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题型:非选择题-解答题 难度:0.4 引用次数:673 题号:18035615
Bt抗虫蛋白具有抵抗虫害的作用。为获取大量B抗虫蛋白,研究者从基因数据库中获取了该蛋白的基因编码序列(简称Bt-Cry1基因),如图1所示;通过基因工程技术利用大肠杆菌表达该蛋白,所用载体如图2所示,箭头表示不同限制酶的酶切位点。

回答下列问题:
(1)为获取B-Cry1基因,提取苏云金杆菌的总RNA,再经_____________过程得到cDNA,将其作为PCR反应的模板,并设计_____________种特异性引物来扩增目的基因。
(2)根据图中信息,可选用____________两种限制酶切割含目的基因的DNA片段和载体,使目的基因与载体高效重组,若选用PstI进行切割,会造成_____________。限制酶来源于原核生物,不会切割本身的DNA分子是因为____________
(3)基因表达载体中必须含有启动子和终止子,其中启动子的作用是_____________
(4)导入目的基因时,首先用____________处理大肠杆菌使其成为能吸收周围环境中DNA分子的生理状态的细胞,再将重组载体溶于缓冲液中与受体细胞混合;在一定的温度下可以促进大肠杆菌完成____________过程。
(5)检测和鉴定目的基因是否在大肠杆菌中稳定维持和表达的方法有____________

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【推荐1】昆虫杆状病毒表达载体系统(BEVS)是以杆状病毒(遗传物质为双链环状DNA)作为外源基因载体,以昆虫细胞作为宿主。下图是利用BEVS生产人生长激素(hGH)的过程。该过程首先在大肠杆菌内利用质粒P将目的基因与杆状病毒基因B进行重组,形成重组杆状病毒基因B,再转染昆虫细胞,请据图回答下列问题。

   

(注:杆状病毒基因B中kanr为卡那霉素抗性基因;LacZ基因编码的β-半乳糖苷酶能将无色化合物X-gal形成蓝色物质,使菌落呈蓝色,若LacZ基因不能正常表达的菌落呈白色。)
(1)图中的人生长激素mRNA是从人体的________细胞中获取。图中①过程的进行需要引物(一般为色氨酸的tRNA),这是由于逆转录酶不能将单个的________聚合成DNA链。逆转录酶在引物tRNA________末端以________方向合成DNA.
(2)步骤②为重组质粒P的构建,分别用BglⅡ、EcoRⅠ切hGH基因,用BamHⅠ、EcoRⅠ酶切质粒P,再用DNA连接酶连接,若图1是BglⅡ的识别序列,则最可能是BamHⅠ的识别序列是_______。

   

A.   B.   C.   
(3)步骤③需筛选含重组杆状病毒基因B的大肠杆菌,筛选用培养基必须加入_________________,要获得图示培养结果后,应挑选______菌落进行重组基因的扩增与提取。
(4)昆虫杆状病毒可以作为表达载体,是利用其具有______的特性而将目的基因导入受体细胞。
(5)人生长激素基因在昆虫细胞培养中成功表达后,科研人员继续研究将重组杆状病毒基因转染昆虫幼体,希望在昆虫幼体中生产人生长激素,因为相对昆虫幼体培养,动物细胞培养的要求更高,结合相关知识,下列属于昆虫动物细胞培养要求的是_______。
A.无菌条件下培养
B.95%的O2和5%的CO2
C.调节适宜渗透压
D.控制温度在最适
E.配制固体培养基
F.配制液体培养基
2023-05-17更新 | 195次组卷
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【推荐2】人参是一种名贵中药材,具有良好的滋补作用。干扰素可用于治疗慢性乙肝、丙肝及部分肿瘤。下图为三种限制酶识别序列与酶切位点及制备能合成干扰素的人参愈伤组织细胞的示意图。请回答:

(1)图中①的DNA用HindⅢ、BamHI完全酶切后,反应管中有______种DNA片段。利用PCR技术扩增干扰素基因时,扩增第n次时,需要______个引物。
(2)假设图中质粒上BamHI识别位点的碱基序列变为了另一种限制酶BclI识别位点的碱基序列,现用限制酶BclI和HindⅢ切割质粒,那么该图中①的DNA右侧选择______进行切割,理由是______。形成的重组质粒能被______切开。
(3)在构建重组质粒的过程中,用HindⅢ、BamHI切割质粒和目的基因比只用BamHI切割好,这样可以防止______。②过程需要用到的酶是______
(4)④过程检测人参愈伤组织细胞是否产生干扰素,所用的方法是______
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【推荐3】结核病是由结核杆菌引起的人畜共患病。结核杆菌通常以气溶胶形式传播,气溶胶颗粒被肺泡吞噬细胞吞噬,吞噬细胞破裂导致结核杆菌在机体内进一步传播。羊痒病是由正常细胞的非致病性朊蛋白异构化为痒病朊蛋白所致。为研制既能抗结核病又能抗羊痒病的双抗羊,科学家进行了如下操作。

(1)小鼠SP110基因是目前发现的具有抗结核杆菌感染功能的基因。为了验证SP110基因的功能,同时也为了验证山羊吞噬细胞特异性启动子MSR可以启动SP110基因在吞噬细胞内的表达,设计以下三组实验。实验组将MRS启动子与小鼠SP110基因形成融合基因,用___________将融合基因与质粒构建成重组质粒,导入山羊肺泡吞噬细胞(组2)。以___________(组3)和转入空质粒的山羊吞噬细胞为对照组(组1)。分别接种等量的结核杆菌,72h后加入_____________使吞噬细胞破裂,取裂解液进行涂布培养,结果如图1。由图可知小鼠SP110基因可用于双抗羊的研制,依据是________________
(2)非致病性朊蛋白是由山羊13号染色体上的PRNP基因的第三外显子控制合成的,PRNP基因的结构如图2。以L4和R1为识别位点设计TALEN敲除载体,对山羊成纤维细胞L4与R1之间的序列实施定点敲除。然后,将TALEN敲除载体与供体DNA载体共转化幼羊成纤维细胞,可将SP110基因定点敲入PRNP基因的第三外显子中,原理如图3。请指出图4中的数字分别代表的结构。1_______2______3_______4______________________检测,山羊成纤维细胞中非致病性朊蛋白基因和SP110基因的表达情况是___________________
(3)欲用上述细胞获得双抗羊,需要用到的技术有_____________(至少写出三项)。
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