普通棉花中含β-甘露糖苷酶(GhMnaA2)基因,能在纤维细胞中特异性表达,产生的β-甘露糖苷酶催化半纤维素降解,棉纤维长度变短。为了培育新的棉花品种,科研人员构建了反义GhMnaA2基因表达载体,利用农杆菌转化法导入棉花细胞,成功获得转基因棉花品种,具体过程如图所示。回答下列问题:
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/editorImg/2023/3/14/83ba347e-86bd-40a7-9ca2-d4da61a397b9.png?resizew=563)
(1)①和②过程中所用的限制性内切酶分别是_____ 、_____ 。
(2)基因表达载体除了图示组成外,还应有_____ (答出2点即可)。
(3)③过程中用酶切法可鉴定正、反义表达载体。用SmaⅠ酶和NotⅠ酶切正义基因表达载体获得0.05kb、3.25kb、5.95kb、9.45kb四种长度的DNA片段,则用NotI酶切反义基因表达载体获得的DNA片段的长度应是_____ 和_____ 。
(4)④过程中利用农杆菌介导转化棉花细胞的过程中,整合到棉花细胞染色体DNA的区段是_____ ,转化后的细胞再通过_____ 形成植株。
(5)导入细胞内的反义GhMnaA2转录的mRNA能与细胞内的GhMnaA2转录的mRNA互补配对,从而抑制_____ 过程,其意义是_____ 。
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(1)①和②过程中所用的限制性内切酶分别是
(2)基因表达载体除了图示组成外,还应有
(3)③过程中用酶切法可鉴定正、反义表达载体。用SmaⅠ酶和NotⅠ酶切正义基因表达载体获得0.05kb、3.25kb、5.95kb、9.45kb四种长度的DNA片段,则用NotI酶切反义基因表达载体获得的DNA片段的长度应是
(4)④过程中利用农杆菌介导转化棉花细胞的过程中,整合到棉花细胞染色体DNA的区段是
(5)导入细胞内的反义GhMnaA2转录的mRNA能与细胞内的GhMnaA2转录的mRNA互补配对,从而抑制
更新时间:2023-03-14 09:24:37
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【推荐1】科研人员将四种“关键基因”(Oct3/4、Sox2、KIf4、c-Myc)通过特定病毒导入到小鼠的成纤维细胞,诱导其发生转化,得到具有多项分化潜能的ips细胞。回答下列问题:
(1)将“关键基因”导入受体细胞时所选用的病毒与诱导动物细胞融合时所选用的病毒区别是___ 。上述四种“关键基因”影响成纤维细胞中基因的______
(2)诱导成纤维细胞转化的过程类似于植物组织培养的_____ 过程,而在培养胡萝卜组织块时,最好选用____ 部分通过该过程形成_____ 组织。
(3)在成纤维细胞的培养过程中,需要____________ ,以保证无菌无毒的环境,采用_____ (培养容器),将其置于_____ 的混合气体培养箱中进行培养。
(1)将“关键基因”导入受体细胞时所选用的病毒与诱导动物细胞融合时所选用的病毒区别是
(2)诱导成纤维细胞转化的过程类似于植物组织培养的
(3)在成纤维细胞的培养过程中,需要
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【推荐2】I.复椰子树属棕榈复椰子属,树高15~30米,树干通直,直径约30厘米,叶呈大扇形,长7米,宽2米,雌雄异株。复椰子的雌花从授粉到果实成熟需要10~13年之久,种子发芽期也需3年,而且要求烈日照晒。由于复椰子树种子形状奇特,体积庞大(重达20千克,直径30厘米)有些人将它用作容器,如今复椰子树已濒临灭绝。复椰子果肉煮汤饮服,有治疗久咳和止血的功效。有人想到了一个好的方法,制造“人工种子”,解决复椰子树的种子形成时间漫长的问题。其操作流程如下:_____ ,先用_____ 冲洗,再消毒。常用的消毒剂是_____ (写两种)。
(2)人工种皮除了有保护作用以外,还要有_____ 性,以满足胚状体代谢的需要。为了保证胚状体在适宜条件下成功发芽发育成幼苗,而不会腐败变质,人工胚乳除加入适量的养分(如水、无机盐、有机碳源)外,还可以适当添加农药、抗生素、有益菌等。为了促进胚状体的生长发育,还可以向人工种皮中加入一些_____ (植物激素/植物生长调节剂/生长素类似物)。
II.科研人员构建了可表达 WRK10-MYC融合蛋白的重组农杆菌 Ti质粒并成功转化植物细胞得到转基因植株,该质粒的部分结构如图2所示,其中 Kan 为卡那霉素抗性基因,Hyg 为潮霉素抗性基因,MYC标签序列编码标签短肽 MYC,WRK10 蛋白为转录因子。_____ 。图中启动子的方向与对应基因转录的方向一致,从编码链的角度分析 P1 和 P2方向不同的原因是_____ 。
(4)已知利用LP 和 RP扩增结果为大带,BP 和 RP扩增结果为小带。可用图中三引物进行两次PCR 的方法鉴定转基因植物后代中的纯合转基因植株。T-DNA 插入植物染色体DNA分子后会抑制原插入位点两侧引物的扩增产物的出现,则纯合转基因植株 PCR 检测结果为_____ (填“大带”或“大带和小带”或“小带”)。
(2)人工种皮除了有保护作用以外,还要有
II.科研人员构建了可表达 WRK10-MYC融合蛋白的重组农杆菌 Ti质粒并成功转化植物细胞得到转基因植株,该质粒的部分结构如图2所示,其中 Kan 为卡那霉素抗性基因,Hyg 为潮霉素抗性基因,MYC标签序列编码标签短肽 MYC,WRK10 蛋白为转录因子。
(4)已知利用LP 和 RP扩增结果为大带,BP 和 RP扩增结果为小带。可用图中三引物进行两次PCR 的方法鉴定转基因植物后代中的纯合转基因植株。T-DNA 插入植物染色体DNA分子后会抑制原插入位点两侧引物的扩增产物的出现,则纯合转基因植株 PCR 检测结果为
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【推荐3】为了获得抗蚜虫棉花新品种,研究人员将雪花莲凝集素基因(GNA)和尾穗苋凝集素基因(ACA)通过一定方法形成GNA—ACA融合基因,并将该融合基因与载体(pBI121)结合获得重组载体,如图所示,然后导入棉花细胞。图中KpnⅠ、BsaBI、XhoⅠ为不同限制酶。分析并回答下列问题:
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2023/3/16/3195822854496256/3197059375046656/STEM/3bdc0ff9f7a54b0b97bdf8fc5617c32b.png?resizew=398)
(1)据图分析,为获得GNA—ACA融合基因,可使用限制酶_________ 和DNA连接酶处理基因GNA和ACA。
(2)图中把GNA—ACA融合基因重组到质粒的过程是基因工程的核心步骤,即_________ 的构建,其目的是__________ ,构建的该结构除了图中载体(pB1121)所含有的结构外,还应包括_________ (答出3点)等结构。
(3)成功获取含GNA—ACA融合基因的棉花细胞后,可通过植物组织培养技术获取转基因棉花植株,其依据的原理是_________ ,将含有GNA—ACA融合基因的棉花细胞培养成一株完整植株的基本程序是_________ (用流程图表示)。
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(1)据图分析,为获得GNA—ACA融合基因,可使用限制酶
(2)图中把GNA—ACA融合基因重组到质粒的过程是基因工程的核心步骤,即
(3)成功获取含GNA—ACA融合基因的棉花细胞后,可通过植物组织培养技术获取转基因棉花植株,其依据的原理是
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【推荐1】胞嘧啶脱氨基酶(CD)是一种存在于细菌和真菌中的酶,能将5氟胞嘧啶(5—FC)转化为5氟尿嘧啶(5—FU),前者对细胞无影响,后者会抑制DNA和RNA合成使细胞死亡,可用于杀伤肝癌细胞治疗肝癌。研究人员将5—FU与宫颈癌细胞膜抗原(CA125)的特异性抗体(OC125)结合制备抗体偶联药物(过程如下图所示)。某种腺病毒能特异性的侵染肝癌细胞,改造后的腺病毒可作为CD基因的载体侵染肝癌细胞。
(1)制备单克隆OC125的过程中,与骨髓瘤细胞融合前,免疫的脾细胞_____ (填“需要”或“不需要”)进行原代培养扩大细胞数量;相较于植物细胞融合,促进上述两类细胞融合特有的方法是_____ 。
(2)与直接对患者使用细胞毒性药物相比,抗体偶联药物的优点是_____ 。
(3)将CD基因插入改造后的腺病毒的DNA中需要利用到的工具酶有_____ 改造后的腺病毒载体应该具备哪些优点_____ ?(答2点)。
(4)将CD基因转染到患者肝癌细胞后,再给患者使用_____ ,也能特异性地杀伤肝癌细胞。
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(1)制备单克隆OC125的过程中,与骨髓瘤细胞融合前,免疫的脾细胞
(2)与直接对患者使用细胞毒性药物相比,抗体偶联药物的优点是
(3)将CD基因插入改造后的腺病毒的DNA中需要利用到的工具酶有
(4)将CD基因转染到患者肝癌细胞后,再给患者使用
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【推荐2】阿尔茨海默(AD)是一种神经退行性疾病,主要病理特征为β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积导致形成细胞外老年斑和tau蛋白过度磷酸化导致神经原纤维缠结,两种情形均可能引起神经细胞凋亡,使学习、记忆能力减退,科研人员为了进一步探究发病机理和治疗方案,进行了如下研究。
(1)研究发现,患者脑部的神经元数量及神经元之间的_________ (结构)明显减少。进一步研究证实这是由于神经元________ (填“胞体”、“树突”或“轴突”)内的核糖体上合成的β﹣淀粉样蛋白(Aβ)异常积累而引发细胞损伤导致。科研人员推断这种异常积累可能与_______ Aβ的酶C表达量下降有关。
(2)科研人员提取正常人和患者的神经元DNA,对酶C基因进行测序,测序结果完全一致,说明酶C基因表达量的改变不是____________ 导致。
(3)科研人员分别提取正常人和患者神经元的酶C基因启动子的DNA片段,再分别用具有相同识别序列(CCGG)的HpaⅡ和MspⅠ酶切(但HpaⅡ不能切割甲基化的胞嘧啶)。结果显示正常人该DNA片段用MspⅠ切割后产生的片段数目与用HpaⅡ切割后产生的片段数目的差值___________ (大于/小于)患者的相应差值,说明患者细胞中酶C基因启动子甲基化程度更高。
(4)依据上述结果,研究人员推测,患者神经元内的RNA聚合酶与酶C基因启动子结合受影响,进而影响了酶C基因的转录。结合上述研究提出一种治疗阿尔茨海默症的方案:_______________________ 。
(1)研究发现,患者脑部的神经元数量及神经元之间的
(2)科研人员提取正常人和患者的神经元DNA,对酶C基因进行测序,测序结果完全一致,说明酶C基因表达量的改变不是
(3)科研人员分别提取正常人和患者神经元的酶C基因启动子的DNA片段,再分别用具有相同识别序列(CCGG)的HpaⅡ和MspⅠ酶切(但HpaⅡ不能切割甲基化的胞嘧啶)。结果显示正常人该DNA片段用MspⅠ切割后产生的片段数目与用HpaⅡ切割后产生的片段数目的差值
(4)依据上述结果,研究人员推测,患者神经元内的RNA聚合酶与酶C基因启动子结合受影响,进而影响了酶C基因的转录。结合上述研究提出一种治疗阿尔茨海默症的方案:
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【推荐3】假设小麦的低产基因用A表示,高产基因用a表示;抗病基因用B表示,不抗病基因用b表示,两对基因独立遗传。下图是利用低产抗病小麦(AABB)及高产不抗病小麦(aabb)两个品种,通过多种育种方式培育出高产抗病小麦(aaBB)新品种的过程图解,请据图回答:
(1)经过①、②、③过程培育出高产抗病小麦(aaBB)新品种的育种方法称为________ ,让②过程得到的高产抗病小麦植株自交,后代出现aaBB的概率是________ 。
(2)经过⑥过程的育种方法叫做________ ,此种方法比较难获得高产抗病小麦(aaBB)新品种,其原因是________________ 。
(3)经过④、⑤过程的育种方法称为________ ,⑤过程常用的试剂是________ ,其作用原理是________________ ,这种育种方法的优点________________ 。
(4)螟虫是危害小麦的主要害虫之一。为了降低农药对环境造成的污染,科学家希望培育出具有抗螟虫性状的小麦新品种,图中途径________ (填数字)可以实现这一目的,该途径需要的基本工具有________ 、________ 、________ 。
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(1)经过①、②、③过程培育出高产抗病小麦(aaBB)新品种的育种方法称为
(2)经过⑥过程的育种方法叫做
(3)经过④、⑤过程的育种方法称为
(4)螟虫是危害小麦的主要害虫之一。为了降低农药对环境造成的污染,科学家希望培育出具有抗螟虫性状的小麦新品种,图中途径
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【推荐1】fat-1基因源于秀丽隐杆线虫,其编码的脂肪酸脱氢酶是合成某多不饱和脂肪酸最后一步所必需的酶,该酶在生物体内有重要作用。科研人员欲利用fat-1基因培育转基因家兔,其部分流程如图所示(已知引物1和引物2与a链互补,引物3和引物4与b链互补)。___ 的5'端添加的限制酶识别序列为___ 。
(2)PCR扩增过程中,最早经过___ 轮循环后,便可获得两端均携带限制酶识别序列的所需双链目的基因。
(3)为了获得转基因家兔,需利用___ (方法)将目的基因导入动物的受精卵中。
(4)为了获得转基因动物,还需要将含有目的基因的受精卵发育形成的胚胎移植到受体子宫内。在胚胎移植前要用孕激素等对受体进行___ 处理,原因是___ 。
(2)PCR扩增过程中,最早经过
(3)为了获得转基因家兔,需利用
(4)为了获得转基因动物,还需要将含有目的基因的受精卵发育形成的胚胎移植到受体子宫内。在胚胎移植前要用孕激素等对受体进行
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【推荐2】培育转基因普通小麦(六倍体)时,利用小麦幼胚、花药等作为目的基因的受体,经选育可获得小麦纯合子植株。请回答:
(1)在表达载体的构建过程中,需要依据目的基因、载体的核苷酸序列及限制酶的识别序列选择____ (填“限制酶”或“DNA连接酶”);相同限制酶分别切割目的基因和载体后通常会形成相同的 ___________ 。
(2)导入目的基因的花药经离体培养获得的幼苗一般为_ (填“六倍体”“三倍体”或“单倍体”);该幼苗经___________ 处理以获得转基因纯合子植株。
(3)目的基因探针不能用于检测小麦转基因植株是否为纯合子,原因是______________________ 。
(4)与小麦花药作为受体相比,利用小麦幼胚作为受体获得转基因小麦纯合子植株的速度较___________ 。
(1)在表达载体的构建过程中,需要依据目的基因、载体的核苷酸序列及限制酶的识别序列选择
(2)导入目的基因的花药经离体培养获得的幼苗一般为
(3)目的基因探针不能用于检测小麦转基因植株是否为纯合子,原因是
(4)与小麦花药作为受体相比,利用小麦幼胚作为受体获得转基因小麦纯合子植株的速度较
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【推荐3】图1表示培育转KIFⅡ基因绒山羊的流程图,图2是该流程中构建基因表达载体的示意图,其中a、b、c、d为4个限制酶的酶切位置,分别对应限制酶a、限制酶b、限制酶c、限制酶d,这些位点的碱基序列完全不同。请回答下列问题。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/editorImg/2023/4/28/8298287c-1257-434d-ae5b-629b1705199b.png?resizew=500)
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/editorImg/2023/4/28/48d509b4-c9fe-468c-aa4e-ed10317e6318.png?resizew=444)
(1)图1中,①过程需用到限制酶和__________ 酶,具体用到的限制酶是__________ ;⑤过程涉及的生物技术至少有__________ (答出2点即可)。
(2)为了获得足量的卵(母)细胞,图中③过程常给成年母绒山羊注射__________ ,而不直接注射性激素的原因是__________ 。
(3)图1中,④过程用适宜时期的卵(母)细胞还需进行__________ 处理。
(4)已知质粒pZHZ1的长度为3.7kb(1kb=1000对碱基),其中a~b区域长度为0.8kb,b~c区域长度为0.2kb,c~d区域长度为0.5kb。分别用限制酶a、d切割图2中重组质粒pZHZ2样品,能被限制酶a切割成1.7kb和3.4kb两个片段,被限制酶d切割成1.9kb和3.2kb两个片段,原因是目的基因内有一个限制酶a的识别位点和一个限制酶d的识别位点。推测:目的基因的长度约为__________ kb;目的基因内限制酶a和限制酶d的酶切位点之间的距离约为__________ kb。
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(1)图1中,①过程需用到限制酶和
(2)为了获得足量的卵(母)细胞,图中③过程常给成年母绒山羊注射
(3)图1中,④过程用适宜时期的卵(母)细胞还需进行
(4)已知质粒pZHZ1的长度为3.7kb(1kb=1000对碱基),其中a~b区域长度为0.8kb,b~c区域长度为0.2kb,c~d区域长度为0.5kb。分别用限制酶a、d切割图2中重组质粒pZHZ2样品,能被限制酶a切割成1.7kb和3.4kb两个片段,被限制酶d切割成1.9kb和3.2kb两个片段,原因是目的基因内有一个限制酶a的识别位点和一个限制酶d的识别位点。推测:目的基因的长度约为
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【推荐1】抗凝血酶Ⅲ是一种药用蛋白,对预防和治疗静脉血栓、心肌梗死、脑血管病变具有重要作用。为了提高抗凝血酶Ⅲ的产量,科研人员设计利用崂山奶山羊乳腺生物反应器制备抗凝血酶Ⅲ,并获得了成功。制作崂山奶山羊乳腺生物反应器的流程如图1所示。回答下列问题:______ ,扩增抗凝血酶Ⅲ基因的过程中一般不需要使用解旋酶,原因是______ 。
(2)构建基因表达载体时,需要将抗凝血酶Ⅲ基因插入到启动子与______ 之间,其中启动子的作用是______ 。
(3)获取重组质粒后,将重组质粒导入受精卵。从崂山奶山羊A的卵巢中获取卵子和从崂山奶山羊B的睾丸中获取精子,其中精子要进行______ 处理才具备受精的能力。图1中步骤④常用的方法是______ 。
(4)科研人员通过实验获得三只转基因奶山羊D(甲、乙、丙)。科研人员对甲、乙、丙三只奶山羊和非转基因奶山羊进行了基因检测。检测结果显示非转基因奶山羊体内无抗凝血酶Ⅲ基因,甲、乙、丙三只奶山羊体内均含有抗凝血酶Ⅲ基因。进一步检测抗凝血酶Ⅲ的表达情况,结果如图2所示。______ 。
(2)构建基因表达载体时,需要将抗凝血酶Ⅲ基因插入到启动子与
(3)获取重组质粒后,将重组质粒导入受精卵。从崂山奶山羊A的卵巢中获取卵子和从崂山奶山羊B的睾丸中获取精子,其中精子要进行
(4)科研人员通过实验获得三只转基因奶山羊D(甲、乙、丙)。科研人员对甲、乙、丙三只奶山羊和非转基因奶山羊进行了基因检测。检测结果显示非转基因奶山羊体内无抗凝血酶Ⅲ基因,甲、乙、丙三只奶山羊体内均含有抗凝血酶Ⅲ基因。进一步检测抗凝血酶Ⅲ的表达情况,结果如图2所示。
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【推荐2】某实验室通过基因工程成功培育出抗虫植物,其培育过程大致如图所示,请据图分析回答下列问题:
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2022/7/11/3020261295497216/3021047789314048/STEM/bf637651fd244cbaa721c177afe22f11.png?resizew=438)
(1)抗虫植物的培育过程中,目的基因是____________ 。用PCR扩增目的基因时,需要设计引物,引物设计的的依据是________________________
(2)目的基因获取之后,需要构建______________ ,启动子是______________ 识别和结合的部位,有了它才能驱动目的基因____________ 。
(3)图示将获取的目的基因导入植物细胞最常用的方法为______________ 法,通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的______________ 上。目的基因是否成功导入植物细胞,可以用____________ 法进行检测。如果操作中将该基因导入线粒体DNA中,将来产生的配子中________ (填“一定”或“不一定” )含有抗虫基因。
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(1)抗虫植物的培育过程中,目的基因是
(2)目的基因获取之后,需要构建
(3)图示将获取的目的基因导入植物细胞最常用的方法为
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