【推荐1】请利用所学知识回答基因工程、细胞工程和生态工程方面的有关问题：
（1）利用PCR（聚合酶链式反应）技术扩增人的干扰素基因时，需提供________酶和引物等，合成引物的前提是________________________，引物与互补DNA链结合的温度一般是________℃。PCR反应体系中加入dNTP（三磷酸碱基脱氧核苷酸，结构与ATP类似）后，不再单独添加ATP等能源物质，请推测其原因是____________。
（2）如图为人体中干扰素基因的酶切位点示意图。从人体基因组中提取干扰素基因时，不能使用限制酶SmaⅠ的原因是_____________

（3）如图为某质粒的结构及限制酶的酶切位点，其中tsr为硫链丝菌素（一种抗生素）抗性基因。将某基因整合到质粒上，形成重组质粒，为保证重组质粒的成功表达，除复制原点、标记基因、目的基因外，该质粒还应具有_________结构。据图分析，需要使用__________（限制酶）切割质粒，将重组质粒导入链霉菌时，在培养基中添加_______________用来筛选目的菌株。

【推荐3】利用转基因的工程菌生产药用蛋白，近些年在我国制药行业中异军突起。图1是基因工程常用的一种质粒；图2是利用该质粒构建的一种基因表达载体。各限制酶质粒上分别只有一处识别序列，将质粒和重组质粒用相应的限制酶酶切后，得到的DNA片段长度如表中数据。请回答下列问题：

	质粒	重组质粒
BglⅡ	6．0kb	7．1kb
ClaⅠ	6．0kb	2．3kb， 4．8kb
PstⅠ	6．0kb	1．5kb， 5．6kb

(1)在基因工程中作为载体的质粒应具备的基本条件有___，而作为基因表达载体，除满足上述基本条件外，还需具有__。
(2)为了获得更多的目的基因，可用PCR扩增，PCR的原理是_____。PCR反应体系中加入dNTP后，这些物质既可以作为_____，也可以为反应提供____。
(3)PCR中通常会得到不同的DNA产物，常采用_____法鉴定，不同DNA片段因_____等不同，在电场中的迁移速率也不同，因而可以形成不同条带。
(4)已知质粒被切除的片段长度为0．5kb，则与质粒结合的目的基因长度为_______kb。质粒上ClaⅠ与PstⅠ区域之间的长度为2．4kb（如图1所示），结合图2分析，目的基因上ClaⅠ、PstⅠ两种限制酶的切割位点分别为______（在a、b两点中选填）。
(5)培养受体菌时，在培养基中应加入适量的_____，可以将导入重组质粒和普通质粒的受体菌都筛选出来。

【推荐1】研究者用T一DNA插入法构建水稻突变体库，并从中筛选穗粒数异常突变体。流程为分别用不同的限制酶处理突变体的所有DNA和野生型的所有DNA，处理后进行电泳，使长短不同的DNA片段分离。电泳后的DNA与DNA 分子探针（含放射性同位素标记的 T一DNA片段）进行杂交，得到如图所示放射性检测结果。（注：T—DNA上没有所示三种限制酶的酶切位点）。
   
(1)由于杂交结果中_______，表明T-DNA成功插入到水稻染色体基因组中。不同酶切结果，杂交带的位置不同，这是由于____不同。
(2)由实验结果判断突变体为T-DNA单个位点插入，依据是__________。

【推荐2】蓝细菌中的ictB蛋白能高效转运和浓缩CO₂从而提高细胞光合速率，我国科学家构建了叶片特异性启动子Cab（叶绿体捕光色素蛋白Cab基因启动子）驱动的蓝细菌ictB基因表达载体，并通过农杆菌转化法获得了转ictB基因水稻，大大提高了水稻的产量。在ictB基因载体的构建中，含Cab启动子和ictB基因的重组DNA分子和Ti质粒的酶切位点如下图所示。请回答下列问题：
   
(1)为使重组DNA分子定向插入T-DNA中，可在重组DNA分子两端添加限制酶识别序列，据图可知，M端添加的序列所对应的限制酶是__________，N端添加的序列所对应的限制酶是__________。经过酶切的重组DNA分子和Ti质粒进行连接时，可用__________酶。
(2)将农杆菌液浸泡过的水稻愈伤组织进行植物组织培养，培养基中需加入__________进行筛选，最终获得多个水稻株系。农杆菌转化法中的“转化”是指__________。
(3)对转基因水稻植株中的ictB蛋白表达量进行检测时，应选用的植物器官是__________，原因是__________。

【推荐3】棉铃虫是一种危害棉花的害虫。我国科学工作者发现一种生活在棉铃虫消化道内的苏云金芽孢杆菌能分泌一种毒蛋白使棉铃虫致死，而这种毒蛋白对人畜无害。通过基因工程方法，科学家采用花粉管通道法将毒蛋白基因转入棉花植株并成功表达，棉铃虫吃了这种转基因棉花的植株后就会死亡。花粉管通道法是指：利用植物花粉萌发时形成的花粉管通道将毒蛋白基因送入胚囊，进而导入不具备细胞壁的合子或早期胚体细胞，借助天然的种胚系统，形成含有目的基因的种胚。
(1)下列所示的黏性末端是由________种限制酶作用产生的。

(2)利用花粉管通道法将毒蛋白基因导入棉花细胞，此过程是基因操作的基本步骤中的第三步，即________________________。为减少获得目的基因的盲目性，在获得真核生物的目的基因时，应尽量采用___________________________________________的方法。
(3)该目的基因在导入受体细胞前需要与载体结合，目前经常使用的载体有________、________和_____________________________。
(4)检测该目的基因是否表达的方法是_______________________。

【推荐1】某实验室通过基因工程成功培育出抗虫植物，其培育过程大致如图所示，请据图分析回答下列问题：

(1)抗虫植物的培育过程中，目的基因是____________。用PCR扩增目的基因时，需要设计引物，引物设计的的依据是________________________
(2)目的基因获取之后，需要构建______________，启动子是______________识别和结合的部位，有了它才能驱动目的基因____________。
(3)图示将获取的目的基因导入植物细胞最常用的方法为______________法，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的______________上。目的基因是否成功导入植物细胞，可以用____________法进行检测。如果操作中将该基因导入线粒体DNA中，将来产生的配子中________(填“一定”或“不一定” )含有抗虫基因。

【推荐2】叶绿体基因工程是将外源基因导入叶绿体中的一项工程技术，烟草叶绿体基因工程在基础研究、遗传改良以及生物反应器研究等方面都发挥了极为重要的作用，表现出巨大的应用前景。请回答下列问题:
(1)叶绿体基因工程常将含有外源基因的质粒包裹在金粉上，通过轰击进入叶绿体中从而实现目的基因的导入，这种目的基因导入的方法称为________。叶绿体基因组分为基因区和基因间隔区，叶绿体中基因间隔区序列通常被作为插入位点，其目的是____________________。检测目的基因是否成功导入的方法是_______________________。
(2烟草对壮观霉素(又名奇霉素，一种抗生素)具有较强的敏感性，构建基因表达载体时，质粒上的状观霉素抗性基因可作为_______________，其作用是___________；用于筛选和培养的培养基中应加入____________。
(3)与细胞核基因工程相比，叶绿体基因工程能防止细胞质内的蛋白酶对目标蛋白的消化作用。其原因是__________________________，并且由于_____________________________，不会造成基因污染。

【推荐3】党的二十大对保障粮食安全提出了更高要求，马铃薯块茎富含淀粉，而且其中的维生素是所有粮食中最全的，因此我国科学家对马铃薯这种重要粮食作物开展了大量研究。
(1)马铃薯因为自交不亲和，所以只能进行无性繁殖，我国科学家用基因编辑技术定点敲除二倍体马铃薯的自交不亲和基因获得了二倍体自交系的马铃薯。
①无性繁殖的优点为____________。
②为敲除自交不亲和基因，研究者采用了CRISPR/Cas9基因编辑技术，如图所示：

该技术利用一段与目标DNA靶序列互补的向导RNA引导Cas9蛋白对特异靶向DNA进行识别和定点敲除自交不亲和基因，其中的Cas9蛋白相当于____________酶。若要将自交不亲和基因从目标DNA上切除下来，需要设计____________种不同的向导RNA。
③检测基因编辑得到的植株是否具有自交亲和性状，最简便的方法是____________。
(2)MAP30蛋白是一种能使Ⅰ型核酸核糖体失活的蛋白质，实验表明MAP30蛋白具有抗pvx病毒功能，为培育高效表达该基因的马铃薯新品种，科研团队利用农杆菌转化法将MAP30基因导入马铃薯细胞内，如图所示：

①PCR技术扩增MAP30基因的原理为____________。在PCR反应体系中一般需要加入Mg²⁺，原因是____________。每次循环可以分为____________三步。
②选择Ti质粒作载体的原因是____________，构建基因表达载体时为避免反向拼接应选择____________识别切割质粒。
③从分子水平上，检测转基因马铃薯是否具有抗病毒的特性，可用____________的方法。

【推荐1】启动子可分为组成型启动子和诱导型启动子。³⁵S启动子是组成型启动子，能够持续、高效地启动目的基因在植物各种组织中的表达，但往往也会阻碍植物的生长发育；Rd29A启动子是一种逆境诱导型启动子。沙冬青脱水素基因（AmDHN基因）能使植株具有较强的抗旱作用。科研人员构建Rd29A启动子驱动AmDHN基因表达的载体，过程如图。再利用农杆菌转化法转化“敖汉苜蓿”耐旱新品种，以期在干旱地区发展苜蓿产业。
   
回答下列问题：
(1)科研人员扩增Rd29A启动子所设计的引物如下，根据引物的碱基序列及限制酶的识别序列分析，构建载体2时选用的限制酶是____________。为了提高构建载体3的成功率，选用____________酶切割载体1、2。

   
(2)载体5需先转入__________后再转化苜蓿，转化后应在培养基中添加_________，以筛选转化成功的愈伤组织。
(3)为检测转基因苜蓿中AmDHN基因的转录水平，挑选10株转基因植株，利用自来水和20%PEG（模拟干旱条件）处理8h，提取RNA通过RT-PCR检测AmDHN基因和MtActin基因（一种骨架蛋白基因）的表达水平，其结果如下图：

   
①选择MtActin基因转录水平作为参照的依据是MtActin基因在各细胞中表达__________。
②自来水处理和20%PEG条件下的AmDHN基因表达水平的差异说明：__________。

【推荐2】某团队通过构建融合表达蛋白M和tag标签的质粒，利用大肠杆菌高效表达真菌基因m产生蛋白M。请结合实验流程回答下列问题：

(1)目的基因的扩增：提取真菌细胞RNA，经____获得足量基因m片段。为了获得含有融合tag标签的蛋白M，设计引物P2扩增基因m时，不能包含____的相应序列，否则将导致蛋白M上不含tag标签。为方便基因m插入质粒的相应位置，需在引物的5′端分别引入限制酶____的酶切位点。
(2)重组质粒的构建：将限制酶处理过的基因m与质粒A（图示质粒A上未标记的有：____）混合，用DNA连接酶处理一段时间，用____电泳，切下相应位置凝胶处理得到____。
(3)将目的基因导入大肠杆菌：将重组质粒A-m与处理过的大肠杆菌混合，将菌液通过____接种到含____的培养基上筛选。
(4)菌种的纯化和鉴定：一般通过____实验检测酵母蛋白中含tag标签。若检测到tag标签，说明____。
(5)融合蛋白的表达和分离：将纯化的菌种接种到____（填“固体”、“半固体”或“液体”）培养基中扩大培养，借助tag标签进行蛋白M的分离纯化。能将tag标签和蛋白M进行分离的酶属于一种____酶。

【推荐3】下图是某转基因植物的培育过程，将抗菜青虫的Bt毒蛋白基因转移到油菜中，培育出转基因抗虫的油菜品种。这一品种在生长过程中能产生特异的杀虫蛋白，对菜青虫有显著抗性，可大大减轻菜青虫对油菜的危害，提高油菜产量，并能减少农药使用，保护生态环境。 

(1)将Bt毒蛋白基因从苏云金芽孢杆菌DNA中剪切出来的“剪刀”是__________，它的作用部位是DNA分子上特定两个核苷酸之间的__________;成功构建的基因表达载体又叫__________，其结构除了Bt毒蛋白基因外，还必须有启动子、终止子以及__________等。
(2)将目的基因导入受体细胞的方法有很多种，题中所用的是__________;若培育转基因动物，可用__________。
(3)转基因抗虫油菜的培育是否成功，最简便的检测方法是__________。