【推荐1】新冠病毒变异株奥密克戎具有高度的传染性，是因为棘突蛋白（S蛋白）变异多达43处，但因奥密克戎在肺部等组织中不易繁殖，所以致病性较弱。S蛋白是新冠病毒（+RNA病毒）识别宿主细胞受体的一种关键蛋白，是诱发机体免疫反应的主要抗原。分析回答：

(1)以RNA为模板，通过RT-PCR（反转录-聚合酶链式反应）技术可获取S蛋白基因。进行RT-PCR时一般需要加入4种脱氧核苷三磷酸（dNTP）而不是脱氧核苷酸，其原因是在子链延伸过程中dNTP提供_____，同时需加入的酶有_____。
(2)据图1分析，要获取大量S蛋白基因应选择的引物是_____，其作用是使酶能够从引物的_____端开始连接脱氧核苷酸。通过电泳鉴定PCR的产物，结果如图2所示。1号泳道为标准（Marker，不同已知长度的DNA片段混合物），2号泳道为阳性对照（提纯的S蛋白基因片段），3号泳道为实验组。若3号泳道出现杂带可能的原因有_____。
(3)接种新冠疫苗加强针是应对奥密克戎的有效手段之一，腺病毒是一种DNA病毒，毒性很弱，感染后一般不会出现严重症状。图3是生产重组腺病毒疫苗的流程。分析回答：

①若PacI酶在过程②中使用，该酶所作用的化学键是____。线性pAd需要转入特定细胞才能产生重组腺病毒，原因是基因的表达需要细胞提供_____（答出2点）。
②将重组腺病毒接种到人体中的方式是_____。据图3分析，重组腺病毒对人体相对安全，理由是_____。

【推荐2】镍是一种重金属，由于在工业上被大量使用及废料的大量排放而对环境产生了严重的污染。科研人员采用重组DNA技术构建了两种重组质粒，其中重组质粒pSUNI含有nixA基因，该基因编码一种高特异性的Ni²+转运蛋白，重组质粒pGPMT3带有编码金属硫蛋白基因(tmG)，金属硫蛋白(TM)可高容量地结合重金属离子，又可在细胞内消除重金属离子对细胞本身的毒害作用。科研人员再利用基因工程将两种目的基因导入到大肠杆菌，培育出能够富集Ni²+的“超级细菌”——大肠杆菌JM109，用来净化工业废水，治理环境污染。回答下列问题：
(1)构建重组质粒pSUNI、pGPMT3所需要的两种酶是____，将重组质粒导入大肠杆菌JM109细胞之后，nixA基因表达产物分布在大肠杆菌的____。
(2)为检测目的基因是否导入大肠杆菌，可采用PCR技术对待测大肠杆菌进行检测，但需先提取其DNA。为充分溶解DNA，将获得的沉淀物溶于____(要求写出液体名称及具体浓度)中，再用____(填一种方法)对PCR产物进行鉴定。
      
(3)为获得大量的大肠杆菌JM109，科研人员将受体菌分别接种于3个盛有等量同种液体培养基的容器瓶中，并放置在摇床上培养，摇床转速分别为210r/min，230r/min和250r/min。培养时间与大肠杆菌种群密度的关系如图1所示。分析数据可以得出结论：在一定转速范围内，摇床转速越高，____，其原因是____。
(4)科研人员为检测大肠杆菌JM109富集Ni²⁺的效果，在适宜的条件下培养原JM109、JM109+pSUNI、JM109+pSUNI+pGPMT3，在含有一定浓度Ni²⁺的培养液中培养，检测大肠杆菌菌体的数量和菌体中Ni²+的含量，实验结果如图2所示。JM109+pSUNI组的大肠杆菌数量最少的原因是________。

【推荐3】植物细胞壁中存在大量不能被猪消化的多聚糖类物质，如半纤维素多聚糖、果胶质（富含有半乳糖醛酸的多聚糖）等。研究人员通过基因工程、胚胎工程等技术培育出转多聚糖酶基因（manA）猪，主要流程如下图（neo为新霉素抗性基因）。请回答下列问题：
   
(1)下列A-D所示的黏性末端是由______种限制性内切酶作用产生的，其中_______所示黏性末端为用EcoRI酶切后所得。
A．                       B．   
C．                    D．   
(2)利用PCR技术扩增manA时，需经过变性、复性、延伸等阶段。设计PCR过程所需引物的主要依据是_______。复性时，引物与模板链发生碱基互补配对，其温度的设定与引物长度、碱基组成有关，长度相同但______的引物需要设定更高的复性温度。若PCR反应得到的扩增产物很少，原因可能有______（填序号）。
①变性温度过低                    ②复性温度过低                    ③缓冲液中Mg²⁺浓度过低
(3)据图1分析，BamHI切割形成的黏性末端是______。图2中的步骤[____]______过程，是基因工程基本操作程序中的核心步骤。
(4)通过①过程获得的重组质粒含有4．9kb（千碱基对），其中manA基因含有1．8kb。现将该重组质粒成功导入受体细胞后，却只有50%左右的细胞能正常表达目的基因产物，原因是_______。若用BamHI和EcoRI联合酶切割其中一种重组质粒，只能获得1．7kb和3．2kb两种DNA片段，若用上述联合酶切割同等长度的另一种重组质粒，则可获得_______kb长度的DNA片段。
(5)为提高成功率，需提前对受体母猪注射_____。与普通猪相比，该转基因猪的优势是_____。

【推荐1】癌细胞表面蛋白“PDL-1”与T细胞表面蛋白“PD-1”特异性结合后，可抑制T细胞活性并启动其凋亡，导致肿瘤细胞发生免疫“逃逸”。研究者对“PD-1”基因进行克隆、表达及生物学活性鉴定，为制备抗体打基础。研究中所用引物α和β碱基序列见图1、几种常用限制酶名称及识别序列与酶切位点见图2：

α链：5'-T C A C T C G A G A C C A T G C A G A T C C C A C A G G C G C C C-3' β链：5'-C T C G A A T T C T C A G A G G G G C C A A G A G C A G T G-3' 图1

（1）首先提取细胞中的mRNA反转录生成____________________作为模板；设计含有不同的限制酶切点的α和β序列为引物，通过____________________技术扩增目的基因。
（2）选用图1中的两种名称分别为____________________的限制酶将“pIRES2-EGFP质粒”载体进行双切，再用DNA连接酶将其与目的基因拼接，构建表达载体。该表达载体的组成，除了目的基因、标记基因抗卡那霉素基因外，还必须具有____________________等。
（3）而后一定温度下，与经过处理的感受态大肠杆菌混合培养在含有_____________培养基中，可筛选出已经完成转化的大肠杆菌，继续培养该种大肠杆菌以扩增重组DNA。
（4）将扩增后的“pIRES2-EGFP载体/PD-1重组DNA”转入可高度表达外源基因的原代293T细胞。一段时间后，为确定PD-1基因是否表达，检测细胞膜表面是否具有____________________。为判断其是否具有生物学活性和功能，则可裂解293T细胞，提取该物质看能否与____________________发生结合，从而阻断“PD-1与PDL-1信号通路”。研究中还会有一步骤，只将“pIRES2-EGFP载体”转入293T细胞，其目的是_________________________。

【推荐2】栾树适合生长于石灰石风化产生的钙基土壤中，抗恶劣环境的能力强，因此常用于矿区废弃地恢复过程中的种植。为了增加栾树的耐旱性，某科研所将耐旱基因导入栾树中，流程图如下。回答下列相关问题：

（1）使用 HindIII和BamHI在Ti质粒的_________上进行切割。①被 HindIII和 BamHI酶切后，最多能产生_______种DNA片段。
（2）经过②构建的产物称为___________，经过③可形成具有_________能力的薄壁细胞，进而形成甲中的________组织。
（3）③④⑤过程的基本原理是______________，利用该技术可以实现快速大量繁殖优良品种的种苗，也可以获得单倍体幼苗，请说出二者在操作上的区别是____________。
（4）矿区废弃地恢复工程中，关键在于植被的恢复，以及为植被恢复所必需的_______的重建。最终为了使该地区具有较高的抵抗力稳定性，这体现了生态工程的___________原理。

【推荐3】某植物的A基因是一个受低温等因素诱导表达的基因，其表达产物A蛋白是该种植物获得耐寒性不可或缺的一种防冷冻蛋白。科研小组欲利用A基因培育转基因抗冻番茄新品种。A基因上的两个限制酶切割位点及载体结构如图所示，回答下列问题：

   

(1)研究人员用限制酶EcoRⅠ切出的末端Ⅰ为   ，用限制酶SmaⅠ切出的末端Ⅱ为   ，请依次写出这两种限制酶的识别序列，并用箭头标出切割位点___、___。
(2)利用PCR扩增目的基因时，需向反应体系中加入两种引物，引物的作用是___。图中启动子的作用是___。
(3)A基因转录时以图一中α链为模板链，mRNA自身的延伸方向为（5'—3'。A基因应插入图二中___（填“启动子甲”或“启动子乙”）的下游，并且酶切位点___（填“1”或“2”）离该启动子更近些。
(4)基因工程育种与杂交育种相比具有___的优势，与诱变育种相比具有___的优势。
(5)为使甘蓝具有抗除草剂能力，科研人员将除草剂草甘膦抗性基因转入甘蓝植株，获得抗草甘膦转基因甘蓝。回答下列问题：

a.草甘膦抗性基因一条链的两端序列如图1所示，采用PCR技术获取和扩增草甘膦抗性基因时应选用的2种引物序列是___（标出5'端和3'端）。若初始加入1个草甘膦抗性基因，则历经4次PCR循环需要消耗引物数量为___个。
b.图2中步骤③将农杆菌与甘蓝愈伤组织共培养后，在步骤④的培养基中添加___以便筛选出含目的基因的甘蓝植株。添加此抗生素而不选用添加另一种抗生素筛选的原因___。
c.若要检测转基因甘蓝植株是否产生抗除草剂蛋白，所用的方法是___。

【推荐1】某研究小组欲将已知抗除草剂基因导入原生质体培育抗除草剂大豆。请回答下列问题：
（1）为获得大量抗除草剂基因，可通过_______技术进行扩增，也可将其连接到_______上，通过大肠杆菌培养扩增。
（2）制备叶片原生质体的酶混合液中，一般含较高浓度的甘露醇，其目的是避免制备的原生质体_____________。无菌原生质体的制备过程中，整个无菌操作过程需在__________中进行。
（3）可通过___________方法，直接将抗除草剂基因导入原生质体的细胞核。此外，还可用___________融合、点激等方法导入。导入后的原生质体需再生出__________，经持续分裂获得愈伤组织，进一步分化获得再生植株并扩大繁殖。
（4）利用带有标记的抗除草剂基因特殊片段与从转基因植株提取的RNA进行___________，验证抗除草剂基因是否被整合到受体的细胞中并转录。

【推荐2】水稻不育系的选育是杂交水稻育种工作中的关键环节。为了获得某水稻品种的不育系， 研究人员对该水稻品种的TMS5基因进行编辑，基因编辑过程如图。

回答下列问题。
（1） Cas9蛋白与TMS5基因结合后，使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的________断开。断裂后的DNA分子会自动进行修复，修复过程中在b图所示位点插入碱基A之后两个片段在________酶作用下得到编辑成功的TMS5基因。
（2）编辑成功的TMS5基因可采用PCR技术扩增，前提是要根据一段________合成引 物。该基因的上游连接启动子，可作为________识别和结合的部位，再组装到相应的载体上，该载体的结构还应包括________。
（3）构建的基因表达载体通过农杆菌侵染水稻愈伤组织，并整合到水稻细胞的________上， 愈伤组织经过________形成水稻幼苗。
（4）基因编辑中插入碱基A，会导致翻译提前终止，使TMS5基因表达的蛋白质不能产生， 最终导致水稻花粉不育。用抗原—抗体杂交技术检测TMS5基因编辑是否成功，若 ________（填“出现”或“未出现”）杂交带，则表明基因编辑成功。

【推荐3】稻田生物固氮作用是稻田氮素循环的关键环节，某些蓝细菌是自生固氮菌（独立生活时能够利用空气中游离的氮分子作为氮源，并将氮分子转化为氨，氨转化为铵盐后是植物良好的氮素营养）。蓝细菌中B基因表达的B蛋白是一种有助于蓝细菌高效吸收的载体蛋白，科学家利用基因工程和细胞工程等技术，尝试将蓝细菌的B基因导入水稻细胞，以期获得吸收能力较强的转基因水稻，从而增加粮食产量。下图1、2分别是农杆菌的Ti质粒和蓝细菌B基因的结构模式图。回答下列有关问题：
   
(1)为获得可用于进一步研究的固氮蓝细菌的菌株，从培养基功能的角度分析，可以使用______培养基从自然菌群中筛选，该培养基所需的营养物质有无机碳源、______（写两种），但不需要添加______营养物质，并在有光条件下培养。
(2)利用PCR技术以图2中的DNA片段为模板扩增B基因时，需要的引物有______（填写图中引物代号），理由是________________________。
(3)在构建含B基因的表达载体时，需要用限制酶______切割Ti质粒和B基因，不选用其他限制酶的原因是________________________。
(4)为检测B基因在转基因水稻细胞中是否成功表达，可采用抗原—抗体杂交法在分子水平上检测，还可以在个体水平上检测，请写出个体水平检测的实验思路：________________________。

【推荐1】血清疗法是将治愈的患者的血清（抗血清）注射到对应血型以及相应疾病的患者身上达到治疗的目的。为研究猪圆环病毒病的血清疗效，某科研人员采集猪群中痊愈期猪的血清。给45日龄患病仔猪腹腔注射，结果如下表所示。请分析回答下列问题:

	参试猪数量	死亡数[死亡率	发病症状
正常对照组	40	0（0）	无症状
病毒对照组	30	30（100%）	明显
高剂量细	30	0（0）	由明显转为无症状
中剂量组	30	5l6.7%	由明显转为轻度
低剂量组	30	20（66.7%）	由明显转为中度

(1)血清疗法是利用治愈患者血清中的_______来治疗相应疾病。
(2)将猪圆环病毒注入猪体内，首先引起___（填“体液”或“细胞”）免疫产生抗体。若猪圆环病毒侵入细胞内，则由___细胞来发挥作用，裂解靶细胞。
(3)该实验的自变量是___，实验结果表明___。
(4)此实验结果对于人类治疗新冠肺炎的价值是___。

【推荐2】（一）如图是人体稳态调节机制的示意图，①～④表示相关的激素。请据图回答下列问题：

(1)某同学长跑时心跳加速，血压升高，压力感受器激活心血管中枢，传出神经释放神经递质，递质作用于心脏及血管细胞膜上的________，从而降低血压，该调节方式属于________调节。
(2)该同学因运动大量出汗，血浆渗透压升高，激活位于________的神经元A，促使其合成和分泌________（填①的名称），进而促进肾脏对水的重吸收。
(3)该同学因运动体温升高，体温调节中枢通过调节皮肤血管和汗腺，增加散热；运动后，神经元B合成和分泌②减少，导致③、④合成和分泌________，减少产热，维持体温相对稳定。激素②的名称是________。

（二） “胃肠感冒”在医学上称“呕吐性上感”，主要是由一种叫“柯萨奇”的病毒引起的，同时伴有细菌性混合感染。它的发病症状主要是：呕吐、腹泻、发热。

(4)胃部因病菌或其他毒性物质进入，通过非条件反射导致胃体肌肉收缩，将胃内容物排出体外，该反射的结构基础是______________________。受到刺激发生该反射时神经冲动在神经纤维上的传导是__________（“单”、“双”）向的。
(5)当体内有炎症时会出现发热现象，这有利于吞噬细胞和杀菌物质等转移到炎症区，抵御病原体的攻击，此过程属于机体免疫系统的第__________道防线。
(6)若注射疫苗预防该疾病，其机理主要是注射疫苗使机体产生相应____________，当病毒感染时注射过疫苗的机体免疫速度更快，强度更大。免疫调节不仅积极应对外来抗原的入侵，同时也随时应对体内的衰老、癌变和受损的细胞。以上资料说明免疫系统具有________________功能。