乳酸菌是乳酸的传统生产菌，但耐酸能力较差，影响产量。酿酒酵母耐酸能力较强，但不产生乳酸。研究者将乳酸菌的乳酸脱氢酶基因（LDH）导入酿酒酵母，获得能产生乳酸的工程菌株。下图为构建表达载体时所需的关键条件。
(1)据分析，利用PCR技术扩增LDH需要根据已知部分碱基序列设计引物，设计引物时应注意___________ ，扩增n次后，需要的引物的数量至少是___________ 个。研究发现，真核生物起始密码子序列偏好AUG，为保证扩增出的LDH以正确方向插入质粒需要利用双酶切技术，设计引物1的5'端序列时，应考虑___________ 。
(2)LDH的PCR产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定，在凝胶中LDH的迁移速率与___________ 有关，凝胶中LDH经过染色后可以利用波长300m的紫外灯检测。如果电泳的结果不止一条条带，其可能的原因是______________________ 。
(3)为了筛选出含重组质粒的酿酒酵母应该选择的标记基因为___________ ，原因是___________ ，请简单描述其筛选的思路：___________ 。
(1)据分析，利用PCR技术扩增LDH需要根据已知部分碱基序列设计引物，设计引物时应注意
(2)LDH的PCR产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定，在凝胶中LDH的迁移速率与
(3)为了筛选出含重组质粒的酿酒酵母应该选择的标记基因为
更新时间：2022-05-07 13:52:28
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【推荐1】人绒毛膜促性腺激素是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，由α链和β链（hCGβ）结合而成。近年研究显示，hCGβ可表达于结肠癌等多种恶性肿瘤细胞，与肿瘤的发生、发展及转移有一定关系。研发抗hCGβ疫苗已成为近年来肿瘤生物治疗新的热点，下图1为其制备的基本方案。请分析回答下列有关问题：
注1：甲序列指导合成的信号肽能引导后续合成的肽链进入内质网腔
注2：AOX1为甲醇氧化酶基因的启动子，只能在以甲醇为唯一碳源的培养基中正常表达
(1)图中hCGβ基因需要与甲序列一起构建形成融合基因，其目的是______ 。
(2)当目的基因两侧的小段序列与基因表达载体上某序列相同时，就可以发生同源切割，将目的基因直接插入。同源切割是一种代替_______ 将目的基因导入基因表达载体的方法。
(3)阶段Ⅱ将环化质粒导入CaCl2处理的大肠杆菌，然后在含有______ 的培养基中筛选得到含hCGβ基因表达载体的大肠杆菌后进行扩增。
(4)鉴定基因表达载体。为了检验目的基因是否融合成功，提取大肠杆菌中的质粒为模板，设计相应的引物对融合基因进行PCR，再将扩增产物进行电泳。电泳后得到图2所示结果，据图可判断______ 号样品最符合要求。
(5)阶段Ⅳ需将处理后的酵母菌接种在培养基上培养，该培养基不需要添加以下哪些成分_____ （a、氨苄青霉素 b、组氨酸 c、无机盐 d、琼脂），可在此培养基上生长的酵母菌即为含有hCGβ基因表达载体的目的菌株。将此菌株扩大培养后，离心取上清液，用______ 方法进行检测。若上清液中能检测到hCGβ蛋白，则说明hCGβ基因得以表达。
(6)从生产控制的角度分析，选用AOX1作为hCGβ基因启动子的优点是______ 。
注1：甲序列指导合成的信号肽能引导后续合成的肽链进入内质网腔
注2：AOX1为甲醇氧化酶基因的启动子，只能在以甲醇为唯一碳源的培养基中正常表达
(1)图中hCGβ基因需要与甲序列一起构建形成融合基因，其目的是
(2)当目的基因两侧的小段序列与基因表达载体上某序列相同时，就可以发生同源切割，将目的基因直接插入。同源切割是一种代替
(3)阶段Ⅱ将环化质粒导入CaCl2处理的大肠杆菌，然后在含有
(4)鉴定基因表达载体。为了检验目的基因是否融合成功，提取大肠杆菌中的质粒为模板，设计相应的引物对融合基因进行PCR，再将扩增产物进行电泳。电泳后得到图2所示结果，据图可判断
(5)阶段Ⅳ需将处理后的酵母菌接种在培养基上培养，该培养基不需要添加以下哪些成分
(6)从生产控制的角度分析，选用AOX1作为hCGβ基因启动子的优点是
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(0.4)
解题方法
【推荐2】水稻是一种盐敏感型作物，盐碱胁迫会抑制水稻的生长。S-腺苷甲硫氨酸（简称SAM）在调节植物生长发育、提高植物抗逆性等方面具有重要作用。研究人员对野生大豆进行盐胁迫处理后，克隆出SAM合成酶基因（简称SAMS基因），构建了SAMS基因的植物表达载体，以农杆菌介导法侵染水稻愈伤组织，从而培养出转基因水稻株系。
【SAMS基因的PCR扩增】
提取野生大豆DNA，采用PCR方法获取SAMS基因，反应程序如图所示。____________________ 。
(2)关于图中PCR的反应程序，下列叙述正确的是（ ）
(3)PCR中使用的聚合酶属于（ ）
(4)研究人员将步骤②的温度t1分别设置为50℃、 52℃、54℃、56℃和 58℃，进行了五组实验，结合PCR产物电泳检测结果分析，上图中t1温度应设置为________ 。
将扩增的SAMS基因片段与质粒pBI121重组，构建出表达载体pBIS。_______________________________ 。
注：↓表示限制酶的切割位点
【表达载体pBIS的转化】
用农杆菌介导法对构建的表达载体pBIS进行转化，过程如下图。
(7)步骤I-III中需要用固体培养的有___________ ，筛选时应加入试剂_________ 。
【水稻抗性苗耐盐碱性分析】
选取长势一致的野生型和转基因水稻幼苗，分别用含有0和200mmol·L－1 NaHCO3（pH8.4）的溶液浇灌，进行盐碱胁迫处理15d，持续观察植株生长状态，并在第15天测定存活率和相对含水量，存活率=存活株数/总株数×100%，相对含水量= (鲜重－干重)/鲜重×100%。结果如图。______________ 。
【SAMS基因的PCR扩增】
提取野生大豆DNA，采用PCR方法获取SAMS基因，反应程序如图所示。
(2)关于图中PCR的反应程序，下列叙述正确的是（ ）
| A．图中步骤①为变性，步骤②为退火 |
| B．预变性过程可促进模板DNA边解旋边复制 |
| C．后延伸过程可使目的基因的扩增更加充分 |
| D．延伸过程无需引物参与即可完成半保留复制 |
(3)PCR中使用的聚合酶属于（ ）
| A．以DNA为模板的RNA聚合酶 |
| B．以RNA为模板的RNA聚合酶 |
| C．以DNA为模板的DNA聚合酶 |
| D．以RNA为模板的DNA聚合酶 |
(4)研究人员将步骤②的温度t1分别设置为50℃、 52℃、54℃、56℃和 58℃，进行了五组实验，结合PCR产物电泳检测结果分析，上图中t1温度应设置为
将扩增的SAMS基因片段与质粒pBI121重组，构建出表达载体pBIS。
| Xho I | 5' C↓TCGAG 3' | Sal I | 5' G↓TCGAC 3' |
| BamH I | 5' G↓GATCC 3' | EcoR I | 5' G↓AATTC 3' |
【表达载体pBIS的转化】
用农杆菌介导法对构建的表达载体pBIS进行转化，过程如下图。
| A．野生大豆细胞 | B．农杆菌EHA105菌株 |
| C．含SAMS基因的农杆菌 | D．水稻愈伤组织细胞 |
(7)步骤I-III中需要用固体培养的有
【水稻抗性苗耐盐碱性分析】
选取长势一致的野生型和转基因水稻幼苗，分别用含有0和200mmol·L－1 NaHCO3（pH8.4）的溶液浇灌，进行盐碱胁迫处理15d，持续观察植株生长状态，并在第15天测定存活率和相对含水量，存活率=存活株数/总株数×100%，相对含水量= (鲜重－干重)/鲜重×100%。结果如图。
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(0.4)
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【推荐3】研究发现，实体肿瘤内部通常是缺氧的环境，蓖麻毒素蛋白（RTA）可作用于核糖体，使蛋白合成受阻，从而引起细胞死亡。TAT是一种短肽，可转导蛋白进入细胞，含有氧依赖性降解区域ODD（多肽）的融合蛋白可以适应低氧条件稳定存在，但在常氧条件下会被蛋白酶降解。科研人员以RTA作为抑制肿瘤细胞增殖的活性分子，利用TAT的作用将融合蛋白转运进入肿瘤细胞，并利用ODD的作用减轻RTA对正常细胞的毒性，分别构建了含TAT-RTA（660bp）和TAT-RTA-ODD（870bp）融合基因的表达载体，并成功得到相关融合蛋白。
(1)可采用PCR的方法获取融合基因TAT-RTA，需要根据TAT和RTA基因设计引物，引物的作用是____________ 。已知RTA基因和欲得到的TAT-RTA融合基因的结构如图1所示，TAT基因编码链序列5'ATGAGCTACGGCCGTAAAAAGAGACGCCAACGTAGA3′，为顺利构建表达载体，需要在引物1的5′端加入____________ 酶切位点，引物2的5′端加入____________ 酶切位点，利用TAT和RTA核酸序列设计引物时，要求在RTA蛋白的前端引入TAT短肽，请根据要求写出引物1____________ （写出引物5′端的12个碱基即可）。____________ 酶连接。但是在研究时，发现融合蛋白中没有His标签蛋白，据图分析原因是____________ 。可通过引物2的特殊设计使His标签正常表达，请结合图1和图2写出引物2____________ （引物中如需添加碱基补足对应的密码子，可以添加任意碱基）。
(1)可采用PCR的方法获取融合基因TAT-RTA，需要根据TAT和RTA基因设计引物，引物的作用是
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(0.4)
真题
名校
【推荐1】已知蛋白质混合液中硫酸铵浓度的不同可以使不同种类的蛋白质析出（或沉淀），随着硫酸铵浓度增加，混合液中蛋白质析出的种类和总量增加。下表是某蛋白质混合液中的不同蛋白质从开始析出到完全析出所需要的蛋白质混合液中的硫酸铵浓度范围。
请据表回答：
1．若只完全析出甲蛋白，混合液中最合适的硫酸铵浓度应为_____ 。
2．向该蛋白质混合液中加入硫酸铵溶液（或硫酸铵），使混合液中的硫酸铵浓度达到30%，会析出若干种蛋白质，它们分别是_____ 。
3．通过改变混合液中硫酸铵的浓度_____ （能、不能）从混合液中得到所有的、不含有其他蛋白质的乙蛋白，原因是 _____ 。
4．简要写出从该蛋白质混合液中分离出全部丁蛋白的实验设计思路。_____
5．如果蛋白质析出物中还含有一定量的硫酸铵，可用半透膜除去析出物中的硫酸铵。用半透膜能除去析出物中硫酸铵的原理是_____ 。
蛋白质混合液中的硫酸铵浓度（%） | 析出的蛋白质 |
15～20 23～30 25～35 38～40 | 甲蛋白质 |
1．若只完全析出甲蛋白，混合液中最合适的硫酸铵浓度应为
2．向该蛋白质混合液中加入硫酸铵溶液（或硫酸铵），使混合液中的硫酸铵浓度达到30%，会析出若干种蛋白质，它们分别是
3．通过改变混合液中硫酸铵的浓度
4．简要写出从该蛋白质混合液中分离出全部丁蛋白的实验设计思路。
5．如果蛋白质析出物中还含有一定量的硫酸铵，可用半透膜除去析出物中的硫酸铵。用半透膜能除去析出物中硫酸铵的原理是
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(0.4)
【推荐2】光合产物在源(叶片)和库(花、果实和种子)器官之间的分配与运输将直接影响农作物的产量。回答下列问题：
(1)水稻的卡尔文循环中第 一个光合还原产物是______ ，该产物在叶肉细胞的______ 中被转化为蔗糖。蔗糖从叶片运输到库器官的过程如图甲所示，筛管细胞消耗 ATP 形成的____ 驱动蔗糖逆浓度梯度进入筛管。______ ，引起光合产物分配异常，导致花器官发育异常。
进一步研究发现,生长素可促进转录因子OsARF18的表达, 而OsARF18抑制SUT1 的表达。为验证上述发现，研究者设计如下实验：
(3)实验方案:
①将野生型水稻随机分为两组，编号甲、乙，甲组(实验组)喷施______ ，乙组(对照组)______ ，另取dao水稻为丙组，不作处理。
②相同条件下培养, 检测OsARF18、SUTl的表达量。
(4)用柱形图表示甲、乙两组的预期结果。______
(5)分析与讨论
①检测OsARF18、SUT1 表达量时需先对蛋白质进行分离和纯化，利用SDS-聚丙酰胺凝胶电泳可分离不同大小的蛋白质分子，蛋白质分子量越大，迁移速度______ 。SDS会使蛋白质变为链状结构，可排除蛋白质的______ 对迁移速度的影响。
②若某水稻品系过量表达OsARF18基因，预测该水稻品系的产量会______ 。
③用 14CO₂饲喂野生型、dao的叶片24小时，测定两组植株各部位放射性强度，结果如图乙。结合上述内容分析，造成dao与野生型放射性分布不同的原因是_____ 。
(1)水稻的卡尔文循环中第 一个光合还原产物是
进一步研究发现,生长素可促进转录因子OsARF18的表达, 而OsARF18抑制SUT1 的表达。为验证上述发现，研究者设计如下实验：
(3)实验方案:
①将野生型水稻随机分为两组，编号甲、乙，甲组(实验组)喷施
②相同条件下培养, 检测OsARF18、SUTl的表达量。
(4)用柱形图表示甲、乙两组的预期结果。
(5)分析与讨论
①检测OsARF18、SUT1 表达量时需先对蛋白质进行分离和纯化，利用SDS-聚丙酰胺凝胶电泳可分离不同大小的蛋白质分子，蛋白质分子量越大，迁移速度
②若某水稻品系过量表达OsARF18基因，预测该水稻品系的产量会
③用 14CO₂饲喂野生型、dao的叶片24小时，测定两组植株各部位放射性强度，结果如图乙。结合上述内容分析，造成dao与野生型放射性分布不同的原因是
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(0.4)
【推荐3】回答有关蛋白质分离和纯化的问题
（1） 要获得血清蛋白的粗制品，必须将含有柠檬酸钠的血液进行_______________ 处理，然后将_________________ 装入透析袋中除去_____________________ 。
（2） 要获得血红蛋白，应如何破碎红细胞？_____________ 。
（3）下图为血清蛋白通过醋酸纤维薄膜的电泳图谱，你认为含量最多的蛋白质是_______________ ，含负电荷最多的球蛋白是_____________ ，相对分子质量最大的球蛋白是_________________ 。
（4）电泳是目前应用最为普遍的___________ 蛋白质的方法。
（1） 要获得血清蛋白的粗制品，必须将含有柠檬酸钠的血液进行
（2） 要获得血红蛋白，应如何破碎红细胞？
（3）下图为血清蛋白通过醋酸纤维薄膜的电泳图谱，你认为含量最多的蛋白质是
（4）电泳是目前应用最为普遍的
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(0.4)
【推荐1】中美研究人员发现了PYL9蛋白（一种提高植物抗旱性的蛋白），利用转基因技术让水稻自身产生大量PYL9蛋白，可显著提高其抗旱性。请回答下列问题：
（1）已知PYL9蛋白的氨基酸序列，培育转基因抗旱水稻可用____________ 方法来获得目的基因。构建基因表达载体用到的工具酶是____________________ 。
（2）将目的基因导入植物细胞最常用__________ 法。导入目的基因的重组细胞可通过____________ 技术培育成完整植株，这一过程体现了________________________ 。
（3）目的基因若在水稻细胞中表达，遗传信息流向是___________________________ ；检测水稻细胞中是否存在目的基因，在分子水平上采用的方法是_________________ ；检测水稻细胞中是否存在PYL9蛋白，在分子水平上采用的方法是________________ 。
（4）经研究发现PYL9蛋白是位于细胞膜上的一种脱落酸受体。干旱环境中水稻老叶内脱落酸的含量增加，能加速____________________ ，将节省的水分和养料转移到幼叶和芽中，增强了幼叶和芽的存活率。PYL9蛋白的作用能体现细胞膜_____________ 的功能。
（1）已知PYL9蛋白的氨基酸序列，培育转基因抗旱水稻可用
（2）将目的基因导入植物细胞最常用
（3）目的基因若在水稻细胞中表达，遗传信息流向是
（4）经研究发现PYL9蛋白是位于细胞膜上的一种脱落酸受体。干旱环境中水稻老叶内脱落酸的含量增加，能加速
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(0.4)
【推荐2】100多年前，“疫苗之父”巴斯德开创了第一次疫苗革命，其特点是接种灭活或减毒的病原微生物．20世纪70年代开始，现代生物技术的迅猛发展开创了第二次疫苗革命，使疫苗的研制进入分子水平．图1是1986年通过基因工程制备乙型肝炎表面抗原（HbsAg）从而获得乙肝疫苗的过程。
在如图1步骤①和③的过程中，需要用合适的限制酶切割乙肝表面抗原基因和质粒。现将乙肝表面抗原基因及质粒的部分限制酶的识别序列及位置表示为图2。质粒中的启动子是质粒中基因得以正常表达所必需的部分。lacZ基因合成某种酶，该酶能将无色染料X﹣gal变成蓝色，最终能在无色染料X﹣gal的培养基上将含该基因的菌落染成蓝色。
（1）为了避免自身环化及便于筛选，则切割质粒选用的限制酶是_____ ，切割乙肝表面抗原基因选用的限制酶是_____ 。
（2）为筛选含有乙肝表面抗原的大肠杆菌细胞，需要将导入操作之后的大肠杆菌接种到含_____ 的固体牛肉膏蛋白胨培养基上，挑选_____ 的菌落纯化培养。
（3）下列有关限制酶的叙述中，正确的是_____
A．限制酶催化的反应类型是氧化分解反应
B．限制酶破坏的是氢键
C．一种限制酶只能识别双链DNA中某种特定的脱氧核苷酸序列
D．EcoR酶与HindⅢ酶相比较，EcoR酶切割后DNA片段较容易分离
（4）在图1步骤④中，使用基因工程工具酶是_____ 。一个乙肝表面抗原基因与一个质粒重组的过程中（图1的步骤④），游离的磷酸基团数目减少_____ 个
（5）通过基因工程生产的疫苗与灭活或减毒的病原微生物的疫苗，在安全性方面的比较结果及理由是_____ 。
在如图1步骤①和③的过程中，需要用合适的限制酶切割乙肝表面抗原基因和质粒。现将乙肝表面抗原基因及质粒的部分限制酶的识别序列及位置表示为图2。质粒中的启动子是质粒中基因得以正常表达所必需的部分。lacZ基因合成某种酶，该酶能将无色染料X﹣gal变成蓝色，最终能在无色染料X﹣gal的培养基上将含该基因的菌落染成蓝色。
| 限制酶 | EcoR | BclⅠ | BamHⅠ | HindⅢ |
| 识别序列及切割位点 | G↓AATTC | T↓GATCA | G↓GATCC | A↓AGCTT |
（1）为了避免自身环化及便于筛选，则切割质粒选用的限制酶是
（2）为筛选含有乙肝表面抗原的大肠杆菌细胞，需要将导入操作之后的大肠杆菌接种到含
（3）下列有关限制酶的叙述中，正确的是
A．限制酶催化的反应类型是氧化分解反应
B．限制酶破坏的是氢键
C．一种限制酶只能识别双链DNA中某种特定的脱氧核苷酸序列
D．EcoR酶与HindⅢ酶相比较，EcoR酶切割后DNA片段较容易分离
（4）在图1步骤④中，使用基因工程工具酶是
（5）通过基因工程生产的疫苗与灭活或减毒的病原微生物的疫苗，在安全性方面的比较结果及理由是
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(0.4)
【推荐3】材料一：为使水稻获得抗除草剂性状，科研人员将除草剂草甘膦抗性基因转入水稻植株，获得抗草甘膦转基因水稻。
材料二：利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似（如下图所示）。图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。
(1)将草甘膦抗性基因作为目的基因，与Ti质粒构建基因表达载体。目的基因表达载体进入细胞后，Ti质粒上的____ 区段可转移到油菜细胞的基因组中。为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用2种限制酶，选择的原则是____ 。（编号选填）
①Ti质粒内，每种限制酶只有一个切割位点
②草甘膦抗性基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点
③酶切后，草甘膦抗性基因形成的两个黏性末端序列不相同
④酶切后，Ti质粒形成的两个黏性末端序列相同
(2)取某品种水稻的幼胚，先进行消毒处理，然后接种到培养基中，用____ 侵染该愈伤组织。
(3)利用PCR技术，可以鉴定被侵染的愈伤组织中是否含有草甘膦抗性基因。草甘膦抗性基因的部分序列如下：
5′—ATGGCT…………AGGAAC—3′
3′—TACCGA…………TCCTTG—5′
根据上述序列应选择引物____ （编号选填）进行PCR。
①引物：5′—TACCGA—3′
②引物：5′—GTTCCT—3′
③引物：5′—AUGGCU—3′
④引物：5′—ATGGCT—3′
(4)第____ 轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段，第5轮循环后，产物中两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段有____ 个，若进行30轮循环，需引物A____ 个。
材料二：利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似（如下图所示）。图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。
(1)将草甘膦抗性基因作为目的基因，与Ti质粒构建基因表达载体。目的基因表达载体进入细胞后，Ti质粒上的
①Ti质粒内，每种限制酶只有一个切割位点
②草甘膦抗性基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点
③酶切后，草甘膦抗性基因形成的两个黏性末端序列不相同
④酶切后，Ti质粒形成的两个黏性末端序列相同
(2)取某品种水稻的幼胚，先进行消毒处理，然后接种到培养基中，用
(3)利用PCR技术，可以鉴定被侵染的愈伤组织中是否含有草甘膦抗性基因。草甘膦抗性基因的部分序列如下：
5′—ATGGCT…………AGGAAC—3′
3′—TACCGA…………TCCTTG—5′
根据上述序列应选择引物
①引物：5′—TACCGA—3′
②引物：5′—GTTCCT—3′
③引物：5′—AUGGCU—3′
④引物：5′—ATGGCT—3′
(4)第
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(0.4)
解题方法
【推荐1】切割DNA分子的工具是限制性内切核酸酶，这类酶主要是从原核生物中分离纯化出来的。迄今分离得到的限制酶有数千种，其中许多已经被商业化生产。
(1)限制酶在原核生物中的主要作用是___ ，限制酶能够识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的___ 键断开。
(2)如图将质粒A和目的基因正确连接构建重组质粒B，设计扩增目的基因的引物时，在两种引物的5'端分别添加___ （填限制酶）的识别序列，选用___ （填限制酶）切割质粒A，酶切后的载体和目的基因片段通过___ （填“E.coli”或“T4”）DNA连接酶作用后获得重组质粒。
(3)导入重组质粒的大肠杆菌对两种抗生素的抗性是___ 。若从平板上长出的菌落中提取重组质粒B，用Sau3AⅠ进行完全酶切，最多可以得到___ 种大小不同的DNA片段。对重组质粒进行测序，若目的基因与质粒正确连接，则图中M连接处的序列可能是___ 。
A.5′-GGATCCCGCAGCAA-3′
B.5′-CCCGGGATCTACGC-3′
C.5′-TGATCCATCTACGC-3′
D.5′-TGATCACGCTACTC-3′
(1)限制酶在原核生物中的主要作用是
(2)如图将质粒A和目的基因正确连接构建重组质粒B，设计扩增目的基因的引物时，在两种引物的5'端分别添加
| 限制酶 | 识别序列及切割位点（5′→3′） |
| BamH I | G↓GATCC |
| Bcl I | T↓GATCA |
| Sma I | CCC↓GGG |
| Sau3A I | ↓GATC |
(3)导入重组质粒的大肠杆菌对两种抗生素的抗性是
A.5′-GGATCCCGCAGCAA-3′
B.5′-CCCGGGATCTACGC-3′
C.5′-TGATCCATCTACGC-3′
D.5′-TGATCACGCTACTC-3′
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(0.4)
【推荐2】阅读下列材料，完成下面小题。
产肠毒素大肠杆(ETEC)能引起幼畜发生急性严重腹泻，其直接致病因子为肠毒素，包括热不稳定肠毒素(LT)和热稳定肠毒素(ST)两种。LT由两类功能性亚单位(LTA、LTB)组成，其中LTB具有免疫原性；ST包括ST1、ST2两个亚型，均为小分子多肽，免疫原性弱，构建ST1基因与LTB基因的融合表达质粒，使其表达的ST1具有免疫原性，为研制抗毒素疫苗做好上游工作。
(1)从ETEC中扩增得到LTB和ST1两个基因片段，并设计引物：P1、P2为扩增LTB基因序列的引物，P3、P4为扩增ST1基因序列的引物。其中P2、P3中的部分是人工合成能互补的Linker(连接基团)。制备LTB-ST1融合基因的过程如下图所示。
下列叙述错误的是 。
(2)下列有关“表达LTB-ST1融合蛋白基因工程菌的构建与表达”的叙述正确的是______ 。
①选用的质粒载体中需包含复制原点、多种限制酶的识别位点和标记基因等
②构建重组质粒表达载体时，LTB-ST1融合基因两端需要包含启动子和终止子
③在筛选重组菌时，通常应设置未经转化的菌株作为阴性对照
④检测到重组菌能表达融合抗原时，还需要进行进一步检测，才可作为重组工程菌株用于发酵制备抗毒素疫苗
产肠毒素大肠杆(ETEC)能引起幼畜发生急性严重腹泻，其直接致病因子为肠毒素，包括热不稳定肠毒素(LT)和热稳定肠毒素(ST)两种。LT由两类功能性亚单位(LTA、LTB)组成，其中LTB具有免疫原性；ST包括ST1、ST2两个亚型，均为小分子多肽，免疫原性弱，构建ST1基因与LTB基因的融合表达质粒，使其表达的ST1具有免疫原性，为研制抗毒素疫苗做好上游工作。
(1)从ETEC中扩增得到LTB和ST1两个基因片段，并设计引物：P1、P2为扩增LTB基因序列的引物，P3、P4为扩增ST1基因序列的引物。其中P2、P3中的部分是人工合成能互补的Linker(连接基团)。制备LTB-ST1融合基因的过程如下图所示。
下列叙述错误的是 。
| A．PCR1和PCR2通常不能在一个反应体系中同时进行 |
| B．设计引物时，应该将Linker添加在P2、P3的5'端 |
| C．获得①中的两条链至少经过3轮PCR1和PCR2 |
| D．①→②过程利用Linker获得的融合基因需要DNA连接酶 |
①选用的质粒载体中需包含复制原点、多种限制酶的识别位点和标记基因等
②构建重组质粒表达载体时，LTB-ST1融合基因两端需要包含启动子和终止子
③在筛选重组菌时，通常应设置未经转化的菌株作为阴性对照
④检测到重组菌能表达融合抗原时，还需要进行进一步检测，才可作为重组工程菌株用于发酵制备抗毒素疫苗
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(0.4)
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【推荐3】[生物——选修3:现代生物科技专题]
为提高小麦的品质和抗性，研究人员将普通小麦与几种不同品种的禾草进行植物体细胞杂交研究，禾草与小麦的亲缘关系越近，越容易产生杂种植株。回答下列问题：
（1）为了解不同禾草与小麦亲缘关系的远近，先将小麦分别与三种禾草进行DNA分子杂交,结果如下，说明禾草____________ 与小麦的亲缘关系最近,理由是__________________________ 。
（2）在进行体细胞杂交之前，必先用纤维素酶和果胶酶处理，获得__________ ,再用聚乙二醇诱导细胞融合并培养形成愈伤组织,一段时间后,将生长良好的愈伤组织转接到_______________ 上，可诱导出试管苗。
（3）植物组织培养过程中要求无菌操作以防止杂菌污染,原因是______________________ 。
为提高小麦的品质和抗性，研究人员将普通小麦与几种不同品种的禾草进行植物体细胞杂交研究，禾草与小麦的亲缘关系越近，越容易产生杂种植株。回答下列问题：
（1）为了解不同禾草与小麦亲缘关系的远近，先将小麦分别与三种禾草进行DNA分子杂交,结果如下，说明禾草
（2）在进行体细胞杂交之前，必先用纤维素酶和果胶酶处理，获得
（3）植物组织培养过程中要求无菌操作以防止杂菌污染,原因是
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