【推荐2】[生物——选修1：生物技术实践]（15分）
皮肤作为人体最大的器官拥有达1.8 m²的表面积，其主要功能是作为物理屏障，保护机体免受外来生物或有毒物质的侵害。同时，皮肤也是人体与外界环境接触的部位，因此常驻有各类微生物，包括细菌、真菌等，可通过微生物培养技术了解我们的皮肤表面的微生物分布情况。回答下列问题：
（1）微生物培养利用的培养基的类型很多，但培养基中一般都含有水、无机盐、碳源、___________。由于不同种类的微生物的菌落特征表现不同，因此可以利用____________________培养基来培养、观察菌落特征，对微生物进行初步的鉴定和分类。
（2）有同学通过制备牛肉膏蛋白胨培养基来培养附着在皮肤表面的细菌。制备该培养基的操作步骤是计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。倒平板时需要在酒精灯火焰旁操作，待平板冷却凝固后，还需要将平板____________________________。为了确定培养基灭菌效果是否达到要求，可随机取若干____________________________，在适宜条件下培养一段时间，观察该培养基是否出现了菌落，若没有出现，则证明培养基的灭菌效果达到了要求。
（3）采集并制备样液，并将样液接种到培养基的平板上培养。采用的接种方法有________________和_________________，若采用前者，则操作中接种环在使用前要在酒精灯火焰上先灼烧，其目的是____________________________，第二次及其后的划线都要从上一次划线的末端开始，其目的是____________________________。
[生物——选修3：现代生物科技专题]（15分）
在荧光素酶中加入正确的荧光素底物就可以放出荧光。荧光素酶及其合成基因在生物研究中有着广泛的应用。请回答下列问题：
（1）荧光素酶基因可以从基因文库中获取，也可以通过________方法得到，再利用PCR技术扩增即可，扩增荧光素酶基因利用的原理是__________________。
（2）在基因工程操作过程中，需要用________酶和________酶构建基因表达载体，基因表达载体要有________，以便筛选出含有目的基因的受体细胞。
（3）荧光素酶基因也可以作为目的基因转入某些动植物细胞中表达产生荧光素酶。将目的基因导入植物细胞，目前常用的目的基因载体是农杆菌的Ti质粒，目的基因需插入到该基因载体的____________上，然后再转移至受体细胞中。将目的基因导入动物细胞的技术中，应用最多的是_______。

【推荐3】Ag/TiO₂作为一种常见的半导体光催化剂，在可见光照射下不仅可杀灭饮用水中的细菌等微生物，降解水中的有机化合物，还能循环利用，因此被广泛使用。某研究小组制备了Ag/TiO₂空心微球悬浊液，现欲探究不同载银量的Ag/TiO₂空心微球的杀菌性能。回答下列问题：
(1)培养大肠杆菌：牛肉膏蛋白胨固体培养基适宜大肠杆菌生长，其制作流程为计算→称量→________→________→倒平板，待平板冷凝后，将平板倒置。将大肠杆菌制备成菌悬液分离纯化。
(2)杀菌性能检测：挑取菌落制成菌悬液，用________（工具）接种于无菌平板表面，使其均匀生长，布满平板；用浸透了________的小滤纸片（实验组）和浸透了________的小滤纸片（空白对照），分别放在涂好菌的平板的不同位置；将平板置于恒温箱中培养一段时间，观察记录________。
(3)测定饮用水所含的大肠杆菌数目，还有一种特别的方法：将10mL饮用水均分为5组，每组饮用水过滤后，将滤膜放在加入________的鉴别培养基上，在适宜条件下培养，待菌落数目稳定时，统计每组黑色菌落的数目，若得到平均值为40，则水样中大肠杆菌的数量为________个/L。

【推荐1】嗜吡啶红球菌可以将硝酸盐还原成亚硝酸，还能使榨菜在腌制过程中变红；该菌的菌落呈红色、奶酪状、圆形、隆起。研究人员为了初步鉴定变红的榨菜中是否含有嗜吡啶红球菌，进行了相关实验，请回答下列问题
（1）培养嗜吡啶红球菌的培养基的pH应调至中性或微碱性，该步骤应在_____________之前完成。
（2）初步鉴定嗜吡啶红球菌时，先要纯化榨菜中的菌种，纯化时先将榨菜样液用滤膜过滤，滤膜的孔径应_____________ （填大于或小于）菌种的体积。挑取滤膜上的菌种，接种在平板上培养，常用的接种方法有_____________________________。培养微生物时，常培养一个未接种的培养基，目的是_______________________。一段时间后观察平板上的菌落特征，若观察到___________________________，则可初步确定变红榨菜中含有嗜吡啶红球菌。

【推荐2】长沙臭豆腐是一种传统的发酵食品，制作时需要将豆腐浸入含有乳酸菌和芽孢杆菌等微生物的卤汁中，卤汁中微生物的优劣会影响臭豆腐的风味。某科研小组为改进臭豆腐生产工艺，从卤汁中分离、筛选纯种乳酸菌，对其功能进行相关研究。请回答下列问题：

(1)分离筛选纯种的操作中首先就是要制备培养基，其操作步骤为配置培养基→灭菌→倒平板。培养基常用的灭菌方法是______法。图1所示的操作为倒平板，该图示操作存在错误，请指出错误之处：______。
(2)为筛选出乳酸菌，利用乳酸菌在含CaCO₃的培养基上产生溶解圈的原理，将上述菌种接种到含CaCO₃的培养基上，经过图2中______（填序号）所示放置，并且在______条件下培养。
(3)有人提出卤汁中乳酸菌的含量也会影响产品品质，该小组将卤汁样品进行一系列的梯度稀释，将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到固体培养基的表面进行培养，然后记录菌落数，这种计数方法称为______，其统计的结果比实际数目______，原因是______。在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取______时的记录作为结果，以防止因______。

【推荐1】大肠杆菌结构简单、繁殖速度快，是微生物学常见的实验材料，下图是某校生物兴趣小组开展微生物学实验时观察到的一些实验现象。请结合题中所给信息回答下列问题。

(1)上图所示的接种方法是____________，接种完成后共灼烧______次接种环。
(2)某同学从培养液中吸取部分样液，稀释后将0.1ml液体涂布在培养基上得到平均数如下：

稀释倍数	101	102	103	104	105	106
培养结果
计数（平均值）	难以计数	难以计数	难以计数	159	17	2

由图可知，适宜的稀释倍数是______，每毫升培养液中的大肠杆菌数是__________，这种计数方法得到的细菌数往往偏小的原因是______________。
(3)另一同学采用血球计数板计数，这种计数方法称为_____________，鉴定大肠杆菌可用在培养基中加入__________进行染色。

【推荐2】运用所学知识回答下列与生物技术实践相关的问题。
(1)常用的微生物接种方法有两种，但只有_______可用于微生物的计数，运用该方法计数的结果往往比实际结果偏_____（填“低”或“高”）。在微生物培养时，需要对菌种保存，频繁使用的菌种，可以将菌种接种到_______培养基临时保藏，需要长期保存的菌种可以采用_____ 的方法放在－20℃冷冻箱中保存。
(2)分离血红蛋白时，将搅拌好的混合液离心后，从上到下第____（填1、2、3或4）层是红色血红蛋白的水溶液，将试管中的液体过滤，主要是除去___沉淀。
(3)萃取加热时需安装冷凝回流装置，其目的是_______。萃取过程主要采用的加热方式是_______，原因是________。

【推荐3】采集病人的细菌样本，用各种抗生素检测细菌是否敏感（即药敏试验），可以帮助临床选药。回答下列问题：
(1)药敏试验之前需要配制培养基，配制固体培养基需要添加凝固剂________。大多数培养基都含有_____4类物质，此外还需要满足细菌生长对pH、______以及O₂的要求。
(2)为将单个细菌分散在固体培养基上，经培养一段时间后统计菌落数目，可采用的接种方法是_____。该方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目_______（填“低”或“高”）原因是_______。
(3)在接种了待检细菌的平板上，贴上浸有某种抗生素的干纸片，可以出现抑菌圈。临床上应选择抑菌圈______（填“大”或“小”）的抗生素作为治疗药物。从生物进化的角度分析，滥用抗生素的危害是______。

【推荐1】圆褐固氮菌能将大气中的氮气转化为氨，用于合成蛋白质等含氮的有机物，是异养需氧型的原核生物。某兴趣小组对土壤中的圆褐固氮菌进行计数，请回答相关问题：
(1)要想获得圆褐固氮菌的菌种最好选择________(填“表层”或“深层”)的土壤。在培养圆褐固氮菌的培养基中不需要加入的成分是________；该培养基从功能上划分，属于________培养基。
(2)在配制含琼脂的培养基和倒平板的过程中，下列器材中不需要的是________(填序号)。①酒精灯　②接种环　③高压蒸汽灭菌锅　④棉塞
(3)本实验采用的接种方法是________，其统计结果一般用________数而不是活菌数来表示。
(4)在培养过程中将未接种菌种的空白平板与正常接种菌种的平板同时培养，这样做的目的是____________________________________________。

【推荐2】如表所示为某微生物培养基的配方，请回答：

成分	含量	成分	含量
NaNO3	3g	FeSO4	0.01g
K2HPO4	1g	葡萄糖	30g
琼脂	15g	H2O	1000mL
MgSO4•7H2O	0.5g	青霉素	0.1万单位

(1)根据功能划分，则属于______培养基。根据培养基的成分，所培养微生物的同化作用类型是______。该培养基中的碳源是______。
(2)如要鉴定自来水中的大肠杆菌是否超标，至少要加入______、______和______，除去______。
(3)若将细菌置于适宜的营养基上，它会繁殖并形成细菌菌落。如图所示，用哪项适当的实验可以用来检验两种抗生素的杀菌作用__________。

A．	B．
C．	D．

(4)鉴定纤维素分解菌的方法是____________，接种的方法是__________，一般认为纤维素酶至少包括_______三种组分。

【推荐3】中国科学家运用合成生物学方法构建了一株嗜盐单胞菌 H ，以糖蜜   (甘蔗榨糖后的废弃液 ，含 较多蔗糖)   为原料 ，在实验室发酵生产 PHA 等新型高附加值可降解材料 ，期望提高甘蔗的整体利用价值 ，工艺流程如图。请回答问题。

(1)发酵装置中搅拌器的作用是_________。
(2)为提高菌株 H 对蔗糖的耐受能力和利用效率 ，可在液体培养基中将蔗糖作为____，并不断提高其浓度 ，经多次传代培养   (指培养一段时间后 ，将部分培养物转入新配的培养基中继   续培养)   以获得目标菌株。培养过程中宜采用________法对样品中的活菌进行接种和计数 ，以评估菌株增殖状况。若某次取样中 ，对菌液稀释了 10⁵倍后 ，在每个平板上涂布菌液的体积为     0. 1ml ，平板上的平均菌落数为 220 个 ，则菌液中 H 菌的细胞数为_________个/ml。用这种方法统 计的结果往往较实际值______ ，原因是_________。菌落数目需要每隔一   段时间统计一次 ，选取菌落数目稳定时的记录作为结果 ，这样做的目的是___________。
(3)基于菌株 H 嗜盐 、酸碱耐受能力强等特性 ，研究人员设计了一种不需要灭菌的发酵系统 ，其 培养基盐浓度设为 60g/L ，pH 为 10 ，菌株 H 可正常持续发酵60d 以上。分析该系统不需要灭菌的 原因是____________________________。
(4)研究人员在工厂进行扩大培养 ，在适宜的营养物浓度 、温度、pH 条件下发酵 ，结果发现发 酵液中菌株 H 细胞增殖和PHA 产量均未达到预期 ，并产生了少量乙醇等物质 ，说明发酵条件中     ________可能是高密度培养的限制因素。发酵工程的中心环节是_____。
(5)菌株 H 还能通过分解餐厨垃圾   (主要含蛋白质、淀粉 、油脂等)   来生产 PHA ，说明其能分泌_____________