子片段，需要人为设计合适的引物，在上述实验中共需要设计______________________种引物用于PCR反应体系；为了定向连接到pGL3载体中，在引物5'端需要引入的限制性酶切位点为______________________种，PCR每次循环一般可以分为______________________三步。
(2)以上3个LUNX基因增强子片段经回收、纯化、测序正确后，将双酶切后的PCR产物分别定向连接到用______________________双酶切和______________________双酶切的pGL3载体中，构建LUNX基因增强子分别位于报告基因上游和下游的载体，载体中的氨苄青霉素抗性基因Amp^r可用来____________，画出E₁连接到pGL3载体报告基因下游的图谱。__________
(3)根据相关实验技术对荧光素酶的活性进行检测，结果如图3所示，

根据结果得出的结论是______________________。