【推荐1】已知甲种农作物因受到乙种昆虫危害而减产，乙种昆虫食用某种原核生物分泌的丙种蛋白质后死亡。因此，可将丙种蛋白质基因转入到甲种农作物体内，使甲种农作物获得抗乙种昆虫危害的能力。回答下列问题：
（1）为了获得丙种蛋白质的基因，在已知丙种蛋白质氨基酸序列的基础上，推测出丙种蛋白质___________ 的序列，据此可利用____________方法合成目的基因。
（2）在利用上述丙种蛋白质基因和质粒载体构建重组质粒的过程中，常需要使用____________酶和____________酶。
（3）将含有重组质粒的农杆菌与甲种农作物的愈伤组织共培养，筛选出含有丙种蛋白质的愈伤组织，由该愈伤组织培养成的再生植株可抵抗____________的危害。
（4）若用含有重组质粒的农杆菌直接感染甲种农作物植株叶片伤口，则该植株的种子____________（填“含有”或“不含”）丙种蛋白质基因。

【推荐2】新冠病毒包膜表面S蛋白中的RBD蛋白亚单位能识别人体细胞膜表面的ACE2受体，并使病毒侵入人体细胞。制备重组亚单位新冠疫苗的流程为：提取新冠病毒RNA→通过RT-PCR（反转录PCR）技术扩增筛选RBD蛋白基因→构建基因表达载体→导入CHO细胞（仓鼠卵巢细胞系）并培养→提取并纯化RBD蛋白→制成疫苗。图1为RBD蛋白基因结构与引物位置示意图，图2为运载体及酶切位点（注：图中限制酶的识别序列及切割形成的黏性末端均不相同；荧光蛋白基因的表达产物在紫色光照射下可发绿色荧光）。回答下列问题：

(1)通过RT-PCR技术扩增RBD蛋白基因时，需在引物______（填编号）的5'端分别加上限制酶______的碱基序列。
(2)构建基因表达载体时，一般使用两种限制酶切割质粒，目的是______；RBD基因应插入质粒的______之间。
(3)筛选含基因表达载体的CHO细胞时，操作是______。若要检测RBD疫苗的效果，以大鼠为实验材料，写出实验思路：______。

【推荐3】TALEN技术是一种靶向基因敲除技术，使用的基因敲除工具TALEN由人造TALE蛋白和FokⅠ(核酸内切酶)等组成。图1是TALE蛋白中的二联氨基酸(如NI、NG、NN、HD等，其中字母N、I、G、H、D分别代表一种氨基酸)与恒定识别DNA的四种碱基之间的对应关系，图2是TALEN技术的基本原理示意图，其中FokⅠ形成二聚体后才能切断DNA，导致DNA双链断裂，使基因被敲除。基因敲除基本步骤如下：

步骤1   TALE靶点识别模块构建   TALE的核酸识别单元中二联氨基酸NI识别A，NG识别T，HD识别C，NN识别G。因此设计相应TALE单元串联，使TALEN特异识别某靶点基因。
步骤2 获得完整的TALEN   将构建好的一对TALE靶点识别模块融合其他必要的序列，并与质粒构建基因表达载体(TALEN质粒对)。
步骤3 将TALEN质粒对转入细胞中实现目标基因敲除   将TALEN质粒对转入细胞后，其表达的蛋白可分别找到其DNA上的靶位点并与靶位点特异结合。FokI形成二聚体，发挥内切酶活性，于两个靶位点之间打断目标基因，诱发 DNA 损伤修复机制。由于在此修复过程中总是有一定的错误率存在，在修复中发生错误的个体即形成目标基因敲除突变体。
请回答：
（1）步骤1中，欲使TALEN特异识别靶点基因，需根据____构建一对TALE靶点识别模块。若图2中左侧TALE蛋白识别的基因部分序列为-GTC-，则对应的二联氨基酸序列应为____。
（2）步骤2中需要____的催化，要获得完整的TALEN，构建的基因表达载体中还需要融合____序列。
（3）步骤3中FokI二聚体作用的化学键是____。步骤3完成后可能获得多种DNA，可利用限制酶对相邻靶位点之间的相应片段进行切割，再根据切割后形成的DNA分子大小，运用____(技术)分离筛选出发生目标基因敲除的突变个体。
（4）科研人员使用TALEN技术对水稻光周期敏感蛋白基因P进行靶向敲除，以获得长日照条件下纯合光敏雄性不育新品种。已知水稻光周期敏感蛋白基因P只在花粉细胞中表达，使其能够合成淀粉。不含光周期敏感蛋白的水稻在长日照条件下表现为雄性不育，短日照条件下均为雄性可育。
①将TALEN技术处理得到的亲本水稻植株，种植在____日照条件下自交获得F₁。
②若要鉴定F₁是否为纯合光敏雄性不育新品种，可将F₁植株种植在____日照条件下，然后____，若未出现蓝色，则该植株为所需新品种。

【推荐1】【生物——选修3：现代生物科技专题】
科学家通过利用PCR定点突变技术改造Rubisco酶基因，提高了光合作用过程中Rubisco酶对CO₂的亲和力，从而显著提高了植物的光合作用速率，请回答下列问题：
（1）PCR过程所依据的原理是_______，该过程需要加入的酶是_________。利用PCR技术扩增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成______________________。
（2）该技术不直接改造Rubisco酶，而通过对Rubisco酶基因进行改造，从而实现对Rubisco酶的改造，其原因是_____________。和传统基因工程技术相比较，定点突变技术最突出的优点是________，PCR定点突变技术属于___________的范畴。
（3）可利用定点突变的DNA构建基因表达载体。常用________将基因表达载体导入植物细胞，将该细胞经植物组织培养技术培育成幼苗，从细胞水平分析所依据的原理是___________。

【推荐2】血管为肿瘤的增殖和转移提供了有利条件。E蛋白是人体内抑制血管生长的因子，可作为肿瘤治疗的潜在药物。某科研小组欲用图1所示的质粒构建E蛋白基因表达载体，让其在大肠杆菌中表达出E蛋白，图1中质粒上的。Amp^R为氨苄青霉素抗性基因，Tet^R为四环素抗性基因。回答下列问题：

(1)E蛋白基因上缺少限制酶的识别序列，构建基因表达载体时，为防止目的基因与质粒的自身环化并保证连接的方向性，需要在两种引物的_____端分别添加_____限制酶的识别序列，然后利用该对引物进行PCR 扩增E蛋白基因，使得E蛋白基因两端成功加上限制酶的识别序列。引物的作用是_____。
(2)在基因工程操作中，大肠杆菌是运用最广泛的工程菌，原因是_____（答出2点）。将重组质粒导入大肠杆菌前，先用Ca²⁺处理大肠杆菌，目的是_____。
(3)图1中质粒上的。Amp^R和Tet^R一般充当基因表达载体上的标记基因，其作用是_____。利用质粒上的标记基因，结合微生物的培养，可以淘汰不符合要求的大肠杆菌而获得成功转入重组质粒的大肠杆菌，则应将重组质粒导入_____（填“不抗氨苄青霉素抗四环素”“不抗四环素抗氨苄青霉素”或“不抗氨苄青霉素和四环素”）的受体大肠杆菌中。

【推荐1】下图为“乙肝基因工程疫苗”生产过程图解，质粒上箭头所指部位为相应的限制酶的切割位点。质粒中lacZ基因编码产生的酶可以分解培养基中的X-gal，产生蓝色物质，使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。请回答下列问题：

   

(1)过程①为了防止目的基因和质粒的自身环化，选用限制酶的最佳方案是___。

A．只有BamHI	B．BamHI和EcoRI
C．EcoRV和BamHI	D．EcoRV和EcoRI

(2)限制酶切割后，需要用DNA连接酶连接形成重组DNA分子，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是___。
(3)构建基因表达载体时，一般将目的基因插在启动子和终止子之间。启动子的作用是___。
(4)基因工程的四步程序是目的基因的获取、构建基因表达载体、___和目的基因的检测与鉴定。其中构建基因表达载体时，所用载体除了质粒以外，还有___（答出2点）。
(5)过程②处理大肠杆菌后，大肠杆菌处于___的生理状态。
(6)为了筛选含目的基因表达载体的大肠杆菌，可在培养大肠杆菌的通用培养基中额外加入___，培养一段时间后挑选出___（填“蓝色”或“白色”）的菌落进一步培养，从而获得大量目的菌。
(7)目的基因导入受体细胞后，常用___技术检测目的基因是否翻译出乙肝病毒外壳。

【推荐2】为研究干旱胁迫基因LEA和VOC对甘蓝型油菜油脂的积累机制，科研人员构建了两个基因表达载体。其中基因LEA与荧光素酶基因（Luc）构建成基因表达载体甲，基因VOC和标记基因构建成基因表达载体乙，相关序列及酶切位点如图所示。

(1)利用PCR扩增LEA基因时，需要在反应体系中添加的有机物质有引物、模板、___________还需要在引物的___________（填“3´端”或“5´端”）添加限制酶识别序列，添加序列对应的限制酶是___________，选择上述酶的依据是___________。
(2)为了构建基因表达载体甲，依据图中已知碱基序列，在PCR扩增仪中加入的引物的碱基序列为_________，扩增_____________代后会得到等长的8条DNA片段。
(3)农杆菌转化甘蓝型油菜细胞时，T-DNA的作用是___________，该过程发生的变异类型为___________
(4)乙酰-CoA羧化酶基因（AC）是油脂合成过程的关键酶基因，甘油三酯酯酶基因（ATGL）是油脂分解过程的关键酶基因。将基因表达载体甲、乙分别导入植物细胞培养成转基因植物A、B，在干旱胁迫的环境下培养两种转基因植物和正常植物，分别检测植物体内AC和ATGL基因的表达水平，结果如下图。

①在分子水平上，用____________方法检测AC酶和ATGL酶的含量可得到上述结果。
②基于以上研究，干旱胁迫基因LEA和VOC在甘蓝型油菜油脂积累中的机制是___________。

【推荐3】为扩大可耕地面积，增加粮食产量，沿海滩涂盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐碱基因培育出了耐盐碱水稻新品系。请据图回答下列问题：

限制酶	AluⅠ	EcoRⅠ	PatⅠ	SmaⅠ
切割位点	AG↓CT TC↑GA	G↓AATTC CTTAA↑G	CTGCA↓G G↑ACGTC	CCC↓GGG GGG↑CCC

几种限制酶识别序列及切割位点表
(1)获取真核生物的基因通常采用人工合成法，通过图示中①方法合成的耐盐碱基因中是不含____的，如果要将耐盐碱基因和质粒重组，应该在基因两侧的A 和 B 位置除了接上以上两个结构外还需分别加入_____限制酶识别序列，这样设计的优点是______。
(2)过程②采用PCR 技术扩增目的基因时，在PCR 反应体系的主要成分中应该包含：扩增缓冲液（含Mg²⁺）、水，4 种脱氧核糖苷酸、模板 DNA、TaqDNA 聚合酶和引物Ⅰ和引物Ⅱ，若在该反应体系中，目的基因扩增了 4 代，则共用了引物Ⅰ____个。
(3)PCR 反应中温度呈现周期性变化，其中加热到 90～95℃是____过程，然后冷却到 55-60℃使引物与互补 DNA 链结合，继续加热到 70～75℃，目的是_____。
(4)在步骤⑤⑥过程中都需用_____处理两类细菌。为了确认目的基因通过⑦过程导入植物细胞中后是否成功表达目的蛋白质，通常从分子水平进行检测的方法是用______法。
(5)艾弗里等人的肺炎双球菌转化实验也可以说是基因工程的先导，如果说他们的工作为基因工程理论的建立提供了启示，那么，这一启示是______       。

【推荐2】回答下列问题：
(1)干扰素是动物体内合成的一种糖蛋白，可以用于治疗病毒感染和癌症，设想建立乳腺生物反应器大量生产干扰素，需借助基因工程的方法，常以哺乳动物的受精卵为受体细胞。为了保证干扰素基因只在乳腺细胞内表达，构建表达载体时必须在目的基因的前端加入_____________。基因工程中往往不以原核细胞为受体细胞生产干扰素是由于有活性的干扰素需要_____________（填细胞器）的加工。
(2)干扰素体外保存相当困难，如果将其分子上的一个半胱氨酸变成丝氨酸，就可在-70℃条件下保存半年，给广大患者带来福音。对蛋白质进行改造，一般通过对基因的操作来实现，原因是：____________________（答出2点）。
(3)动物基因工程技术有可能使建立移植器官工厂的设想成为现实。实现这一目标的最大难题是免疫排斥。科学家正试图利用基因工程的方法对猪的器官进行改造以便获得对人无免疫排斥的可供移植的器官，所使用的方法是______________________。
(4)试管婴儿技术解决了部分夫妻不育的难题或生育健康后代的要求。它和母亲正常怀孕生产过程的相同之处是都是以___________为发育起点，不同之处在于试管婴儿是在体外进行受精后，在试管中进行胚胎培养；如果需要设计试管婴儿，还可以对胚胎进行___________，最后选取健康的胚胎进行胚胎移植，保证生出健康的孩子。

【推荐3】干细胞技术在再生医学中具有广阔的应用前景。我国科学家利用胚胎干细胞通过靶向编辑单个长寿基因（FOXO₃）产生了世界上首例遗传增强的人类血管细胞。这些血管细胞与野生型血管细胞相比，能延缓细胞衰老和增强心血管稳态。请回答下列问题：
（1）胚胎干细胞可从______获取，在功能上具有的特点是______。
（2）研究人员利用基因编辑技术置换了人类胚胎干细胞中FOXO₃基因的两个核苷酸，从而使FOX0₃蛋白结构改变，使其磷酸化和降解过程受到抑制。这一研究属于______的范畴；由此推断经过基因编辑的胚胎干细胞能延缓衰老的直接原因最可能是______。
（3）胚胎干细胞在培养时除了必须的营养条件外，还需要的气体环境是______；为防止代谢产物对细胞造成危害，应采取的措施是______。
（4）研究人员在培养液中加入______，可以诱导胚胎干细胞形成不同的血管细胞，这一过程的实质是______。