【推荐1】为了提高菊花抗冻能力，研究者从其他生物中克隆出抗冻基因C（图1），拟将其与质粒（图2）重组，再借助农杆菌导入菊花中。回答下列问题：

(1)为使抗冻基因C在菊花细胞中高效表达，需要把目的基因片段插入表达载体的_________________之间。
(2)若想了解C基因是否整合到菊花染色体上，检测方法是采用_________________技术。
(3)若获得的转基因植株（抗冻基因C已经整合到菊花的基因组中）抗冻能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是__________________________。
(4)若要使目的基因在受体细胞中表达，需要通过质粒载体而不能直接将目的基因导入受体细胞，原因是____________,______________（答出两点即可）。
(5)借助农杆菌将重组质粒导入菊花细胞，在该过程中需添加酚类物质，目的是____________。抗冻基因C的遗传特性能在菊花体内维持和表达的关键是____________。
(6)科研工作者可以利用PCR技术获得更多的抗冻基因C，那么利用PCR技术获取目的基因的前提是______________。

【推荐2】PCR（多聚酶链式反应）技术是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术，下图表示PCR的反应过程，请据图分析回答下列问题：

（1）A过程高温使DNA变性解旋，对该过程的原理叙述正确的是(       )
a．该过程用到耐高温的解旋酶破坏氢键          b．该过程用到限制酶破坏磷酸二酯键
c．该过程高温使双链DNA解旋变为单链          d．该过程与人体细胞的过程完全相同
（2）C过程要用到的酶是耐高温的。这种酶在高温下仍保持活性，因此在PCR扩增时可以________加入（填一次性或多次）。PCR反应除提供耐高温的_______酶外，还需要满足的基本条件有：在一定的缓冲溶液中进行、以DNA______条链做模板、与模板链相结合的两种_______、四种_______为原料，通过控制温度使DNA复制在体外反复进行。
（3）如果把模板DNA的两条链用¹⁵N标记，游离的脱氧核苷酸不做标记，控制“95℃－55℃－72℃”温度循环3次，则在形成的子代DNA中含有¹⁵N标记的DNA占_________。

【推荐3】下图为培育转基因小鼠的部分过程示意图。请回答下列问题：

(1)若需在短时间内获得较多的外源基因，通常采用_______技术。
(2)图中的A细胞通常为_____细胞，将外源基因导入该细胞常用的方法是_________。
(3)仔鼠出生后可用其尾巴进行DNA检测，通过________方法，检测出携带外源基因的小鼠。至于外源基因是否合成相应的蛋白质，可从转基因小鼠中提取蛋白质，并用相应的抗体进行______杂交，若有杂交带出现，则表明小鼠体内的外源基因___________。
(4)在外源基因导入小鼠的A细胞时，外源基因可能随机地插入到该细胞的DNA中。这些细胞有的能发育成转基因小鼠，有的却死亡。请分析外源基因插入后导致有些A细胞死亡的最可能原因_______________________________________________。

【推荐1】某种荧光蛋白（GFP）在紫外光或蓝光激发下会发出绿色荧光，这一特性可用于检测细胞中目的基因的表达。某科研团队将某种病毒的外壳蛋白（L1）基因连接在GFP基因的5′末端，获得了L1-GFP融合基因（简称为甲）作目的基因，并将其插入质粒P0，构建了真核表达载体P1，其部分结构和酶切位点的示意图如下，图中E1~E4四种限制酶产生的黏性末端各不相同。回答下列问题：

（1）据图推断，该团队在将甲插入质粒P0时，使用了两种限制酶，这两种酶是_________。使用这两种酶进行酶切是为了保证_______________的完整性，启动子能与_______特异性结合驱动转录开始。
（2）将P1转入体外培养的牛皮肤细胞后，若在该细胞中观察到了绿色荧光，则说明L1基因在牛的皮肤细胞中完成了________和_________过程。
（3）为了获得含有甲的牛，该团队需要做的工作包括：将能够产生绿色荧光细胞的_____________移入牛的____________中、体外培养、胚胎移植等。
（4）为了检测甲是否存在于克隆牛的不同组织细胞中，某同学用PCR方法进行鉴定。在鉴定时应分别以该牛不同组织细胞中的_________（填“mRNA”“总RNA”或“核DNA”）作为PCR模板。

【推荐2】棉花受蚜虫侵染后出现植株矮小，减产等现象。为了获得抗蚜虫棉花新品种，研究人员将雪花莲凝集素基因（GNA）和尾穗苋凝集素基因（ACA）连接成融合基因GA与质粒（pBⅠ121）结合，然后导入棉花细胞。回答下列问题：

(1)载体（pBI121）能将融合基因GA送入受体细胞，应具备的特点是_____（写出两点）。
(2)为获得ACA基因，应用限制酶_____酶切。构建重组载体时，使用限制酶KpnI和XhoI分别切割融合基因和质粒（pBI121），其目的是_____。应将融合基因插入在启动子和终止子之间，启动子的功能是_____。
(3)使用PCR反应快速扩增融合基因，常在PCR扩增仪中自动完成，常采用_____来鉴定PCR的产物。将转基因棉花细胞利用_____技术培育成转基因棉花植株，在该过程中，愈伤组织形成后需要定期地将它们分成小块接种到新培养基上以保证其长期旺盛地生长，否则会停止生长甚至老化变黑死亡，原因是_____（写出一点即可）。

【推荐1】某质粒上有SalⅠ、Hind Ⅲ、BamHⅠ三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示，请回答下列问题。

（1）在构建重组质粒时，应选用_______________两种限制酶对__________进行切割，然后进行连接，以保证重组DNA序列的唯一性。
（2）为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，应在培养基中加入_____，理由是__________。
（3）将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用______________技术，即通过_________和______两个主要过程最终形成完整植株，此过程除营养物质外还必须向培养基中添加____。

【推荐2】Ⅱ型糖尿病病因复杂，多数是胰岛素拮抗引起机体对胰岛素的敏感性降低。胰岛素单克隆抗体可用于快速检测血清胰岛素的含量。请回答下列有关胰岛素单克隆抗体制备的问题：
(1)首先需要将人胰岛素注射到健康成熟小鼠体内，其目的是获取__________________细胞；再将该细胞与_________相融合，以制取杂交瘤细胞。
(2)细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有_________等两两融合的细胞。细胞融合过程体现了细胞膜具有_________的特性。
(3)为检验得到的杂交瘤细胞能否分泌胰岛素抗体，可用_________与从杂交瘤细胞培养液中提取的抗体杂交。在体外条件下，当培养的小鼠杂交瘤细胞达到一定密度时，需进行_________培养以得到更多数量的细胞。
(4)细胞融合技术的优点是_____________________________________________。

【推荐1】1965年中国科学家人工合成了具有生物活性的结晶牛胰岛素，摘取了人工合成蛋白质的桂冠。此后科学家又提出了利用基因工程改造大肠杆菌生产人胰岛素的两种方法：AB法是根据胰岛素A、B两条肽链的氨基酸序列人工合成两种 DNA片段，利用工程菌分别合成两条肽链后将其混合自然形成胰岛素；BCA法是利用胰岛B细胞中的mRNA得到胰岛素基因，导入工程菌获得胰岛素。这两种方法使用同一种质粒作为载体。回答下列问题。

(1)由于_________________________________，“AB”法中人工合成的两种DNA片段均有多种可能的序列。“BCA”法是利用人体________________中的mRNA，再由mRNA经 ______得到的胰岛素基因，______________（填“AB”、“BCA”或“AB和BCA”）法获取的目的基因中不含人胰岛素基因启动子。
(2)如图是利用基因工程生产人胰岛素过程中使用的质粒及目的基因的部分结构。为使目的基因与载体正确连接，在设计PCR引物时可添加限制酶 ______________的识别序列，PCR引物应该添加在识别序列的______（填“3′或5′）端。通过上述方法获得人的胰岛素基因后，需要通过PCR技术进行扩增，已知胰岛素基因左端①处的碱基序列为-CCTTTCAGCTCA-，则其中一种引物设计的序列是5′-__________________-3′。通过上述方法获得人的胰岛素基因后，需要通过PCR技术进行扩增，若计划用1个胰岛素基因作模板获得m（m大于2）个胰岛素基因，则消耗的引物总量是_____________个。
(3)PCR扩增的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定，下列叙述中正确的有 ______________。

A．PCR反应体系中需加入耐高温的DNA聚合酶，该酶主要在复性过程起作用

B．待测样品中DNA分子的大小和构象、凝胶的浓度等都会影响DNA在电泳中的迁移速率

C．进行电泳时，带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动

D．琼脂糖溶液中加入的核酸染料利于DNA在紫外灯下被检测

(4)β-半乳糖苷酶可以分解无色的X-gal产生蓝色物质使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。先用________处理大肠杆菌后，与重组质粒混合培养一段时间，将大肠杆菌接种到添加了______________的培养基上筛选出_________的菌落即为工程菌种。

【推荐2】拟南芥中的生长素运输蛋白（PIN1）对生长素的极性运输具有重要作用。为研究35S启动子（一种来自病毒的强启动子）能否引起下游基因的过量表达，研究人员将35S启动子与 PINI 基因转入拟南芥，观察PIN1过量表达对拟南芥的影响。回答下列问题：
(1)研究人员获取含 PINl 基因的mRNA 后，通过逆转录获得 DNA，再以DNA为模板进行 PCR扩增获取 PINI 基因，该过程需要的原料是_____。PCR循环时，首先需要将温度上升到90℃，目的是_____。
(2)PCR扩增PIN1 基因时，需要两种引物，据图 1分析，应选择引物_____。图1、2中的 PstⅠ、EcoRⅠ、XhoⅠ表示限制酶，为使获取的 PINl 基因与质粒正确连接，根据图1、2分析，应当选择的限制酶是_____。
             
(3)获取 PINI 基因后，需要将35S启动子与 PINI基因一起构建为基因表达载体，35S启动子的作用是_____。
(4)为检测目的基因是否导入拟南芥，在分子水平上，实验人员先从转基因拟南芥的 DNA中扩增出35S启动子和 PINl 基因，然后采用电泳来鉴定35S启动子，但不鉴定 PINl基因，其理由是_____。在个体水平上，还可以采取的检测方法是_____。

【推荐3】请回答下列有关基因工程及其应用的问题：
（1）多种限制酶和DNA连接酶，以及_________酶的发现，为DNA的切割、连接以及功能基因的获得创造了条件。
（2）基因工程的核心步骤是_________；重组Ti质粒载体结构中T-DNA的作用是_________________。
（3）科学家设法使烟草细胞形成微创伤，受伤部位细胞产生的乙酰丁香酮可吸引农杆菌向受伤部位集中，这时农杆菌携带某种目的基因进入烟草细胞。获得的转基因烟草细胞通过_________技术最终获得转基因烟草，检测烟草细胞是否成功导入该目的基因的方法是_________。
（4）利用_____________处理植物体细胞可得到原生质体，将目的基因导入原生质体的方法中，除题（3）所述方法外，还可采用_________。