【推荐1】DDX5基因在细胞周期调控、肿瘤发生等方面发挥重要作用。研究人员运用CRISPR-Cas9基因编辑技术对口蹄疫病毒易感的PK-15细胞株中的DDX5基因进行敲除，为后续研究DDX5基因在病毒感染中的作用提供基础。请据图回答下列问题。

(1)图1中，Ori是_______（酶）首先结合的核苷酸序列。构建CRISPR-Cas9表达载体时使用的工具酶主要有______。 结合对图2中CRISPR-Cas9技术原理的理解，图1表达载体中需要插入两种sgRNA基因，原因是_____。
(2)研究中先将CRISPR-Cas9表达载体导入大肠杆菌DH5a，再将菌液利用________法接种到加有________的细菌培养基上，待菌落长成后，直接挑取菌落加入到PCR反应系统中进行基因鉴定。PCR过程中不需要先提取细菌DNA的原因是______。
(3)研究中采用培养转化的大肠杆菌对CRISPR-Cas9表达载体进行扩增。与PCR相比，利用大肠杆菌进行目的基因扩增的优点有________、____________。

【推荐2】研究表明，HER2/neu是一种原癌基因，它表达的H蛋白在多种恶性肿瘤特别是乳腺癌细胞中过量表达。抗H蛋白单克隆抗体能抑制过量表达H蛋白的乳腺癌细胞的生长，目前已成为有效的生物治疗手段。

（1）原癌基因的作用是____________________。
（2）H蛋白是一个跨膜蛋白，结构如图所示。制备免疫小鼠用的H蛋白（抗原）时，应构建胞外区基因，转入原核细胞表达并提纯。选择胞外区的原因是_________________。为了扩增出大量胞外区需要用到PCR技术。常规PCR技术一般包括变性、退火、延伸等步骤，退火的目的是________________________。设计引物是PCR技术的关键步骤之一，某同学设计的两组引物如下表所示。_________（填“引物对A”或“引物对B”）设计不合理，并说出不合理的理由：______________________________________。

引物对A	P1   AAGCCGGGCGCGCCCGGAA P2   TTCGGCCCGCGTTATGCGCG
引物对B	S1   GTCCGCTAGTGGCTGTG S2   AGCTGGCGTTTAGCCTCG

（3）制备抗H蛋白单克隆抗体时，需将H蛋白注射到小鼠体内。这样做的目的是_____________________________。制备抗H蛋白单克隆抗体时，需要用到细胞融合技术，该技术的主要优点是_____________________________________。
（4）治疗乳腺癌时，方法之一是单独使用抗H蛋白单克隆抗体，试写出治疗乳腺癌的另一种疗效高、毒副作用小的、不损伤正常细胞的方法：________________。

【推荐3】番茄是自花传粉作物，其果实营养丰富，广受人们喜爱。杂种优势能极大提高番茄的产量、抗病及抗逆表现，因此番茄生产基本上都是应用杂交种。回答下列问题：
(1)研究人员发现一株苗期绿茎突变体雄性不育系（甲）。将该突变体与野生型（紫茎）杂交，F₁均为紫茎。F₁自交，F₂出现紫茎和绿茎，这种现象在遗传学上称为___________。上述杂交实验中，在授粉前需对突变体雄性不育系（甲）采取的操作是__________。
(2)SSR是DNA中的简单重复序列，非同源染色体和不同品种的同源染色体上的SSR都不相同，常用于染色体的特异性标记。研究者将F₁自交后提取F₂中紫茎和苗期绿茎各100株单株的叶肉细胞DNA，将表型一致的植株的DNA混合。PCR扩增不同样本中的SSR遗传标记，用于确定苗期绿茎基因在番茄染色体上的位置。
①PCR过程每次循环分为3步，其中发生引物与单链DNA结合的步骤称为_________。PCR反应的缓冲液中除加入叶肉细胞的DNA、脱氧核苷酸、Mg²⁺外，还需加入______________。（答出两点即可）
②实验证明苗期绿茎基因位于4号染色体上，请在答题卡的电泳图（如图）中画出能最有力证明该结论的实验结果___________（将对应位置的条带涂黑）

③科学家又发现一株苗期绿茎单基因隐性突变体乙。为证明这两种苗期绿茎突变性状是由位于非同源染色体上的非等位基因控制的，选择4号染色体上的另一SSR设计引物。将突变体乙和野生型杂交得到F₁，F₁自交，取F₂突变体乙100株，对获得的F₂突变体100株进行SSR扩增，结果如下图。当F₂中三种条带类型的比例为______________时，说明两种突变体是由非同源染色体的非等位基因控制的。

(3)苗期绿茎突变体甲雄性不育系在环境温度或光照时间的影响下可能恢复育性。与普通雄性不育系相比，该突变体在实际生产中应用的优势是_____________________。

【推荐1】靛蓝是最早发现的天然染料之一。研究人员将靛蓝色素酶基因（IDG）与启动子PTL12相连以构建基因表达载体（如图，KpnI、HindⅢ、BamHI、PstI代表不同限制酶，图中质粒上酶的位置为其对应的酶切位点），并最终培育出能在棉纤维细胞中表达靛蓝色素酶的彩色棉新品种。请据图回答下列问题：

(1)图中所示是基因工程操作步骤中的___。
(2)启动子的作用是___，本研究中将IDG与启动了PTL12结合的主要目的是___。
(3)过程①②都使用KpnI切割质粒，目的是___，过程③使用的Ti质粒中的T-DNA内部至少应含有的限制酶是___。
(4)利用农杆菌转化法将目的基因导入棉花细胞的过程：首先将___转入农杆菌，然后通过农杆菌侵染植物细胞，将___整合到受体植物细胞的___上。

【推荐2】科学家将Oct3/4、Sox2、c-Myc和Klf4基因通过逆转录病毒转入小鼠成纤维细胞中，然后在培养ES细胞的培养基上培养这些细胞。2~3周后，这些细胞显示出ES细胞的形态、具有活跃的分裂能力，它们就是iPS细胞。请回答下列问题。
(1)在这个实验过程中，逆转录病毒的作用是什么？_____
(2)如何证明iPS细胞的产生不是由于培养基的作用？_____
(3)研究者想了解Oct3/4、Sox2、c-Myc和Klf4基因在诱导iPS细胞时，每个基因作用的相对大小，该如何进行实验？请你给出实验设计的思路。_______
(4)若将病人的皮肤成纤维细胞诱导成iPS细胞，再使它转化为需要的细胞，用这些细胞给该病人治病，这是否会引起免疫排斥反应？_____为什么？_____考虑到iPS细胞具有分裂活性，治疗时可能存在什么风险？______

【推荐3】回答基因工程相关的问题。
棉花是重要的经济植物，其会被害虫感染，利用基因工程培育抗虫棉花是害虫防治的有效手段。胰蛋白酶抑制剂能干扰昆虫的代谢，引起昆虫死亡，但对人体无害。科学家将马铃薯胰蛋白酶抑制剂基因（Pin﹣Ⅱ）通过农杆菌导入棉花细胞，培育成了抗虫棉花。图2中Ap^r表示氨苄青霉素抗性基因，Ne^r表示新霉素抗性基因，复制原点是质粒DNA复制的起点，使其能在受体细胞中存在和遗传。箭头表示识别序列完全不同的4种限制酶的酶切位点。

(1)上述转基因技术属于　　。

A．动物基因工程	B．微生物基因工程
C．植物基因工程	D．质粒基因工程

(2)上述基因工程中，用限制酶_____切割，取下目的基因，能够和图2的质粒形成重组质粒。
(3)上述基因工程中，导入受体细胞的重组DNA分子为　　。

A．目的基因+棉花基因	B．目的基因+运载体
C．目的基因+棉花基因+运载体	D．棉花基因+运载体

(4)成功导入重组质粒的细胞会表现为　　。

A．抗氨苄青霉素，不抗新霉素	B．抗氨苄青霉素，也抗新霉素
C．不抗氨苄青霉素，抗新霉素	D．不抗氨苄青霉素，也不抗新霉素

【推荐2】研究者将杨树中的重金属转运蛋白HMA3基因与外源高效启动子连接，导入杨树基因组中，如图1所示。培育转基因杨树，以提高对重金属污染土壤的生物修复能力。
   
回答下列问题：
(1)图2是高效启动子、HMA3基因的DNA和载体的限制性内切核酸酶酶谱。为了成功构建重组表达载体，确保目的基因正确插入载体，最好选用____、____酶切割HMA3基因的DNA和载体。
   
(2)将杨树叶片与重组农杆菌共培养以进行遗传转化，农杆菌可将外源基因递送到植物细胞基因组中的机理为____。考虑转基因技术的安全性，选用____（填“不育”或“可育”）株系作为实验材料，选此株系的原因为____。
(3)为检测获得的转基因杨树苗中是否含有导入的HMA3基因，同时避免内源HMA3基因的干扰，在进行PCR扩增时，应选择的引物组合为____（填标号）。

A．①+③

B．①+④

C．③+②

D．③+④

【推荐3】酵母菌絮凝是指菌体细胞间通过细胞壁相互粘附、聚集成团的现象。适当提高酵母的絮凝能力，有助于发酵后细胞和产物的分离，节约生产成本。科研人员为研究R基因对酵母菌絮凝性能的影响，用基因工程技术获得了R基因被敲除的酵母菌菌株，主要步骤如图(G418为一种氨基糖苷类抗生素)。请据图回答下列问题。

(1)过程①采用PCR技术获取R基因左右两端的N片段和C片段，除了图中条件外，还需提供的是4种脱氧核苷酸、__________和含Mg²⁺的缓冲溶液。若引物2和引物4分别添加了Mlu I(限制酶)的识别序列，则引物1和引物3的5′端分别添加____________的识别序列。
(2)过程③中用________法将构建的重组质粒导入酵母菌，再利用含_________的培养基筛选出重组酵母，再挑取单菌落进行PCR扩增，验证酵母细胞R基因是否被敲除，则扩增时选择引物组合是_________________。
(3)科研人员继续将野生酵母菌和R基因敲除酵母菌的菌液接种到装有麦芽汁的锥形瓶中，一定条件下静置发酵7天，测定酒精发酵能力和絮凝能力，结果如表。

指标种类	酒精发酵能力	絮凝能力
野生酵母菌	4.5%	63.1%
R基因敲除酵母菌	4.5%	83.1%

①酒精发酵期间，每个锥形瓶应注意保持___________条件和定期排气。
②实验结果表明，请判断R基因敲除酵母菌是否符合生产需求并说出你的判断依据：______。
(4)科研人员又将不同浓度梯度的R基因敲除酵母菌菌液和野生酵母菌菌液点样于含30g/mL钙荧光白(细胞壁抑制剂，破坏细胞壁的正常组装)的YPD培养基上，结果如图。推测R基因敲除酵母菌絮凝能力变化的原因是__________。

【推荐2】动物基因工程的应用前景十分广阔。比如，可以利用基因工程技术构建乳腺生物反应器，使哺乳动物本身变成“批量生产药物的工厂”，还可以利用转基因动物作器官移植的供体。
（1）基因工程中，cDNA 文库中的基因在基因组文库中__________（填“都有”“都没有”或“有一部分”）。
（2）构建乳腺生物反应器时，科学家将药用蛋白基因与__________等调控组建重组在一起，通过__________的方法，导入哺乳动物的__________中。然后将其送入母体，使其生长发育成转基因动物。
（3）人体器官移植短缺是一个世界性难题。而猪的内脏构造、大小、血管分布与人的极为相似，而且猪体内的病毒远远少于灵长类动物。所以，科学家将目光集中在小型猪身上，但实现这一目标的最大难题是__________。目前采用的方法是将器官供体基因组导入__________以抑制抗原决定基因的表达来培育出符合条件的转基因克隆猪器官。
（4）如果将某种抗性基因导入受体细胞后，仅一条染色体含抗性基因，该基因的传递_____（填“遵循”或“不遵循”）孟德尔分离定律。试说明判断依据：__________。

【推荐3】干扰素是治疗癌症的药物，它必须从血中提取，每升人血只能提取O．05μg，所以价格昂贵。现在美国加利福尼亚的基因公司用下图的方式生产干扰素。试分析原理和优点：

(1)从人的淋巴细胞中取出_____________，使它同细菌质粒相结合，然后移植到酵母菌体内，让酵母菌___________________。
(2)酵母菌能用__________方式繁殖，速度很快，能大量生产____________，不但提高了产量也降低了成本。
(3)中国青年科学家陈大炬成功地把人的干扰素基因移植到烟草的DNA分子上，使烟草获得了抗病毒的能力，试分析：
①人的基因之所以能接到植物体内，其物质基础是______________________。
②烟草有了抗病能力，这表明烟草体内产生了___________________。这个事实说明，人和植物共用一套____________________，蛋白质合成方式__________。
(4)下图示真核生物染色体组成。1、2、3、4分别表示 （       ）     

A．胸腺嘧啶、非编码区、内含子、外显子

B．胸腺嘧啶、非编码序列、外显子、内含子

C．尿嘧啶、非编码区、外显子、密码子

D．尿嘧啶、非编码序列、内含子、外显子