【推荐2】hTERT基因可引起端粒延长，延长细胞生命周期。科研人员利用P2A基因将hTERT基因和增强型绿色荧光蛋白基因（EGFP基因）连接，使之共表达，从而构建出含hTERT-P2A-EGFP目的片段的重组质粒，为进一步研究hTERT基因的功能和构建永生细胞系奠定基础。hTERT-P2A-EGFP目的片段的结构和大小如下图，回答下列问题：

(1)科研人员首先利用PCR技术对目的基因hTERT、P2A、EGFR进行扩增。PCR的原理是_____，反应体系需要提供_____种引物，引物的作用是使DNA聚合酶能够从引物的_____（填“3′”或“5′”）端开始连接脱氧核苷酸。
(2)构建hTERT-P2A-EGFP目的片段时需使用的工具酶有_____，都能作用于_____（化学键）。
(3)为了初步鉴定hTERT-P2A-EGFP目的片段是否构建成功，科研人员对连接体系中的基因进行扩增，并对扩增产物的大小进行测定。若扩增产物的大小为_____，则说明了hTERT基因和EGFP基因已连接到P2A基因上。
(4)为进一步验证重组质粒是否成功表达，科研人员将受体细胞平均分成A、B两组，其中A组受体细胞导入重组质粒，B组受体细胞导入_____。支持“重组质粒成功表达”的实验结果为：_____。

【推荐3】亮氨酸脱氢酶是一类氧化还原酶，在临床生化诊断上有重要作用。有研究表明，在亮氨酸脱氢酶基因原有启动子（P_HpaII）之后加上信号肽（引导新合成的蛋白质向分泌通路转移的一段肽链）序列，可提高亮氨酸脱氢酶产量。科研人员进一步研究双启动子（P_HpaII、P_amyQ）及双启动子后再分别添加3种信号肽序列对亮氨酸脱氢酶产量的影响，主要实验流程如下图。请回答下列问题。
   
(1)启动子的功能是______。组成信号肽的基本单位是______。
(2)过程①中，PCR反应体系中添加的dNTP的功能有______，添加的一对引物是______。
P1：5′-GGGAATCATATGGGCGGCGTTCTGTTTCTG-3′
P2：5′-CCGATTAAGCTTGGCGGCGTTCTGCATCTG-3′
P3：5′-CGCGGATCCATAAGGCAGTAAAGAGGCTTTTG-3′
P4：5′-GCCGGATCCACAAGGCAGTATTTACTGCCTT-3′
(3)过程②中，启动子P_amyQ能与质粒1连接的分子基础是______。将重组质粒1导入枯草杆菌前先用Ca²⁺处理枯草杆菌，其主要目的是______。转化后的枯草杆菌一般要用稀释涂布平板法接种到添加______的培养基上进行筛选。
(4)科研人员将质粒1、重组质粒1和3种重组质粒2分别导入枯草杆菌得到甲~戊5种重组枯草杆菌，进行发酵后提取上清液中的亮氨酸脱氢酶，酶活力测定结果如下表。

重组菌	甲	乙	丙	丁	戊
酶活力/	10.11	31.24	0.44	6.49	21.76

①结果表明，______最有利于提高亮氨酸脱氢酶产量。
②双启动子后添加信号肽序列影响酶的表达或分泌量的原因可能有______。
a.信号肽序列影响了亮氨酸脱氢酶基因的表达
b.信号肽序列影响了启动子转录成相应的mRNA序列
c.信号肽序列表达产物使亮氨酸脱氢酶分泌路径发生改变

【推荐1】普通小麦（6n=42）的籽粒中主要是直链淀粉，表现为非糯性，直链淀粉的含量与Wx基因呈高度正相关。小麦具有3对Wx基因（Wx-A1、Wx-B1和Wx-D1），当这3对基因同时隐性纯合或缺失时，籽粒中主要是支链淀粉，表现为糯性。自然界中通常不存在糯小麦。请回答下列问题。
(1)在遗传学中，小麦的糯性和非糯性可被称为_____。
(2)研究人员将两种非糯性小麦进行杂交，白火麦（缺失Wx-D1）为母本，关东107（缺失Wx-A1和Wx-B1）为父本，最终筛选出2株纯糯单株。在进行人工杂交时，需在花粉成熟前对亲本中的_____去雄再套袋，这些操作的目的是防止_____。该育种方法的原理是_____。
(3)利用玉米诱导小麦单倍体技术已被许多学者应用于糯小麦育种工作中，育种过程如下图所示。

   
①玉米与小麦的F₁进行杂交，所得到的受精卵中玉米染色体全部丢失，原因可能是玉米与小麦为不同物种，存在_____。
②单倍体小麦体细胞中有_____个染色体组。用秋水仙素诱导可使染色体数目加倍，其作用原理是_____。该育种方式的优势是_____。
③进一步研究发现，玉米能够诱导单倍体的形成与玉米花粉中一种特异性磷脂酶基因（MTL）的突变有关。该突变体的产生是由于MTL基因中插入了4个碱基对，因此转录形成的mRNA提前出现了_____，导致磷脂酶肽链变短而失去功能。
(4)利用CRISPR/Cas9技术对普通小麦进行基因定点编辑，也可获得糯小麦。经鉴定该普通小麦含有Wx-A1和Wx-D1基因，天然缺失Wx-B1基因。CRISPR/Cas9系统主要包含向导RNA（gRNA）和核酸酶Cas9蛋白两个部分。应该根据基因_____的碱基序列设计gRNA靶位点。gRNA与靶基因结合，引导_____在靶基因相应位置剪切，从而对靶基因序列进行编辑。

   

【推荐3】为探究线粒体对低氧条件的响应机制，科研人员开展下列研究。
(1)有氧呼吸的第一阶段发生在细胞质基质，葡萄糖分解产生_____和[H]，两者进入线粒体发生第二、第三阶段反应，其中第三阶段发生在_____。
(2)研究表明，低氧条件下线粒体中的活性氧（ROS）上升，这是一种线粒体应激现象。为研究该机制，科研人员开展相关实验
①在低氧条件下，N蛋白被激活。据图可知，Ca²⁺和Na⁺跨膜运输的方式属于_____。若敲除N蛋白或者抑制N蛋白的活性，导致低氧状态下ROS水平会_____，则可证明N蛋白对于低氧引起ROS水平升高是必需的。

组别	复合物Ⅱ	复合物Ⅲ	Ca2+	Na+	ROS变化
1组	+	+	-	-	无
2组	+	-	-	+	无
3组	-	+	-	+	无
4组	+	+		-	无
5组	+	+	-	+	显著上升

注：+表示添加，-表示未添加
   
②研究表明，线粒体内膜上的复合物Ⅱ和复合物Ⅲ与ROS生成有关，N蛋白转运的某种离子可作为两种复合物的调控信号。为确定调控信号，研究人员利用成分与线粒体内膜类似的脂双层完成低氧实验，结果如上表。实验结果显示，复合物Ⅱ和复合物Ⅲ单独存在时，不受Na⁺调控；_____。

【推荐1】HSV1是单纯疱疹病毒的一种类型，HSV1病毒颗粒的组装主要由包装信号序列（a′）介导。科研人员从HSV1基因组中分离出a′，利用基因工程技术构建了质粒pHSL并进行了相关实验（如图1），从而为某些神经系统疾病的基因治疗提供依据。请回答问题：

(1)从HSV1中分离a′时，将人工合成的含特定序列的核酸探针与含有目的序列的酶解片段进行_____，根据阳性信号逐步筛选出尽可能短的a′所在片段。
(2)构建质粒pHSL时，过程②需要用限制酶_____处理质粒pHSV和质粒pSK，处理后的产物经鉴定、纯化后用_____酶连接。
(3)步骤③将质粒pHSL导入大肠杆菌是因为质粒pHSL中含有_____，能在大肠杆菌细胞内复制而获得大量拷贝。
(4)Vero细胞系是从非洲绿猴的肾脏上皮细胞中分离培养出来的。进行Vero细胞培养时，通常采用添加了_____等天然成分的基本培养基提供营养。
(5)tsK株是具有感染性的HSV1温度敏感株。在tsK株的辅助下，pHSL能组装成不含完整病毒基因组的颗粒（假病毒），获得含假病毒和tsK株的混合毒株。图2是Vero细胞连续传代过程中，混合毒株的滴度变化曲线及每代中假病毒所占的比例（柱形图）。据图分析，应选用_____代混合毒株用于后续神经细胞的接种实验，理由是_____。

(6)为验证假病毒能否感染体外培养的神经细胞并表达Laz基因，科研人员将混合毒株与大鼠神经细胞按一定比例在_____℃下混合培养48 h，用含_____（填物质名称）的检测液原位检测β半乳糖苷酶的活性，结果发现大约20%的细胞变蓝，说明_____。

【推荐2】腺病毒是可侵染人体内分泌腺的DNA病毒，具有一定的传染性，其E1基因控制合成的E1蛋白能启动基因组的复制。重组新冠病毒疫苗以5型腺病毒为载体，制备该疫苗的基本流程如图1所示。请回答下列问题：
   
注：新冠病毒表面抗原主要为S蛋白，由S基因控制合成。
(1)S蛋白基因表达载体构建过程中，要以S蛋白的RNA为模板，在_______________酶的作用下获取S蛋白基因；科研人员对腺病毒DNA进行人工改造，删除了E1基因，主要目的是_______________。
(2)图2、3中EcoRI、SmaI、BamHI和HindⅢ为限制酶，箭头所指位点为相应的酶切位点。科研人员欲用图3中载体构建S蛋白基因表达载体，应选择的限制酶是_______________以提高S蛋白基因和载体连接的正确率，其原因是_______________。
   
(3)在利用PCR技术扩增S基因时，应选择的引物为_______________。对含S蛋白基因的复制缺陷重组腺病毒进行扩大培养的操作是_______________。
(4)若在接种该种疫苗前机体曾感染过腺病毒，则疫苗效果会明显下降，原因是_______________。