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题型:非选择题-解答题 难度:0.4 引用次数:758 题号:17611203
草甘膦是一种非选择性除草剂,杀死杂草的同时也杀死农作物。它与植物体内的PEP(磷酸烯醇式丙酮酸)结构相似,可与PEP竞争结合EPSP合酶,阻止PEP转化,影响植物细胞正常代谢。我国科学家从草甘膦施用土壤中的某微生物体内获取GR79基因(草甘膦抗性基因),并将其导入植物体细胞中获得抗草甘膦的转基因植物。据图回答下列问题:

(1)GR79基因发挥抗草甘膦作用的机理可能是______。从分离得到的某土壤微生物体内获取含有GR79基因的质粒,并将其保存在某细菌群体(受体菌)中,各个受体菌分别含有该微生物的不同的基因,这些受体菌群中该微生物的所有DNA序列克隆的汇总,称为______
(2)据图推测,利用PCR技术扩增GR79基因时,需设计能与该基因两条模板链3’端______的引物;同时为构建该基因表达载体,需在引物1和引物2的______端加上限制酶______的识别序列。
(3)实验中常采用______法将GR79基因表达载体导入植物受体细胞;为避免该基因在近缘农作物中传播,可将其导入植物受体细胞的______;除温度、酸碱度等环境因素外,影响该基因导入植物受体细胞成功率的因素有______
(4)为检测GR79基因是否导入植物体细胞,可在培养基中添加______筛选含该基因的受体细胞;也可利用______技术更加精准地进行检测,若待检DNA中含有该基因,则会发现硝酸纤维素膜上会出现______
(5)经检测,科研人员发现部分获得GR79基因的植物幼苗不具有抗草甘膦的能力,原因可能是______

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非选择题-解答题 | 较难 (0.4)
【推荐1】学习以下材料,回答(1)-(4)小题。
肿瘤来源的外泌体促进预转移部位免疫抑制的机制
研究发现,肿瘤细胞转移需要有免疫抑制表型的巨噬细胞提前浸润到预转移部位。那么这些巨噬细胞是如何获得免疫抑制表型的呢?
肿瘤细胞与微环境中各种细胞间的信息传递在肿瘤转移中发挥着重要的作用,而外泌体是细胞间通讯的重要媒介之一,科研工作者利用肿瘤来源的外泌体进行了一系列实验。
研究人员将小鼠肺上皮细胞和小鼠肺癌细胞的外泌体分离出来,通过尾静脉将它们注射到已经移植肺癌细胞皮下瘤的小鼠体内,空白对照组注射等量的生理盐水。结果显示,注射了肺癌细胞来源的外泌体的小鼠,肺部有更多的转移细胞,而且这些小鼠肺部巨噬细胞表面的PD-L1蛋白含量比其它两组要高。通过RT-PCR技术分析肿瘤来源外泌体处理后的巨噬细胞内PD-L1的mRNA含量,结果显示巨噬细胞中PD-L1的mRNA增加。
科研人员用小鼠肺癌细胞的外泌体处理后的巨噬细胞与T细胞共培养,与没有用外泌体处理的巨噬细胞对比,实验组中T细胞的增殖减弱。
为了研究肿瘤细胞外泌体导致巨噬细胞PD-L1蛋白表达上调的机制,研究人员将肺癌细胞来源的外泌体注射到TLR2(巨噬细胞的一种膜蛋白)缺陷的小鼠体内,结果显示,巨噬细胞的PD-L1没有增加;将肺癌细胞来源的外泌体注射到已经移植了肺癌细胞的TLR2缺陷的小鼠体内,与野生型小鼠相比,巨噬细胞的PD-L1没有增加,且小鼠转移细胞明显减少。
进一步的研究发现肿瘤细胞的外泌体与TLR2结合后能够激活NF-kB,NF-kB作为关键的转录因子,可以促进葡萄糖转运蛋白基因的表达;同时NF-kB可使巨噬细胞内NOS2的量增多,抑制线粒体氧化磷酸化,导致更多的丙酮酸转化为乳酸。研究人员用乳酸直接处理巨噬细胞,发现PD-L1表达增加。
(1)在特异性免疫反应中,识别并接触、裂解肿瘤细胞的是_____________细胞,属于_____________免疫。
(2)本文中的RT-PCR技术需要先提取肿瘤来源外泌体处理后的巨噬细胞的mRNA,然后在_____________酶的作用下获得cDNA,再用_____________的DNA片段设计引物进行扩增,反映PD-L1在巨噬细胞中的_____________水平,用以表示其表达水平。
(3)从文中信息分析,下列叙述合理的是_____________。
A.TLR2是巨噬细胞膜上肺癌细胞来源的外泌体的受体蛋白
B.巨噬细胞PD-L1的表达具有增强免疫应答的作用
C.肿瘤细胞的外泌体可以增加巨噬细胞对葡萄糖的摄取
D.免疫抑制表型的巨噬细胞具有有氧呼吸减弱的表型
E.无氧呼吸在驱动巨噬细胞PD-L1表达中发挥重要作用
(4)从抑制癌细胞转移的角度提出肿瘤治疗思路_____________
2022-04-24更新 | 333次组卷
非选择题-解答题 | 较难 (0.4)
【推荐2】切割DNA分子的工具是限制性内切核酸酶,这类酶主要是从原核生物中分离纯化出来的。迄今分离得到的限制酶有数千种,其中许多已经被商业化生产。
(1)限制酶在原核生物中的主要作用是___,限制酶能够识别双链DNA分子的特定核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的___键断开。
(2)如图将质粒A和目的基因正确连接构建重组质粒B,设计扩增目的基因的引物时,在两种引物的5'端分别添加___(填限制酶)的识别序列,选用___(填限制酶)切割质粒A,酶切后的载体和目的基因片段通过___(填“E.coli”或“T4”)DNA连接酶作用后获得重组质粒。
   
限制酶识别序列及切割位点(5′→3′)
BamH IG↓GATCC
Bcl IT↓GATCA
Sma ICCC↓GGG
Sau3A I↓GATC

(3)导入重组质粒的大肠杆菌对两种抗生素的抗性是___。若从平板上长出的菌落中提取重组质粒B,用Sau3AⅠ进行完全酶切,最多可以得到___种大小不同的DNA片段。对重组质粒进行测序,若目的基因与质粒正确连接,则图中M连接处的序列可能是___
A.5′-GGATCCCGCAGCAA-3′
B.5′-CCCGGGATCTACGC-3′
C.5′-TGATCCATCTACGC-3′
D.5′-TGATCACGCTACTC-3′
2024-03-27更新 | 111次组卷
非选择题-实验题 | 较难 (0.4)
名校
【推荐3】摩尔根和他的学生通过果蝇杂交实验发现同源染色体上的两个非等位基因距离越远,发生基因重组的概率越大。目前,科研人员将传统杂交实验与分子遗传学相结合,可减轻杂交实验的工作量。果蝇的长翅和残翅受2号染色体上一对等位基因(Vg/vg)控制,在Vg/vg基因附近设计了两对特异性引物(R15和R24,如图1所示),并分别以纯合长翅果蝇和纯合残翅果蝇的DNA作为模板进行PCR,扩增产物的琼脂糖凝胶电冰结果如图2所示。

注:图2中M代表标准对照;Vg代表亲本长翅果蝇:vg代表亲本残翅果蝇:R15和R24代表不同PCR引物
(1)PCR扩增时,反应体系中除引物、模板、缓冲液外,还需要添加_____(写出2种)。
(2)已知用亲本长翅果蝇的DNA作为模板,以R15作为引物进行PCR,产物经电泳后出现条带,将其表型记为长翅有带,亲本残翅果蝇的表型则记为残翅无带,从图2可知,将亲本长翅果蝇和残翅果蝇杂交,F1表型为长翅_____(有带/无带),F1相互交配获得F2个体,分别以F2果蝇的DNA为模板,进行引物R15的PCR扩增,统计F2的表型和电泳条带类型,结果如下表所示。分析表中数据可知,控制翅型的基因与引物R15之间的DNA片段,在减数分裂过程中____(有/没有)发生重组。

F2表型

长翅有带

长翅无带

残翅有带

残翅无带

个体数

116

12

17

42

(3)现欲分析F1果蝇在减数分裂时,引物R15之间的DNA片段与引物R24之间的DNA片段是否发生重组,请将以下实验思路补充完整: ___,同一个体的PCR反应产物点在同一点样孔进行电泳,统计F2果蝇的电泳条带类型。
预期结果:若引物R15之间的DNA片段与引物R24之间的DNA片段发生重组,请在下图中画出F2果蝇PCR扩增产物电泳后可能出现的结果___ (将对应位置的条带涂黑)。
2023-08-26更新 | 350次组卷
共计 平均难度:一般