针对新冠病毒（SARS-CoV-2）的重组蛋白疫苗、核酸疫苗（包括 DNA 疫苗和RNA 疫苗）等疫苗都在研发当中。下图为其中一种疫苗的研发思路，图中①~⑦表示过程，虚线箭头表示 NcoⅠ、SphⅠ、NheI、BamHⅠ的酶切位点（四种酶的识别序列详见表），标记基因 SUC2 控制合成蔗糖酶，使 P 型酵母菌能利用培养基中的蔗糖生存。

限制酶	NcoⅠ	SphⅠ	NheI	BamHⅠ
识别序列和切割位点	C↓CATGG	GCATG↓C	G↓GATCC	G↓CTAGC

(1)图中①过程需要使用 _____酶先得到 cDNA，再使用PCR 技术扩增得到S 基因。
(2)为使③过程顺利进行，需使用限制酶 _____切割质粒B。
(3)图中表示筛选的过程是 _____（填编号），为达到利用标记基因筛选的目的，普通的P 型酵母菌应该满足的代谢特点是_____。
(4)重组疫苗注入志愿者体内后， S 蛋白基因指导合成的 S 蛋白作为_____，刺激机体产生能与之相结合的抗体，抗体的分泌量可作为检测疫苗对志愿者免疫效果的指标。参加临床试验的志愿者需要满足的条件之一是_____（填“有”或“无”）SARS-CoV-2 感染史，理由是_____。
(5)新型冠状病毒感染的常规检测方法是通过实时荧光 PCR 鉴定。实时荧光 PCR 扩增目的基因，需额外添加荧光标记探针（一小段单链 DNA，可与目的基因中部序列特异性结合）。当探针完整时，不产生荧光。在PCR 过程中，与目的基因结合的探针被TaqDNA 聚合酶水解，R 与 Q 分离后，R 发出的荧光可被检测到（如图甲），通过实时荧光 PCR 检测新型冠状病毒感染时，检测到的荧光强度变化如图乙。

①与指数增长期相比，线性增长期目的基因数量的增长率下降，原因有_____。
②Ct 值的含义：在PCR 扩增过程中，每个反应管内的荧光信号达到设定的荧光阈值时所经历的扩增循环数。因此，当样本中初始模板越多时，Ct 值就_____。
③某新型冠状病毒核酸检测说明书标明，Ct≤37 判定为阳性，Ct>40 或无Ct 值判定为阴性。图乙所示新型冠状病毒核酸检测结果应判定为_____。
④阴性结果也不能排除新型冠状病毒感染。可能产生假阴性的因素有_____。
a、取样太早，样本中病毒量少，达不到实时荧光PCR 检测阈值
b、样本被污染，RNA 酶将病毒 RNA 降解
c、病毒发生变异