【推荐2】玉米蚜会吸食玉米汁液，它和田间杂草会严重影响玉米的产量和品质。已知苏云金芽孢杆菌的crylAb基因编码的杀虫蛋白能抑制玉米蚜等玉米害虫，而土壤根瘤农杆菌的cp4epsps基因编码的蛋白质对除草剂草甘膦不敏感。科研人员欲将上述两种基因构建在同一载体上，并利用农杆菌转化到玉米中，获得具有抗虫和耐除草剂性状的转基因玉米株系BFL4-1。请回答下列问题：
(1)玉米蚜、杂草与玉米的种间关系分别为____________。
(2)培育BFL4-1需先对目的基因进行扩增，扩增前需要制备______种引物，引物的作用是__________________。
(3)如图为构建基因表达载体时所用的Ti质粒，可能用到的限制酶的识别序列及其切割位点见表。根据基因表达载体的结构组成分析，Ti质粒中的CaMV35S是__________________。构建基因表达载体时最好选用限制酶__________________切割质粒，切割后需要用____________（填“E．coli DNA连接酶”或“T₄ DNA连接酶”）进行连接才能获得重组质粒。为了筛选出含重组质粒的受体细胞，应在添加________的选择培养基上培养。
   

限制酶	BamHⅠ	BclⅠ	SmaⅠ	Sau3AⅠ
识别位点及切割位点	5′—G↓GATCC—3′ 3′—CCTAG↑G—5′	5′—T↓GATCA—3′ 3′—ACTAG↑T—5′	5′—CCC↓GGG—3′ 3′—GGG↑CCC—5′	5′—↓GATC—3′ 3′—CTAG↑—5′

【推荐3】研究人员利用小鼠的单倍体ES细胞(只有一个染色体组)，成功培育出转基因小鼠。其主要技术流程如图所示，请分析回答下列问题：

注：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ代表四种限制酶。箭头指向的位置为限制酶的切割位点：Ampr是氨苄青霉素抗性基因，Neor是G418抗性基因。
（1）利用PCR技术可以扩增目的基因，PCR反应体系中除含缓冲液、模板DNA、dNTP(包含dATP、dCTP、dGTP、dTTP)、引物外，还应含有_____________酶；引物应选用下图中的_______(填图中字母)。

（2）在基因工程操作步骤中，过程①②称为__________________。已知氨苄青霉素不能有效杀死小鼠细胞，而一定浓度的G418能有效杀死不具有Neor的小鼠细胞。结合上图推测，过程①选用的2种限制酶是________(填图中的编号)，③处的培养液应添加________(填“氨苄青霉素”或“G418”)。
（3）细胞乙与__________类似，图中桑椹胚需通过__________技术移入代孕小鼠子宫内继续发育，进行该操作前需对受体小鼠进行__________处理。

【推荐1】蒂蛀虫是荔枝的重要虫害，荔枝嫩叶受蛀时，中脉变褐色，干枯破裂；花穗受害， 顶端枯死；果实被蛀，造成落果或品质下降。科研人员利用转基因抗虫荔枝的研究过程中，采用了图示质粒，其上有SalI，HindⅢ和BamHI三种限制酶切割位点。
   
(1)在构建重组质粒时，选用____两种限制酶切割目的基因的两端及质粒，可防止_____。
(2)用分别含有氨苄青霉素和四环素的培养基筛选农杆菌时，发现含有目的基因的农杆菌不能在含四环素的培养基上生长，这说明______。
(3)采用农杆菌感染荔枝细胞的优点是：______。
(4)利用植物组织培养技术培育转基因抗虫荔枝植株，依据的原理是______。
(5)导入抗虫基因的荔枝是否可以表达其遗传特性，可利用________技术检测抗虫基因是否转录出mRNA，是否翻译出与抗虫有关的蛋白质则采用_____技术，除上述分子水平检测外，还需进行个体水平上的抗虫性状鉴定，可用的方法是_____。

【推荐2】科学家首次运用基因工程的手段，导入优质纤维高产基因 KCS，可提高我国棉花 的产量和品质。经过十多年艰苦实验、不断培育，将我国棉花纤维的长度提高了 0．3 厘米， 如今新疆棉花品质位居世界前列。如图 1 表示含有目的基因 KCS 的 DNA 片段长度(bp 即碱基对)和部分碱基序列，图 2 表 示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有 MspI、BamHI、MboI、SmaI 4 种限制性内切核酸 酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为 C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。据图 回答下列问题：

Ⅰ（1）培育转基因棉花需要用到的工具有_____________________。
（2）若用限制酶 SmaI 完全切割图中含有目的基因 D 的 DNA 片段，其产物长度分别为___________。
（3）基因工程中使用的目的基因主要是指____________________ 。重组质粒中除目 的基因外，还必须有_____________________。
（4）若将图 2 中质粒和目的基因 D 通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应 选用的限制酶是_______ 。经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因 D 不能正 确表达，其最有可能的原因是____________________ 。
（5）导入目的基因的植物细胞，经过植物组织培养技术得到幼苗，该技术利用的原理是______。
Ⅱ 为了提高转基因的成功率，需要通过 PCR 技术扩增目的基因，以获得目的基因的大量拷贝。
（6）在目的基因进行扩增时，加入的引物有 A、B 两种，引物的作用是_____， 若该目的基因扩增 n 代，则其中含有 A、B 引物的 DNA 分子有____个。
（7）PCR 过程中退火(复性)温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。如表为根据模板 设计的两对引物序列,如图为引物对与模板结合示意图。请判断哪一对引物可采用较高的退 火温度:_______________。理由是___________________________________ 。
引物对序列表

引物对 A	P1 AACTGAAATGTAGCTATC P2 TTAAGTCCATTACTCTAC
引物对 B	S1 GTCCGACTAGTGGCTGTG S2 AGCTGGCGTTTAGCCTCG

【推荐3】下表列出了4种限制酶的识别序列及切割位点，其中↓表示切割位点；图1表示含目的基因的DNA结构与限制酶酶切图谱，其中β链为转录模板链；图2表示某质粒的结构与限制酶酶切图谱。现利用表中所列限制酶、图示目的基因和质粒构建基因表达载体，进而培育转基因植物。回答下列问题：

限制酶	BamHⅠ	Sau3AⅠ	BclⅠ	EcoRⅠ
识别序列	-G↓GATCD-	-↓GATC-	-T↓GATCA-	-G↓AATTC-

(1)运用PCR技术扩增图1所示目的基因时，需要选用的引物是引物B和______。
(2)为利于目的基因的定向插入和减少随意连接，处理含目的基因的DNA片段时应选用______两种限制酶，图2中卡那霉素抗性基因的作用是____________。
(3)Ti质粒上的T-DNA具有可转移并整合到受体细胞______上的特性。培育转基因植物时，受体细胞可以是受精卵或分化的体细胞，而培育转基因动物只能将基因表达载体导入受精卵，原因是____________。
(4)转基因植物细胞经过______过程可培育成试管苗，运用的是______技术。

【推荐1】随着科学技术的发展，人们可以根据需求来改造生物的性状。如图是利用奶牛乳汁生产人类某种免疫球蛋白（抗体）的图解，据图回答问题：

（1）在基因工程中，若要实现①进入②应先构建___________；最常用的化学方法是___________。
（2）下图A〜D中表示③到④过程中正确的操作方法的是___________，移入⑤的④应发育___________阶段。

（3）若所得到⑥的乳汁中没有检测到免疫球蛋白，应先采用___________技术检测⑥的乳腺细胞中是否含有免疫球蛋白基因；若已确认此步成功，则应该继续检测是否___________。
（4）生态工程需遵循其基本原理，系统整体性原理强调各组分之间要有___________，只有这样地才能顺利完成能量、物质、信息等的转换和流通，并且实现___________。

【推荐2】20世纪90年代，我国科学家利用基因工程技术，将含有Bt抗虫基因的植物表达载体导入棉花，创造了具有我国自主知识产权的转基因抗虫棉。后来，我国科学家又研发出可同时表达Bt叶抗虫基因和豇豆胰蛋白酶抑制剂基因的双价转基因抗虫棉，使我国在抗虫棉的研究及应用领域达到了国际先进水平。请回答下列问题：
(1)Bt转基因抗虫棉的研发不需要用到的实验原材料是（       ）。

A．苏云金芽孢杆菌

B．质粒载体

C．大肠杆菌

D．棉花叶片

(2)简述研发转基因抗虫棉的技术原理______。
(3)用简图的形式描述双价转基因抗虫棉的培育过程______。

【推荐3】回答与植物转基因和植物克隆有关的问题：
(1)在用农杆菌侵染的方法进行植物转基因过程中，通常要使用抗生素，其目的一是抑制 _____生长，二是筛选转化细胞。当选择培养基中抗生素浓度 _____时，通常会出现较多假阳性植株，因此在转基因前需要对受体进行抗生素的 _____检测。
(2)为提高培育转基因植株的成功率，植物转基因受体需具有较强的 _____能力和遗传稳定性。对培养的受体细胞遗传稳定性的早期检测，可通过观察细胞内 _____形态是否改变进行判断，也可通过观察分裂期染色体的 _____，分析染色体组型是否改变进行判断。
(3)植物转基因受体全能性表达程度的高低主要与受体的基因型、培养环境、继代次数和 _____长短等有关。同时也与受体的取材有关，其中受体为 _____时全能性表达能力最高。