【推荐1】发酵型青梅果醋的生产主要采用碱中和青梅汁之后再进行酒精发酵、醋酸发酵的方法，然而这种生产工艺会损失青梅的功能性成分。因此，筛选能够耐受青梅高酸环境的醋酸菌是提高发酵青梅果醋品质的关键（已知醋酸能与培养基中的碳酸钙反应生成能溶于水的醋酸钙）。请回答以下问题。
(1)食醋生产的三个主要的过程：一是原料中淀粉的分解，即糖化作用（水解）；二是酒精发酵，即_____________________（填微生物名称）将糖转化成乙醇；三是醋酸发酵，即醋酸菌将乙醇转化成乙酸，该微生物的代谢类型是_____________________。
(2)①菌种筛选及发酵生产涉及三种培养基：

培养基A	葡萄糖、酵母粉、无水碳酸钙、琼脂、3％乙醇
培养基B	葡萄糖、酵母粉、3％乙醇
培养基C	葡萄糖、酵母粉、6％乙醇

具体流程为：取腐烂一周的青梅若干，加入装有培养基B的摇瓶中培养一段时间，经________________稀释后，接种于培养基A上，选取_____________________且生长良好的单菌落10株。将上述初筛的10株醋酸菌接种于培养基C中，结果如图1。研究者选择菌株J-27作为后续实验菌株，原因是_____________。
   


②研究人员对J-27进行诱变处理，选取突变菌株J-2736，与两种商业化的醋酸菌—沪酿1.01、AS1.41分别接种于青梅果酒中进行青梅果醋发酵，结果如图2。
沪酿1.01和AS1.41发酵结束时青梅果醋发酵液中总酸含量为15g·L^﹣1左右，而两者应用于粮食醋发酵时，发酵液总酸含量一般可以达到50g·L^﹣1左右。推测原因可能是___________________________。
③图2结果说明在青梅果醋发酵过程中，菌株J-2736发酵性能优于沪酿1.01和AS1.41。研究人员继续对J-2736的发酵条件进行了研究，发现初始乙醇含量可能对青梅果醋发酵具有一定影响，实验结果如图3。由结果表明，初始乙醇含量较低或较高时，总酸含量分别是________________________，试分析造成这种现象的原因：乙醇含量过低，醋酸菌可利用的底物较少，________________________，而乙醇含量过高，则会抑制醋酸菌的生长和代谢，___________________________。
(3)乙醇脱氢酶（ADH）催化乙醇生成乙醛是醋酸发酵的第一阶段，乙醛脱氢酶（ALDH）催化乙醛生成乙酸是醋酸发酵的第二阶段。某同学从J-27的突变体菌株中分别提取ADH和ALDH，分别用高浓度的乙醇处理后测酶活性，由此可根据______________________________________进一步筛选出耐乙醇醋酸高产菌株。

【推荐2】解磷菌（主要为细菌）能够将土壤中植物不能利用的磷转化为可以利用的磷，在提高土壤中有效磷含量、促进磷循环等方面具有重要作用。解磷菌能分解含磷化合物，使得菌落周围出现透明圈。下图为从某植物根际土壤中筛选出高效解磷菌的部分流程示意图，步骤Ⅰ表示将1g土壤加入100mL灭过菌的PVK培养基培养，36h后，取10 mL培养液接种于100mLPVK培养基继续富集培养，连续富集培养3次后进行实验步骤Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ（B、C中培养基的营养成分与A相同）。请分析回答下列问题：

(1)用于培养解磷菌的培养基在接种前通常采取_____法进行灭菌。与A相比，B、C中的培养基多了_____成分。
(2)为尽快观察到解磷菌培养的实验结果，需将接种后的平板倒置于_____中培养，并同时设置一组未接种的空白培养基作为对照实验，其目的是_____。
(3)在C中分离培养出解磷菌后，通过测量_____的直径，比较它们的比值可确定其解磷能力，从而筛选出目标菌株。
(4)分离出的解磷菌，需通过分子鉴定进一步确定其种属关系。常用方法是对细菌的核糖体RNA（16SrRNA）所对应的16SrDNA进行序列分析，在测序前一般采用菌落PCR的方法进行扩增。
①菌落PCR直接以菌体热解后暴露的DNA为模板进行PCR扩增，与传统PCR相比更加省时省力，其原因是_____。
②在PCR实验的具体操作时，按照事先设计好的配方用_____向微量离心管中依次加入各组分，按照下图的设计设置好PCR程序，其中a表示_____过程。

③在进行菌落PCR时，首先根据_____设计引物。已知相关的上游引物序列为5'-GCAATGCGTAGCCTCT—3'，则下游引物的序列最合适的是_____。
a．5'—ACAATATGTATAATCT—3'               b．5'—TCATGAGCGCATAGTT—3'
c．5'—GCAATGCGTGCATTGC—3'               d．5'—AGAGGCTACGCATTGC—3'

【推荐3】东北酸菜是白菜经腌制而成的传统食品。发酵过程中若霉菌等微生物大量繁殖会导致酸菜腐败发臭。研究人员从酸菜中分离出具有抑菌活性的乳酸菌，该类乳酸菌因能分泌新型细菌素（多肽）而具有抑菌活性。为获得细菌素表达量更高的工程菌用于生产，进行了相关研究。回答下列问题。
(1)乳酸菌产生的乳酸能溶解碳酸钙而产生溶钙圈。研究人员为从市售多个品牌的酸菜中分离纯化乳酸菌，配制含有碳酸钙的固体培养基，利用_____法对该培养基进行灭菌，并采用_____法将酸菜液接种到培养基中，选择有溶钙圈的菌落并继续进行纯培养。
(2)通过上述方法筛选得到6种乳酸菌，测得它们对霉菌的抑菌率如下表，应选择乳酸菌编号为_____的菌株进行后续操作。

乳酸菌编号	Ll	L2	L3	L4	L5	L6
抑菌率/%	28．57	19．48	58．44	14．28	6．49	36．36

(3)研究人员从上述乳酸菌中提取细菌素基因，将其导入受体菌，再对受体菌做进一步的检测与鉴定。下面是细菌素基因及构建的基因表达载体的示意图。

①利用PCR技术扩增细菌素基因时，应选择的一对引物是_____。PCR过程中，经过4轮循环，消耗引物的个数是_____。
②若以细菌素基因甲链为转录的模板链，为构建基因表达载体，应在与甲链结合的引物的5＇端加入_____（填“BamH I”或“Nde I”）的识别序列。
③转化操作后提取受体细胞中的DNA，并利用选择的引物进行扩增，再对扩增产物进行电泳检测，结果如下图。

1：DNA标准样 2：普通受体菌的DNA 3：转化操作后受体菌的DNA 4：无菌水

设置4号的目的是_____（答出1点即可），电泳结果表明_____。

【推荐1】小球藻含有丰富的生长因子，能有效改善人体免疫功能，近年来常被用作营养功效食品。为探究适合小球藻生长的最优氮源，研究人员将小球藻接种到pH为7．0的不同培养液中进行培养，小球藻初始浓度均为2x10⁶个／mL，14天后检测结果如下：

培养液类型	尿素	硝酸铵	硫酸铵：	硝酸钠
细胞浓度/(× 10个/ml，)	10．1	16． 5	9．7	33．2
光合作用相对速率/%	103．0	114．0	108．0	122． 0
培养14天后．培养液pH	7．6	7．1	6．4	9．1

请回答：
（1）请从物质合成与光合作用的角度分析小球藻生长需要氮源的原因是__________．
（2）据表可知，__________是小球藻生长的最佳氮源，判断依据是__________。
（3）有人认为上述实验结果不够准确是由于培养过程中培养液pH发生变化，进而影响小球藻的生长繁殖。如何改进实验使结果更准确，请简要写出实验思路：__________。

【推荐3】下图表示微生物的接种实验中的一些步骤。请回答下列有关问题:

（1）步骤①前的一步操作是_______，该操作用到的主要仪器是_______。
（2）实验步骤②的目的是_______，步骤②、③之间还需要将接种环_______。
（3）指出步骤④操作不当的地方_______。
（4）分别用三个平板培养三种细菌（E.coli、s.albus、B.subtnis），然后在培养基上打出直径为3mm的孔，并在孔中加入一定浓度的甲抗生素，经过一定时间培养后，可以在孔的周围观察到一圈清晰区，此乃抑制细菌增长所致。测量清晰区的直径（如下图所示），数据如下表。

细菌	不同浓度甲抗生素条件下清晰区的直径（mm）
	5μg/mL 甲抗生素	7.5μg/mL 甲抗生素	10μg/mL 甲抗生素	15μg/mL 甲抗生素	20μg/mL 甲抗生素
E.coli	7	10	14	16	16
S.albus	—	5	8	13	17
B.subtilis	5	7	9	14	19

①S.albus和B.subtilis 对甲抗生素敏感的区别是_______。
②有人感染E.coli而患病，医生使用20μg/mL甲抗生素给予治疗，试用生物进化理论解释这种不明智的做法_______。
③采养殖池中的水样lmL稀释100倍，吸取稀释后的水样lmL，接种于E.coli选择性培养基上培养，一段时间后观察菌落并计数，重复三次实验结果如下图。该养殖池每mL水含有E.coli _______个。

【推荐1】烟草易受烟草花叶病毒（TMV）感染而大幅度减产。绞股蓝细胞中含有抗TMV基因，能抵抗TMV感染。研究人员利用转基因技术培育出了抗TMV烟草。
(1)下表是相关研究中的一些步骤，请结合所学基因工程知识完成以下表格。

实验步骤	方法要点
筛选合适的 目的基因	从绞股蓝细胞中提取总RNA，通过逆转录过程获得双链cDNA；然后再在①____的催化下进行PCR扩增
构建重组质粒	将抗TMV基因插入Ti质粒的T-DNA中
转化细胞	用②____法将重组质粒导入受体细胞
③____	在含有卡那霉素的培养基上培养受体细胞
获得再生植株	运用④____技术培育
转基因植株分析	从分子水平与个体水平对转基因植株进行检测与鉴定

(2)为研究干旱胁迫基因LEA和VOC对绞股蓝油脂的积累机制，科研人员构建了两个基因表达载体。其中基因LEA与荧光素酶基因（Luc）构建成基因表达载体甲，基因VOC和标记基因构建成基因表达载体乙，相关序列及酶切位点如图所示。箭头表示转录方向。

① 利用PCR扩增LEA基因时，需要在一对引物的____（3' 端、5'端）添加____两种限制酶识别序列。
② 为了构建基因表达载体甲，依据图中已知碱基序列，在PCR扩增仪中加入的引物的碱基序列为5'-____-3'和5'-____-3'，扩增____代后会得到8个双链等长的LEA基因。
③ 乙酰-CoA羧化酶基因（AC）是油脂合成过程的关键酶基因，甘油三酯酯酶基因（ATGL）是油脂分解过程的关键酶基因。将基因表达载体甲、乙分别导入植物细胞培养成转基因植物A、B，在干旱胁迫的环境下培养两种转基因植物和正常植物，分别检测植物体内AC和ATGL基因的表达水平，结果如下图。

Ⅰ.在分子水平上，用____（技术）检测AC酶和ATGL酶的表达量可得到上述结果。
Ⅱ.基于以上研究，干旱胁迫基因LEA和VOC在绞股蓝油脂积累中的机制是__。

【推荐2】如图所示为培养抗虫棉的流程图，其中“Bt”代表Bt基因，“KmR”代表卡那霉素抗性基因。回答下列问题：

（1）①过程需用的工具酶有________。②过程常使用钙离子处理农杆菌的目的是________，该过程使用含________的培养基筛选出含重组质粒的农杆菌。
（2）③过程中将棉花细胞与农杆菌混合后共同培养，旨在让T-DNA进入棉花细胞并整合到________上。
（3）经④⑤⑥过程培育出试管苗的原理是________。
（4）从个体水平检验该转基因棉的抗虫性状，常用方法是________。与普通棉相比，种植该转基因棉的优点是________。