Bt抗虫蛋白具有抵抗虫害的作用。为获取大量B抗虫蛋白,研究者从基因数据库中获取了该蛋白的基因编码序列(简称Bt-Cry1基因),如图1所示;通过基因工程技术利用大肠杆菌表达该蛋白,所用载体如图2所示,箭头表示不同限制酶的酶切位点。
回答下列问题:
(1)为获取B-Cry1基因,提取苏云金杆菌的总RNA,再经_____________ 过程得到cDNA,将其作为PCR反应的模板,并设计_____________ 种特异性引物来扩增目的基因。
(2)根据图中信息,可选用____________ 两种限制酶切割含目的基因的DNA片段和载体,使目的基因与载体高效重组,若选用PstI进行切割,会造成_____________ 。限制酶来源于原核生物,不会切割本身的DNA分子是因为____________ 。
(3)基因表达载体中必须含有启动子和终止子,其中启动子的作用是_____________ 。
(4)导入目的基因时,首先用____________ 处理大肠杆菌使其成为能吸收周围环境中DNA分子的生理状态的细胞,再将重组载体溶于缓冲液中与受体细胞混合;在一定的温度下可以促进大肠杆菌完成____________ 过程。
(5)检测和鉴定目的基因是否在大肠杆菌中稳定维持和表达的方法有____________ 。
回答下列问题:
(1)为获取B-Cry1基因,提取苏云金杆菌的总RNA,再经
(2)根据图中信息,可选用
(3)基因表达载体中必须含有启动子和终止子,其中启动子的作用是
(4)导入目的基因时,首先用
(5)检测和鉴定目的基因是否在大肠杆菌中稳定维持和表达的方法有
更新时间:2023-02-15 15:50:22
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【推荐1】昆虫杆状病毒表达载体系统(BEVS)是以杆状病毒(遗传物质为双链环状DNA)作为外源基因载体,以昆虫细胞作为宿主。下图是利用BEVS生产人生长激素(hGH)的过程。该过程首先在大肠杆菌内利用质粒P将目的基因与杆状病毒基因B进行重组,形成重组杆状病毒基因B,再转染昆虫细胞,请据图回答下列问题。
(1)图中的人生长激素mRNA是从人体的________ 细胞中获取。图中①过程的进行需要引物(一般为色氨酸的tRNA),这是由于逆转录酶不能将单个的________ 聚合成DNA链。逆转录酶在引物tRNA________ 末端以________ 方向合成DNA.
(2)步骤②为重组质粒P的构建,分别用BglⅡ、EcoRⅠ切hGH基因,用BamHⅠ、EcoRⅠ酶切质粒P,再用DNA连接酶连接,若图1是BglⅡ的识别序列,则最可能是BamHⅠ的识别序列是_______。
(3)步骤③需筛选含重组杆状病毒基因B的大肠杆菌,筛选用培养基必须加入______ 、_____ 、______ ,要获得图示培养结果后,应挑选______ 菌落进行重组基因的扩增与提取。
(4)昆虫杆状病毒可以作为表达载体,是利用其具有______ 的特性而将目的基因导入受体细胞。
(5)人生长激素基因在昆虫细胞培养中成功表达后,科研人员继续研究将重组杆状病毒基因转染昆虫幼体,希望在昆虫幼体中生产人生长激素,因为相对昆虫幼体培养,动物细胞培养的要求更高,结合相关知识,下列属于昆虫动物细胞培养要求的是_______。
(注:杆状病毒基因B中kanr为卡那霉素抗性基因;LacZ基因编码的β-半乳糖苷酶能将无色化合物X-gal形成蓝色物质,使菌落呈蓝色,若LacZ基因不能正常表达的菌落呈白色。)
(1)图中的人生长激素mRNA是从人体的
(2)步骤②为重组质粒P的构建,分别用BglⅡ、EcoRⅠ切hGH基因,用BamHⅠ、EcoRⅠ酶切质粒P,再用DNA连接酶连接,若图1是BglⅡ的识别序列,则最可能是BamHⅠ的识别序列是_______。
A. | B. | C. |
(4)昆虫杆状病毒可以作为表达载体,是利用其具有
(5)人生长激素基因在昆虫细胞培养中成功表达后,科研人员继续研究将重组杆状病毒基因转染昆虫幼体,希望在昆虫幼体中生产人生长激素,因为相对昆虫幼体培养,动物细胞培养的要求更高,结合相关知识,下列属于昆虫动物细胞培养要求的是_______。
A.无菌条件下培养 |
B.95%的O2和5%的CO2 |
C.调节适宜渗透压 |
D.控制温度在最适 |
E.配制固体培养基 |
F.配制液体培养基 |
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【推荐2】人参是一种名贵中药材,具有良好的滋补作用。干扰素可用于治疗慢性乙肝、丙肝及部分肿瘤。下图为三种限制酶识别序列与酶切位点及制备能合成干扰素的人参愈伤组织细胞的示意图。请回答:(1)图中①的DNA用HindⅢ、BamHI完全酶切后,反应管中有______ 种DNA片段。利用PCR技术扩增干扰素基因时,扩增第n次时,需要______ 个引物。
(2)假设图中质粒上BamHI识别位点的碱基序列变为了另一种限制酶BclI识别位点的碱基序列,现用限制酶BclI和HindⅢ切割质粒,那么该图中①的DNA右侧选择______ 进行切割,理由是______ 。形成的重组质粒能被______ 切开。
(3)在构建重组质粒的过程中,用HindⅢ、BamHI切割质粒和目的基因比只用BamHI切割好,这样可以防止______ 。②过程需要用到的酶是______ 。
(4)④过程检测人参愈伤组织细胞是否产生干扰素,所用的方法是______ 。
(2)假设图中质粒上BamHI识别位点的碱基序列变为了另一种限制酶BclI识别位点的碱基序列,现用限制酶BclI和HindⅢ切割质粒,那么该图中①的DNA右侧选择
(3)在构建重组质粒的过程中,用HindⅢ、BamHI切割质粒和目的基因比只用BamHI切割好,这样可以防止
(4)④过程检测人参愈伤组织细胞是否产生干扰素,所用的方法是
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【推荐3】结核病是由结核杆菌引起的人畜共患病。结核杆菌通常以气溶胶形式传播,气溶胶颗粒被肺泡吞噬细胞吞噬,吞噬细胞破裂导致结核杆菌在机体内进一步传播。羊痒病是由正常细胞的非致病性朊蛋白异构化为痒病朊蛋白所致。为研制既能抗结核病又能抗羊痒病的双抗羊,科学家进行了如下操作。
(1)小鼠SP110基因是目前发现的具有抗结核杆菌感染功能的基因。为了验证SP110基因的功能,同时也为了验证山羊吞噬细胞特异性启动子MSR可以启动SP110基因在吞噬细胞内的表达,设计以下三组实验。实验组将MRS启动子与小鼠SP110基因形成融合基因,用___________ 将融合基因与质粒构建成重组质粒,导入山羊肺泡吞噬细胞(组2)。以___________ (组3)和转入空质粒的山羊吞噬细胞为对照组(组1)。分别接种等量的结核杆菌,72h后加入_____________ 使吞噬细胞破裂,取裂解液进行涂布培养,结果如图1。由图可知小鼠SP110基因可用于双抗羊的研制,依据是________________ 。
(2)非致病性朊蛋白是由山羊13号染色体上的PRNP基因的第三外显子控制合成的,PRNP基因的结构如图2。以L4和R1为识别位点设计TALEN敲除载体,对山羊成纤维细胞L4与R1之间的序列实施定点敲除。然后,将TALEN敲除载体与供体DNA载体共转化幼羊成纤维细胞,可将SP110基因定点敲入PRNP基因的第三外显子中,原理如图3。请指出图4中的数字分别代表的结构。1_______ 2______ 3_______ 4________ 经______________ 检测,山羊成纤维细胞中非致病性朊蛋白基因和SP110基因的表达情况是___________________ 。
(3)欲用上述细胞获得双抗羊,需要用到的技术有_____________ (至少写出三项)。
(1)小鼠SP110基因是目前发现的具有抗结核杆菌感染功能的基因。为了验证SP110基因的功能,同时也为了验证山羊吞噬细胞特异性启动子MSR可以启动SP110基因在吞噬细胞内的表达,设计以下三组实验。实验组将MRS启动子与小鼠SP110基因形成融合基因,用
(2)非致病性朊蛋白是由山羊13号染色体上的PRNP基因的第三外显子控制合成的,PRNP基因的结构如图2。以L4和R1为识别位点设计TALEN敲除载体,对山羊成纤维细胞L4与R1之间的序列实施定点敲除。然后,将TALEN敲除载体与供体DNA载体共转化幼羊成纤维细胞,可将SP110基因定点敲入PRNP基因的第三外显子中,原理如图3。请指出图4中的数字分别代表的结构。1
(3)欲用上述细胞获得双抗羊,需要用到的技术有
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【推荐1】人类酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)在转基因植物中的表达量普遍较低,某科研小组通过添加增强子(增强它所调节基因的转录频率)、polyA序列(提高mRNA的稳定性)等表达控制元件提高了aFGF基因在紫花苜蓿细胞中的表达量。下图表示操作的基本过程,质粒外面标注了限制酶酶切位点,质粒里面标注了相关的结构和基因(其中Kanr代表卡那霉素抗性基因)。请回答问题。
(1)①②过程构建重组质粒都需要使用限制酶和___________ ,限制酶酶XhoⅠ的识别序列是-C↓TCGAG-,aFGF基因被限制酶XhoⅠ切割后形成的黏性末端是____________ 。
(2)图中质粒均未标出_________ (填结构名称);X、Y、Z三个酶切位点中,_________ 的酶切位点与其他两点不同。
(3)③过程用________ 预先处理农杆菌,可提高质粒4的导入率;进行④过程前,需提取农杆菌DNA,通过PCR进行基因扩增,鉴定其是否含目的基因,其设计引物的依据是__________________ 。
(4)转化后的紫花苜蓿外植体需经过_________ 过程才能长成完整植株,若长大后的转基因紫花苜蓿的aFGF表达量明显提高,请分析原因: _______________________ 。
(1)①②过程构建重组质粒都需要使用限制酶和
(2)图中质粒均未标出
(3)③过程用
(4)转化后的紫花苜蓿外植体需经过
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【推荐2】地中海贫血是我国南方常见的一种贫血病,分为α和β两种类型,分别涉及血红蛋白的α链和β链基因的异常表达,
(1)一种α地中海贫血病涉及α血红蛋白基因的A片段缺失,可以通过PCR技术对患者进行诊断。下图一是正常的α血红蛋白基因的片段,引物a、引物b和引物c分别与基因的不同区段特异性结合。引物a和引物b之间由于片段过长而无法得到扩增产物。将待检测人1、2、3的DNA和________ 以及扩增缓冲液一起加入反应体系中进行PCR,将PCR产物进行凝胶电泳,结果如图二所示。
三个待检测人中α地中海贫血病纯合子和杂合子分别是_________________ 。
(2)地中海贫血病可以采取基因治疗的方法进行治疗,使用___________ ,将正常的血红蛋白基因与质粒一起构建成______________ ,然后将其整合进病毒基因组中;从病人体内提取出造血干细胞与病毒一起培养,培养一段时间检测细胞内正常血红蛋白的表达情况,然后再将_____________ 输回患者体内。
(1)一种α地中海贫血病涉及α血红蛋白基因的A片段缺失,可以通过PCR技术对患者进行诊断。下图一是正常的α血红蛋白基因的片段,引物a、引物b和引物c分别与基因的不同区段特异性结合。引物a和引物b之间由于片段过长而无法得到扩增产物。将待检测人1、2、3的DNA和
三个待检测人中α地中海贫血病纯合子和杂合子分别是
(2)地中海贫血病可以采取基因治疗的方法进行治疗,使用
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解题方法
【推荐3】尖孢镰刀菌容易引起番茄枯萎症,对农业造成巨大损失。为研究F基因(目的基因)的功能,科学家利用同源重组交换的原理对F基因敲除,分析其生物学功能及致病力。基因敲除过程是先构建基因敲除载体,将基因敲除载体导入受体细胞,经过筛选找出基因敲除成功的受体细胞。基因敲除原理如下图所示:注:Hygr为潮霉素抗性基因;A、B为实现同源重组交换的序列,C、D、E、G为其他不同的基因片段;1~6为引物。
(1)选取限制酶____ 、____ 分别对F基因左右两端A、B片段进行酶切,并用____ 酶将A、B片段与潮霉素抗性基因连接,构建目的基因敲除载体。同时需要在潮霉素抗性基因前添加启动子,启动子的作用是____ 。
(2)把构建好的目的基因敲除载体导入尖孢镰刀菌细胞内,导入成功后,将菌液放在含____ 的固体培养基上培养,使用的接种方法是____ 。在这一过程中,F基因与潮霉素抗性基因发生同源重组交换,与____ (填减数分裂时期)的某些行为类似。
(3)培养完毕,挑取单菌落提取其基因组DNA作为模板,选择引物____ 进行PCR扩增,其中引物会结合在DNA片段的____ (3'或5')端,扩增30个循环进行电泳,如果没有F基因条带,则确定目的基因敲除成功。
(4)潮霉素抗性基因能够在尖孢镰刀菌中表达的原因是____ 。
(1)选取限制酶
(2)把构建好的目的基因敲除载体导入尖孢镰刀菌细胞内,导入成功后,将菌液放在含
(3)培养完毕,挑取单菌落提取其基因组DNA作为模板,选择引物
(4)潮霉素抗性基因能够在尖孢镰刀菌中表达的原因是
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【推荐1】内皮素(ET)是一种含21个氨基酸的多肽,它有强烈的血管收缩和促进平滑肌细胞增殖等作用。研究发现内皮素功能异常与高血压、糖尿病、癌症等有着密切联系。内皮素主要通过与靶细胞膜上的内皮素受体结合而发挥生物学效应。ETA是内皮素的主要受体,科研人员试图通过构建基因表达载体,实现ETA基因在细胞中高效表达,为后期ETA的体外研究以及拮抗剂的筛选、活性评价等奠定基础。其过程如下(图中SNAP基因是一种荧光蛋白基因,限制酶ApaⅠ的识别序列为CCC↓GGG,限制酶XhoⅠ的识别序列为C↓TCGAG)。请分析回答:
(1)完成过程①需要的酶是________ ,过程③中,限制酶XhoⅠ切割DNA,使_____________ 键断开,形成的黏性末端是________________ 。用两种限制酶切割,获得不同的黏性末端,其主要目的是_____________________________________________________ 。
(2)过程⑥中,要用_____________ 预先处理大肠杆菌,使其处于容易吸收外界DNA的感受态。
(3)利用SNAP基因与ETA基因结合构成融合基因,目的是________________________ 。
(4)人皮肤黑色素细胞上有内皮素的特异受体,内皮素与黑色素细胞膜上的受体结合后,会刺激黑色素细胞的分化、增殖并激活酪氨酸酶的活性,从而使黑色素急剧增加。美容时可以利用注射ETA达到美白祛斑效果,试解释:______________________________ 。
(1)完成过程①需要的酶是
(2)过程⑥中,要用
(3)利用SNAP基因与ETA基因结合构成融合基因,目的是
(4)人皮肤黑色素细胞上有内皮素的特异受体,内皮素与黑色素细胞膜上的受体结合后,会刺激黑色素细胞的分化、增殖并激活酪氨酸酶的活性,从而使黑色素急剧增加。美容时可以利用注射ETA达到美白祛斑效果,试解释:
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【推荐2】研究人员将抗盐基因转入普通烟草培育出抗盐烟草,该过程所用的质粒与含抗盐基因的DNA上相关限制酶的酶切位点分别如下图1、图2所示。下图3表示该过程中利用含目的基因的农杆菌进行转化的示意图。请回答下列问题:
(1)图1质粒中没有标注出来的基本结构是___ 。
(2)用图中质粒和目的基因构建基因表达载体时,应选用限制酶___ 同时切割质粒和含目的基因的DNA片段。
(3)将上述切开的质粒与目的基因混合,加入DNA连接酶连接后,导入受体细胞,受体细胞的类型可能包含___ (不考虑基因突变)。
①抗X、抗Y②抗X、不抗Y③不抗X、抗Y④不抗X、不抗Y
(4)农杆菌能在自然条件下感染双子叶植物和裸子植物,其原因是当植物体受损伤时,伤口处的细胞会___ ;烟草细胞与农杆菌共培养的目的是利用农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可以___ 的特性。
(5)在目的基因的检测与鉴定中,检测目的基因是否发挥功能作用的第一步是___ 。
限制酶种类 | BamHI | BclI | Sau3AI | HindⅢ |
识别序列及切割位点 | G↓GATCC | T↓GATCA | LGATC | A↓AGCTT |
(1)图1质粒中没有标注出来的基本结构是
(2)用图中质粒和目的基因构建基因表达载体时,应选用限制酶
(3)将上述切开的质粒与目的基因混合,加入DNA连接酶连接后,导入受体细胞,受体细胞的类型可能包含
①抗X、抗Y②抗X、不抗Y③不抗X、抗Y④不抗X、不抗Y
(4)农杆菌能在自然条件下感染双子叶植物和裸子植物,其原因是当植物体受损伤时,伤口处的细胞会
(5)在目的基因的检测与鉴定中,检测目的基因是否发挥功能作用的第一步是
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【推荐3】基因驱动是指特定基因有偏向性地遗传给下一代的自然现象。研究发现,叶用莴苣(俗称生菜)细胞中的FANCM蛋白能够阻止减数分裂过程中交叉互换的发生,科学家借助CRISPR/Cas9基因编辑技术(原理如图1所示),研发出人工FANCM基因驱动系统,从而在叶用莴苣中实现了外部引入的基因多代遗传。图2表示利用基因驱动技术获得FANCM突变基因的过程,利用同源定向修复功能,可以使另一条同源染色体上也插入基因驱动元件,从而获得FANCM基因纯合突变体。(1)图1中组成gRNA的单体是,gRNA的作用是_____________ ,为确定图2中基因驱动元件是否完整插入FANCM基因,最好选择的两组引物是_____________ (从图2中P1-P4四种引物中选择)进行PCR。
(2)图2中科研人员首先构建了基因驱动元件,将其导入叶用莴苣细胞中,需要将其DNA序列插入到Ti质粒的T-DNA内部,原因是_____________ ,为提高导入成功率,常利用_____________ 处理农杆菌。
(3)用FANCM基因纯合突变体作为母本与野生型父本杂交,F1中有多达7%的植株为纯合突变体。请解释纯合突变体产生的原因是_____________ 。
(4)利用基因驱动技术获得FANCM基因突变纯合体,在叶用莴苣遗传育种中的应用价值是_____________ 。
(5)遗传学家研究发现,基因驱动技术几乎可以百分之百地使突变基因在该种群群体之间传播,某些生物学家曾提出把这种技术应用于消灭一些入侵物种,从而保护那些濒危物种,一些遗传学家立即呼吁增强这种技术的管制。请从生物技术安全性的角度简要谈谈你对该技术的看法。____________________ 。
(2)图2中科研人员首先构建了基因驱动元件,将其导入叶用莴苣细胞中,需要将其DNA序列插入到Ti质粒的T-DNA内部,原因是
(3)用FANCM基因纯合突变体作为母本与野生型父本杂交,F1中有多达7%的植株为纯合突变体。请解释纯合突变体产生的原因是
(4)利用基因驱动技术获得FANCM基因突变纯合体,在叶用莴苣遗传育种中的应用价值是
(5)遗传学家研究发现,基因驱动技术几乎可以百分之百地使突变基因在该种群群体之间传播,某些生物学家曾提出把这种技术应用于消灭一些入侵物种,从而保护那些濒危物种,一些遗传学家立即呼吁增强这种技术的管制。请从生物技术安全性的角度简要谈谈你对该技术的看法。
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【推荐1】氮是植物生长发育不可缺少的元素之一,提高植物对氮元素的利用效率有利于农业的可持续发展和环境保护。
(1)植物从土壤中吸收硝酸盐可用于在细胞中生成___________ 等含氮的生物大分子。不同浓度的硝酸盐能够诱导相关基因表达,从而调控自身代谢和生长,可知硝酸盐也是调节植物生命活动的___________ 。
(2)CHL1是植物细胞膜上的硝酸盐转运蛋白,NLP是硝酸盐受体,NLP发生磷酸化后会与硝酸盐响应基因的启动子结合激活转录。研究人员将上述两种蛋白功能缺失突变体chl1和nlp与野生型(WT)拟南芥种子分别栽种在含硝酸盐的培养基中,检测幼苗生长情况,结果如图1。实验结果显示___________ ,推测NLP发挥更主要的作用。
(3)为检验NLP的N端与C端区域的功能,进行了蛋白质截断实验。实验方案及结果如图2所示,利用报告基因分别与6组不同类型的目的基因制备转基因拟南芥,分别置于含KCl或KNO3的培养基中培养。
根据实验结果可以得出的结论是___________ 。
(4)研究者推测硝酸盐结合NLP后会引起空间结构改变,使N端与C端相互结合后发挥功能。为直观了解硝酸盐对NLP的作用,将黄色荧光蛋白基因m分为两部分,分别连接到___________ ,利用改造的基因制备转基因拟南芥,分别置于含KCl或KNO3的培养基中培养,实验在5分钟即可观察到____________ ,证实推测成立。
(5)已有研究显示,当环境中存在硝酸盐时野生型拟南芥细胞内Ca2+浓度会迅速提高,而突变体chl1无此现象,当用钙离子通道阻滞剂处理细胞后,响应硝酸盐的基因表达被显著抑制,去除细胞中的Ca2+,磷酸化的NLP含量下降。综合上述实验结果,在图3中用箭头表示出植物感受硝酸盐后的信号作用途径____________ 。
(1)植物从土壤中吸收硝酸盐可用于在细胞中生成
(2)CHL1是植物细胞膜上的硝酸盐转运蛋白,NLP是硝酸盐受体,NLP发生磷酸化后会与硝酸盐响应基因的启动子结合激活转录。研究人员将上述两种蛋白功能缺失突变体chl1和nlp与野生型(WT)拟南芥种子分别栽种在含硝酸盐的培养基中,检测幼苗生长情况,结果如图1。实验结果显示
(3)为检验NLP的N端与C端区域的功能,进行了蛋白质截断实验。实验方案及结果如图2所示,利用报告基因分别与6组不同类型的目的基因制备转基因拟南芥,分别置于含KCl或KNO3的培养基中培养。
根据实验结果可以得出的结论是
(4)研究者推测硝酸盐结合NLP后会引起空间结构改变,使N端与C端相互结合后发挥功能。为直观了解硝酸盐对NLP的作用,将黄色荧光蛋白基因m分为两部分,分别连接到
(5)已有研究显示,当环境中存在硝酸盐时野生型拟南芥细胞内Ca2+浓度会迅速提高,而突变体chl1无此现象,当用钙离子通道阻滞剂处理细胞后,响应硝酸盐的基因表达被显著抑制,去除细胞中的Ca2+,磷酸化的NLP含量下降。综合上述实验结果,在图3中用箭头表示出植物感受硝酸盐后的信号作用途径
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【推荐2】苯丙酮尿症是由PKU基因突变引起的,基因定点整合可以将正常PKU基因定点整合到PKU基因突变的小鼠胚胎干细胞的染色体DNA上,替换突变基因,用于研究该病的治疗。基因定点整合的过程是:从染色体DNA的突变PKU基因两侧各选择一段DNA序列HB1和HB2,根据其碱基序列分别合成HB1和HB2,再将两者分别与基因K1、K2连接,中间插入正常PKU基因和标记基因neor,构建出如图所示的重组载体。重组载体和染色体DNA中的HB1和HB2序列发生交换,导致两者之间区域发生互换(如下图)。
(1)构建重组载体时,需采用PCR技术对PKU基因进行扩增,PCR扩增的原理是_______ 。扩增时,需要先加热至90~95℃使DNA解链后,后冷却至55~60℃的目的是___________ 。
(2)重组载体中的HB1和HB2之间除了插入正常的PKU基因和neor基因以外,还必须含有_____ 。neor基因的作用是_________ 。
(3)用图中重组载体转化时,会出现一些PKU基因错误整合的胚胎干细胞。错误整合时,载体的两个K基因中至少会有一个与neor基因一起整合到染色体DNA上,已知含有neor基因的细胞具有G418的抗性。Kl、K2的产物都能把DHPG转化成有毒物质而使细胞死亡。根据上述信息,设计简要的实验方案从转化的胚胎干细胞中筛选出正确整合的胚胎干细胞_____ 。
(1)构建重组载体时,需采用PCR技术对PKU基因进行扩增,PCR扩增的原理是
(2)重组载体中的HB1和HB2之间除了插入正常的PKU基因和neor基因以外,还必须含有
(3)用图中重组载体转化时,会出现一些PKU基因错误整合的胚胎干细胞。错误整合时,载体的两个K基因中至少会有一个与neor基因一起整合到染色体DNA上,已知含有neor基因的细胞具有G418的抗性。Kl、K2的产物都能把DHPG转化成有毒物质而使细胞死亡。根据上述信息,设计简要的实验方案从转化的胚胎干细胞中筛选出正确整合的胚胎干细胞
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【推荐3】研究者拟构建高效筛选系统,将改进的苯丙氨酸合成关键酶基因P1导入谷氨酸棒杆菌,以提高苯丙氨酸产量。(1)如图是该高效筛选系统载体的构建过程。载体1中含有KanR(卡那霉素抗性基因)和SacB两个标记基因,为去除筛选效率较低的SacB,应选择引物______ 和______ ,并在引物的_____ (5'/3')端引入Xho I酶识别序列,进行PCR扩增,对模板DNA进行了30个“95℃______ →50℃______ →72℃______ ”的循环处理:产物经______ 、______ 后环化成载体2。
(2)PCR扩增载体3中筛选效率较高的标记基因RpsL(链霉素敏感基因)时,引物应包含______ (EcoR I/Hind III/Xho I)酶识别序列,产物经单酶切后连接到载体2构建载体4。
(3)将改进的P1基因整合到载体4构建载体5.将载体5导入对链霉素_____ (选填“敏感”、“不敏感”)且对卡那霉素______ (选填“敏感”、“不敏感”)的受体菌。为获得成功导入载体5的菌株,应采用含有_____ 的平板进行初步筛选。
(4)用一定的方法筛选出如下菌株:P1基因脱离载体5并整合到受体菌拟核DNA,且载体5上其他DNA片段全部丢失。该菌的表型为_____。
(5)可采用______ 技术鉴定成功整合P1基因的菌株。之后以发酵法检测_______ 产量。
(2)PCR扩增载体3中筛选效率较高的标记基因RpsL(链霉素敏感基因)时,引物应包含
(3)将改进的P1基因整合到载体4构建载体5.将载体5导入对链霉素
(4)用一定的方法筛选出如下菌株:P1基因脱离载体5并整合到受体菌拟核DNA,且载体5上其他DNA片段全部丢失。该菌的表型为_____。
A.卡那霉素不敏感、链霉素敏感 |
B.卡那霉素敏感、链霉素不敏感 |
C.卡那霉素和链霉素都敏感 |
D.卡那霉素和链霉素都不敏感 |
(5)可采用
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