下图表示微生物的接种实验中的一些步骤。请回答下列有关问题:
（1）步骤①前的一步操作是_______ ，该操作用到的主要仪器是_______ 。
（2）实验步骤②的目的是_______ ，步骤②、③之间还需要将接种环_______ 。
（3）指出步骤④操作不当的地方_______ 。
（4）分别用三个平板培养三种细菌（E.coli、s.albus、B.subtnis），然后在培养基上打出直径为3mm的孔，并在孔中加入一定浓度的甲抗生素，经过一定时间培养后，可以在孔的周围观察到一圈清晰区，此乃抑制细菌增长所致。测量清晰区的直径（如下图所示），数据如下表。
①S.albus和B.subtilis 对甲抗生素敏感的区别是_______ 。
②有人感染E.coli而患病，医生使用20μg/mL甲抗生素给予治疗，试用生物进化理论解释这种不明智的做法_______ 。
③采养殖池中的水样lmL稀释100倍，吸取稀释后的水样lmL，接种于E.coli选择性培养基上培养，一段时间后观察菌落并计数，重复三次实验结果如下图。该养殖池每mL水含有E.coli_______ 个。
（1）步骤①前的一步操作是
（2）实验步骤②的目的是
（3）指出步骤④操作不当的地方
（4）分别用三个平板培养三种细菌（E.coli、s.albus、B.subtnis），然后在培养基上打出直径为3mm的孔，并在孔中加入一定浓度的甲抗生素，经过一定时间培养后，可以在孔的周围观察到一圈清晰区，此乃抑制细菌增长所致。测量清晰区的直径（如下图所示），数据如下表。
| 细菌 | 不同浓度甲抗生素条件下清晰区的直径（mm） | ||||
| 5μg/mL 甲抗生素 | 7.5μg/mL 甲抗生素 | 10μg/mL 甲抗生素 | 15μg/mL 甲抗生素 | 20μg/mL 甲抗生素 | |
| E.coli | 7 | 10 | 14 | 16 | 16 |
| S.albus | — | 5 | 8 | 13 | 17 |
| B.subtilis | 5 | 7 | 9 | 14 | 19 |
①S.albus和B.subtilis 对甲抗生素敏感的区别是
②有人感染E.coli而患病，医生使用20μg/mL甲抗生素给予治疗，试用生物进化理论解释这种不明智的做法
③采养殖池中的水样lmL稀释100倍，吸取稀释后的水样lmL，接种于E.coli选择性培养基上培养，一段时间后观察菌落并计数，重复三次实验结果如下图。该养殖池每mL水含有E.coli
更新时间：2018-03-15 06:08:15
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【推荐1】下图为5个不同浓度的某抗生素对大肠杆菌生长影响的实验结果。请回答下列相关问题：
(1)培养基中通常加入______________ 作为凝固剂。为检测培养基是否被污染，应采用的检测方法是_______________________________________________________ 。
(2)该实验是用________ 法接种大肠杆菌，在接种前要对培养基进行__________ 灭菌。根据图中结果，对大肠杆菌抑制作用最明显的该抗生素浓度是浓度____ （填图中数字），依据是______________ 。
(3)为研究相同浓度的a、b、c三种不同抗生素对大肠杆菌生长的影响，根据上述研究方法，请仿照图1在图2中表示这一处理方法。
(1)培养基中通常加入
(2)该实验是用
(3)为研究相同浓度的a、b、c三种不同抗生素对大肠杆菌生长的影响，根据上述研究方法，请仿照图1在图2中表示这一处理方法。
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【推荐2】2022年4理学或医学奖颁发给瑞典生物学家、进化遗传学家斯万特·帕博，以表彰他发现了与已灭绝古人类和人类进化相关的基因组。他们从大量木乃伊中获得少量木乃伊DNA，并在细菌中进行克隆，复制了2400年前的DNA．兴趣小组同学通过阅读相关资料，模拟了其中部分研究过程，设计了如下实验（Mspl、Bamlll、Mbol、Smal为4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG）。请回答以下问题：
(1)若将图2中质粒和木乃伊基因通过同种限制酶处理后进行连接，构建重组质粒，应选用的限制酶是______ 。经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，最可能的原因是_______ ；为有效解决此类问题，措施是______ 。
(2)据图3分析，培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A、B还应分别含有______ 。从检测筛选的结果分析，含有目的基因的是______ 菌落中的细菌。
(1)若将图2中质粒和木乃伊基因通过同种限制酶处理后进行连接，构建重组质粒，应选用的限制酶是
(2)据图3分析，培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A、B还应分别含有
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【推荐3】自然界中某些细菌可通过代谢将原油转化为稳定无害的终产物，科学家为获得能有效修 复原油污染土壤的工程菌展开相关研究。
(1)获得能降解原油的目标菌可从____ 中取样，样品经无菌水稀释后涂布于以原油为唯一碳源的固体培养基上培养，分离纯化后获得目标菌 A。
(2)假单胞菌遭受环境压力时，会分泌大量胞外复合物将自身包裹于其中形成细菌聚集模样物（生物被膜）。目标菌 A 成膜性差，不能有效控制原油向深层土壤渗透。研究人员将假单胞菌的 bdlA 基因（约 1300bp）导入目标菌 A 体内，尝试构建成膜性好的工程菌。
①假单胞菌在遭受环境压力时形成的休眠体叫做___ 。
A.孢子 B.芽孢 C.荚膜 D.囊泡
②图 1 为 pX 系列质粒构建的重组质粒模式图，为确认是否获得重组 DNA 分子， 可选用限制酶___ 对重组质粒切割，并对酶切产物及重组质粒进行凝胶电泳检测，结果如图2。据图可初步判断重组质粒构建成功，依据是_____ 。
(3)上述方法获得的两种工程菌命名为 KT2 和 KT5，在不同时间测定实验组及对照组_____ 的生物被膜总量相对值，结果如图 3 所示。请描述实验结果_____ 。
(1)获得能降解原油的目标菌可从
(2)假单胞菌遭受环境压力时，会分泌大量胞外复合物将自身包裹于其中形成细菌聚集模样物（生物被膜）。目标菌 A 成膜性差，不能有效控制原油向深层土壤渗透。研究人员将假单胞菌的 bdlA 基因（约 1300bp）导入目标菌 A 体内，尝试构建成膜性好的工程菌。
①假单胞菌在遭受环境压力时形成的休眠体叫做
A.孢子 B.芽孢 C.荚膜 D.囊泡
②图 1 为 pX 系列质粒构建的重组质粒模式图，为确认是否获得重组 DNA 分子， 可选用限制酶
(3)上述方法获得的两种工程菌命名为 KT2 和 KT5，在不同时间测定实验组及对照组
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【推荐1】PET是一种聚酯类塑料，全球每分钟生产约100万个PET塑料瓶。科学家从能够利用PET作为碳源的细菌中分离出了一种能降解PET的解聚酶。PET在70℃时才能完全变为液态，便于降解，但PET解聚酶不耐高温。为此，科研人员借助定向进化策略，提高PET解聚酶耐受高温的能力。该策略经历多轮定向进化（每一轮均在上一轮筛选出的目标菌株上开展），其涉及的信息如表所示。
(1)研究人员从土壤样品中分离能产生PET解聚酶的细菌时，所使用的培养基成分应包括____________ （编号选填）。
①（NH4）2SO4 ②淀粉 ③PET ④无机盐
(2)据所学知识判断，分离PET解聚酶的细菌所使用的培养基类型属于____________ ．（编号选填）
①天然培养基 ②合成培养基 ③液体培养基
④通用培养基 ⑤固体培养基 ⑥选择培养基
(3)表中流程②宜选用的接种方法为_____________ （平板划线/稀释涂布），其目的是_______ 。
A.对大肠杆菌进行计数
B．扩大大肠杆菌种群数量
C．便于分离提取PET解聚酶
D．将导入不同突变基因的大肠杆菌分离开
(4)本研究采用的定向进化策略，相比自然界的进化过程，区别是_______。
(5)据题干及所学知识分析，研究人员在第6轮中设置70℃且长时间保温（7小时）的目的是______________ 。
(6)据题干信息判断，获取耐高温PET解聚酶的过程涉及_____。
天然PET解聚酶基因（792bp）部分编码链序列以及用于表达载体构建的质粒结构如下图所示：
5’ATGCAGACTAACCCCTATGCTCGCGGG………GATTTTCGCACTGCTAACTGCAGC3'_____________ 。（编号选填）
①5’TACATATGCAGACTAACCCCTATGCTCG3’
②5’TGCTCGAGATGCAGACTAACCCCTATGC3’
③5’TACATATGGCTGCAGTTAGCAGTG3’
④5’TGCTCGAGGCTGCAGTTAGCAGTG3’
(8)为鉴定表达载体构建是否正确，研究人员从目标菌株中提取质粒，并经XhoI和NdeI充分处理后进行凝胶电泳。根据下图结果判断，含目的基因的菌落是___________ 。
每一轮的基本流程 | 定向进化（轮次） | |||||
第一轮 | 第二轮 | 第三轮 | 第四轮 | 第五轮 | 第六轮 | |
①基因突变和转化 | 将突变后的PET解聚酶基因导入大肠杆菌 | |||||
②分离纯化和鉴定的菌株 | 5种 | 13种 | 4种 | 3种 | 5种 | 9种 |
③提取出的PET解聚酶预保温和酶活测定条件 | 1h/55℃ | 1h/60℃ | 1h/65℃ | 1h/70℃ | 1h/80℃ | 7h/70℃ |
④选出的PET解聚酶中变化的位点数 | 2个 | 1个 | 2个 | 3个 | 3个 | 5个 |
①（NH4）2SO4 ②淀粉 ③PET ④无机盐
(2)据所学知识判断，分离PET解聚酶的细菌所使用的培养基类型属于
①天然培养基 ②合成培养基 ③液体培养基
④通用培养基 ⑤固体培养基 ⑥选择培养基
(3)表中流程②宜选用的接种方法为
A.对大肠杆菌进行计数
B．扩大大肠杆菌种群数量
C．便于分离提取PET解聚酶
D．将导入不同突变基因的大肠杆菌分离开
(4)本研究采用的定向进化策略，相比自然界的进化过程，区别是_______。
| A．发生基因突变 | B．实现个体进化 |
| C．加快进化速度 | D．模拟自然选择 |
(6)据题干信息判断，获取耐高温PET解聚酶的过程涉及_____。
| A．基因工程 | B．细胞工程 | C．发酵工程 | D．蛋白质工程 |
天然PET解聚酶基因（792bp）部分编码链序列以及用于表达载体构建的质粒结构如下图所示：
5’ATGCAGACTAACCCCTATGCTCGCGGG………GATTTTCGCACTGCTAACTGCAGC3'
①5’TACATATGCAGACTAACCCCTATGCTCG3’
②5’TGCTCGAGATGCAGACTAACCCCTATGC3’
③5’TACATATGGCTGCAGTTAGCAGTG3’
④5’TGCTCGAGGCTGCAGTTAGCAGTG3’
(8)为鉴定表达载体构建是否正确，研究人员从目标菌株中提取质粒，并经XhoI和NdeI充分处理后进行凝胶电泳。根据下图结果判断，含目的基因的菌落是
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(0.4)
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解题方法
【推荐2】东北酸菜是白菜经乳酸菌发酵而成的传统食品。发酵过程中霉菌等大量繁殖会导致酸菜腐败而发臭。黑龙江大学研究团队从酸菜中分离出一种具有高效抑菌活性的乳酸菌，利用其发酵成的“黑大酸菜”，适合上市推广。回答下列问题：
(1)为分离获得具有高效抗菌活性的乳酸菌菌种，需要从市售保藏期____________ （填“较长”或“较短”）的酸菜中进行筛选。
(2)分离纯化乳酸菌所用的固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙而产生溶钙圈。通常，可利用_法对培养基进行灭菌，选择有溶钙圈的菌落，采用____________ 法可获得由单个乳酸菌繁殖而形成的纯培养物。
(3)下表为实验所得到的部分乳酸菌对青霉菌的抑菌活性有关数据，通过比较应选择乳酸菌编号为____________ 的菌株进行后续实验，原因是____________ 。
注：“-”无抑菌作用；“+”抑菌率为30%~50%；“++”抑菌率在50%以上
(4)研究表明，（3）中筛选出的乳酸菌具有高效抑菌活性是由于其分泌了一种新型细菌素（多肽），其在食品防腐方面具有明显的优势，但是产量较低。现欲利用基因工程技术获得纯化的细菌素，以便提高其产量。下图分别为目的基因、基因表达载体示意图及转化后对目的基因进行PCR检测的结果。____________ 。构建基因表达载体时，应在与甲链结合的引物中加入____________ （填“BamHⅠ”或“NdeI”）的识别序列。
②PCR过程中，经过4轮循环，消耗引物的个数是____________ 。
③电泳结果表明____________ 。设置4号的目的是____________ （答出一点即可）。
(1)为分离获得具有高效抗菌活性的乳酸菌菌种，需要从市售保藏期
(2)分离纯化乳酸菌所用的固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙而产生溶钙圈。通常，可利用_法对培养基进行灭菌，选择有溶钙圈的菌落，采用
(3)下表为实验所得到的部分乳酸菌对青霉菌的抑菌活性有关数据，通过比较应选择乳酸菌编号为
| 乳酸菌编号 | L1 | L2 | L3 | L4 | L5 | L6 |
| 抑菌率/% | 28.57 | 19.48 | 58.44 | 14.28 | 6.49 | 36.36 |
| 抑菌效果 | - | - | ++ | - | - | + |
(4)研究表明，（3）中筛选出的乳酸菌具有高效抑菌活性是由于其分泌了一种新型细菌素（多肽），其在食品防腐方面具有明显的优势，但是产量较低。现欲利用基因工程技术获得纯化的细菌素，以便提高其产量。下图分别为目的基因、基因表达载体示意图及转化后对目的基因进行PCR检测的结果。
②PCR过程中，经过4轮循环，消耗引物的个数是
③电泳结果表明
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(0.4)
【推荐3】检验饮用水的细菌、病毒的含量是有效监控部分疾病发生的必要措施。请回答下列与检验饮用水中大肠杆菌有关的问题：
（1）检验大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的水样用__________ 分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，记录菌落数量，这种方法称为________ 。下图所示的四种菌落分布图中，图_______ 不是由该方法得到的是，而是利用_____________ 方法得到的。
（2）现有一升水样，用无菌吸管吸取1mL转至盛有9mL无菌水的试管中，依次稀释至103稀释度。各取0.1mL已稀释103倍的水样分别接种到三个培养基上培养，记录的菌落数分别为55、56、57，则每升原水样中大肠杆菌数为____________ 。
（3）有三种材料或用具需要清毒或灭菌：（1）培养细菌用的培养基与培养皿；（2）玻璃棒、试管、烧瓶和吸管；（3）实验操作者的双手。其中需要消毒的是_________ ，需要灭菌的是_________ 。
（4）下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方。
根据用途划分该培养基属于__________ 培养基（选择、鉴别）。该培养基中的碳源是_____________ 。利用培养基不仅可以分离培养微生物，也可以进行____________ ，与微生物培养明显不同的是，用于组织培养的培养基中还需要加入______________ 。
（5）以下微生物发酵生产特定产物时，所利用主要微生物的细胞结构与大肠杆菌相同的是____________ 。
A．制作果酒 B．由果酒制作果醋 C．制作泡菜 D．制作腐乳
（1）检验大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的水样用
（2）现有一升水样，用无菌吸管吸取1mL转至盛有9mL无菌水的试管中，依次稀释至103稀释度。各取0.1mL已稀释103倍的水样分别接种到三个培养基上培养，记录的菌落数分别为55、56、57，则每升原水样中大肠杆菌数为
（3）有三种材料或用具需要清毒或灭菌：（1）培养细菌用的培养基与培养皿；（2）玻璃棒、试管、烧瓶和吸管；（3）实验操作者的双手。其中需要消毒的是
（4）下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方。
根据用途划分该培养基属于
（5）以下微生物发酵生产特定产物时，所利用主要微生物的细胞结构与大肠杆菌相同的是
A．制作果酒 B．由果酒制作果醋 C．制作泡菜 D．制作腐乳
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(0.4)
【推荐1】I．溶菌酶又称胞壁质酶，是一种能水解黏多糖的碱性酶，使细菌细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细菌细胞破裂内容物溢出而使细菌溶解。研究发现，溶菌酶在酸性条件下加热到100℃仍具有活性。回答下列问题：
(1)溶菌酶可以高效杀灭细菌而对人体组织细胞不起作用，原因是___________ 。
(2)在酸奶中加入一定量的溶菌酶，然后用巴氏消毒法处理，处理后的溶菌酶_________ （填“能”或“不能”）起到防腐作用，原因是______________________ 。
(3)可采用凝胶色谱法对溶菌酶进行分离纯化，其中与溶菌酶相比先被洗脱分离出来的是_____________ （填“相对分子质量大”或“相对分子质量小”）的蛋白质，原因是____________________________ 。
II．某兴趣小组开展“使用公筷对餐后菜品某细菌数量的影响”研究，实验选用3道菜，每道菜分为3盘，分别为使用公筷食用、未使用公筷食用和未食用组，结果见下表：
(4)表中数据获得采用的接种方法是___________ ，该实验中需要进行灭菌处理的材料用具有___________ （至少写两种）。
(5)在测定凉拌黄瓜样品时，取10g样品研磨获得提取液并用____________ 定容至100ml，若公筷组选用101稀释液进行平板培养测定菌落数，据此推测测定未使用公筷组菌落数时应选用____________ 倍稀释，以保证能从中选择出菌落数在30~300间的平板进行计数。
(6)研究结果中将同一种菜品的公筷组与未食用组进行对比____________ （“能”或“不能”）确定餐后细菌来自公筷，原因是_______________ 。
(1)溶菌酶可以高效杀灭细菌而对人体组织细胞不起作用，原因是
(2)在酸奶中加入一定量的溶菌酶，然后用巴氏消毒法处理，处理后的溶菌酶
(3)可采用凝胶色谱法对溶菌酶进行分离纯化，其中与溶菌酶相比先被洗脱分离出来的是
II．某兴趣小组开展“使用公筷对餐后菜品某细菌数量的影响”研究，实验选用3道菜，每道菜分为3盘，分别为使用公筷食用、未使用公筷食用和未食用组，结果见下表：
菜名 | 结果（菌落数/g） | ||
餐后 | |||
公筷组 | 未使用公筷组 | 未食用组 | |
凉拌黄瓜 | 16000 | 45000 | 14050 |
盐水虾 | 180 | 220 | 160 |
炒芦笋 | 48 | 530 | 32 |
(5)在测定凉拌黄瓜样品时，取10g样品研磨获得提取液并用
(6)研究结果中将同一种菜品的公筷组与未食用组进行对比
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【推荐2】现有五种不同的抗生素（甲、乙、丙、丁、戊），有测它们对金黄色葡萄球菌的作用效果。下图-1所示在均匀接种了金黄色葡萄球菌的固体培养基上，分别于不同位置加入2mg不同的抗生素的实验结果。图-2为细菌的细胞结构模式图。请回答下列相关问题：
（1）从图-1中可知，__________ 种抗生素的抗菌效果最好，__________ 种抗生素的抗菌效果最差。
（2）图-2中4指的是__________ （结构），已知丁种抗生素的作用原理是抑制葡萄球菌此结构的形成，由此推测该种抗生素对人体的毒副作用较__________ （填“大”或“小”）。
（3）为保证培养基上能均匀地生长出一层金黄色葡萄球菌，将菌液接种到固体培养基上时采用_____ （填“涂布平板”或“平板划线”）法。操作过程中，与用于计数的平板接种不同的是：本实验要保证滴加到培养基上的菌液__________ ，以缩短培养时间。
（4）本实验过程中所使用的__________ 技术，除了用来防止培养物（金黄色葡萄球菌）被其他外来微生物污染外，还能有效避免__________ 被微生物（金黄色葡萄球菌）感染。
（1）从图-1中可知，
（2）图-2中4指的是
（3）为保证培养基上能均匀地生长出一层金黄色葡萄球菌，将菌液接种到固体培养基上时采用
（4）本实验过程中所使用的
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解题方法
【推荐3】ε-聚赖氨酸（ε-PL）能抑制多种微生物的活性，且人体可将其分解为赖氨酸，是一种优良的天然食品防腐剂。科研人员欲从土壤中分离能分泌ε-PL的微生物，做了如图所示的实验（1~V表示过程，①~③表示菌落），已知ε-PL可使亚甲基蓝褪色，形成透明圈。
(2)图中第I步最常用的接种方法是_____ 。若经第Ⅱ步培养后发现菌落铺满了整个培养基、无法分辨出单菌落，则应在第I步之前____________ ，再进行接种。
(3)第Ⅲ步接种，应挑选_______ （①/②/③）号菌落。
(4)下列所示操作，发生在图中哪个过程________ （填图中过程编号）
为检测上述收集到的ε-PL对不同种类微生物的抑制能力，研究人员将大肠杆菌等菌种分别涂布于某培养基表面，再将浸有不同浓度ε-PL的滤纸圆片置于平板培养基表面，培养后测量清晰区的宽度，得到了表所示的结果。
注：“+”表示无清晰区，“-”表示未进行实验。
(6)下列关于上述抑菌实验的叙述，正确的是_____。
(7)该实验在设置ε-PL浓度梯度方面还有不完善之处，请提出2条修改建议：________ 。
(8)经实验筛选到的菌种通过大规模发酵可大量生产ε-聚赖氨酸（ε-PL），以下关于发酵工程说法正确的是____。
(9)发酵过程中要随时取样检测培养液中微生物数量，若要确切统计活菌数量，可采用_______ （显微镜计数法/稀释涂布平板法）。
| A．土样 | B．培养基 | C．接种环 | D．涂布棒 |
(2)图中第I步最常用的接种方法是
(3)第Ⅲ步接种，应挑选
(4)下列所示操作，发生在图中哪个过程
| A．甲培养基是液体培养基，能提供目的菌所需的全部营养 |
| B．乙培养基是固体培养基，用于选择产ε-PL的菌种 |
| C．丙培养基是固体培养基，用于分离产ε-PL的菌种 |
| D．丁培养基是液体培养基，用于目的菌的增殖、生产ε-PL |
为检测上述收集到的ε-PL对不同种类微生物的抑制能力，研究人员将大肠杆菌等菌种分别涂布于某培养基表面，再将浸有不同浓度ε-PL的滤纸圆片置于平板培养基表面，培养后测量清晰区的宽度，得到了表所示的结果。
ε-PL浓度/mg·L-1 清晰区宽度/mm 微生物 | 20 | 30 | 40 | 50 | 60 | 70 |
大肠杆菌 | + | + | 7.2 | 10.8 | 11.6 | 13.3 |
沙门氏菌 | + | + | 6.5 | 9.2 | 10.9 | 13.0 |
酿酒酵母 | 7.2 | 9.1 | 12.6 | 13.4 | 14.8 | - |
红曲霉 | + | + | + | + | + | 6.3 |
(6)下列关于上述抑菌实验的叙述，正确的是_____。
| A．结果显示ε-PL对酿酒酵母的抑制作用最强 |
| B．ε-PL对四种微生物的抑制效果与浓度正相关 |
| C．用于实验的培养基应该用液体的选择培养基 |
| D．接种过程需在超净工作台火焰周围进行 |
(7)该实验在设置ε-PL浓度梯度方面还有不完善之处，请提出2条修改建议：
(8)经实验筛选到的菌种通过大规模发酵可大量生产ε-聚赖氨酸（ε-PL），以下关于发酵工程说法正确的是____。
| A．发酵过程中培养基和设备均采用相同方式灭菌 |
| B．选育出的菌种可直接用于大型发酵 |
| C．发酵过程需严格控制温度、Ph和溶解氧等培养条件 |
| D．发酵产物ε-聚赖氨酸（ε-PL）需从微生物体内分离提纯 |
(9)发酵过程中要随时取样检测培养液中微生物数量，若要确切统计活菌数量，可采用
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