【推荐2】小麦是我国重要的粮食作物，但蚜虫经常给小麦生产带来严重威胁，研究人员将掌叶半夏中含有的凝集素基因PPA转入到普通小麦品种中，获得抗蚜效果较好的转基因小麦。
（1）为探究外源PPA基因在转基因小麦细胞中的存在位置和遗传方式，以纯合的转PPA基因小麦和野生型小麦进行正反交，根据_______序列设计引物，通过PCR鉴定得到的F₁代。若正交和反交后代均能扩增出目的基因条带，则证明PPA基因在转基因小麦中存在细胞核遗传。继续对F₂代进行PCR鉴定，若亲代中母本为转基因植株时，F₂代扩增结果为_______；而亲代中父本为转基因植株时，F₂代扩增结果为_______，则证明该基因同时存在细胞质遗传。
（2）实验结果表明，细胞核和细胞质中都含有PPA基因。细胞核中的PPA基因用R表示，未导入PPA基因用r表示；细胞质中含PPA基因用S表示，未导入PPA基因用N表示（见下图）。

以纯合的转基因植株做父本【基因型用S(RR)表示】，野生型植株做母本进行杂交实验，请写出F₁、F₂的基因型_______。
（3）回交是指子代与亲本之一进行杂交的过程。通过多代的连续回交，可以逐步将转基因小麦的细胞核，置换成野生型小麦不携带PPA基因的细胞核，从而仅保持细胞质中的PPA基因，以防止该基因通过花粉扩散到其他近亲作物中。
请写出利用纯合转基因植株和野生型植株为亲本，培育仅含细胞质遗传的转基因抗虫小麦的流程_______。（用文字或者图示作答均可）

【推荐3】为筛选出能与SARS病毒的S蛋白特异性结合的受体蛋白，研究人员在S蛋白末端添加TAP标签（能特异性地与人和哺乳动物体内IgG类抗体结合），再利用该标签在病毒敏感细胞（如非洲绿猴肾细胞）中快速纯化出S蛋白及其相互作用的蛋白质，具体过程如下图。其中XhoI、SmaI、EcoRI、BamHI表示限制酶，PCMV、T7表示启动子，Kozak序列是翻译起始因子结合位点的编码序列，Amp^r表示氨苄青霉素抗性基因，or表示复制原点。回答下列问题：
   
(1)为成功构建重组质粒pcDNA3.1—S—TAP，在利用PCR扩增S基因时，应在S基因的5’端引入______序列，3’端删除______的编码序列。为了防止PCR扩增发生突变，常选择高保真的PyrobestDNA聚合酶，该酶具有TaqDNA聚合酶所不具备的3’→5’核酸外切酶活性，PyrobestDNA聚合酶能防止突变的原因是______．
(2)将S基因和TAP序列的扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳鉴定，结果显示两个片段均得到扩增且与预期值大小相一致。再经______证实正确后，将这两个片段经______酶连接定向克隆入质粒pcDNA3.1。
(3)重组质粒pcDNA3.1—S—TAP转染细胞前，需将vero细胞置于37℃、______（填气体条件）下培养18-24h进行传代。将传代的细胞与重组质粒pcDNA3.1—S—TAP以适宜比例混合，在转染试剂的作用下转染细胞（实验组），为保证实验的科学性，还需设置对照实验，具体做法为______。将转染24h的细胞置于载玻片，洗涤、固定后滴加正常人血清稀释液和荧光素标记的羊抗人IgG抗体稀释液，荧光显微镜下观察，若______，则说明S—TAP融合蛋白在vero细胞中得以表达。
(4)通过上述检测发现，S-TAP融合蛋白表达量较低，其原因不可能是______。
A.重组质粒pcDNA3.1-S—TAP在vero细胞中大量复制
B．S-TAP融合基因在vero细胞中转录出的mRNA量较少
C．S基因与病毒宿主细胞的基因有不同的密码子偏爱，翻译相应mRNA的tRNA数量不足为增强融合蛋白的表达
研究人员在质粒转染前预先用重组痘苗病毒vTF7-3感染vero细胞，表达出的vTF7—3DNA聚合酶和T7RNA聚合酶（能选择性高效激活T7启动子）留存在细胞质基质中发挥作用。请据此解释重组质粒pcDNA3.1-S-TAP和重组痘苗病毒vTF7-3共转染细胞能提高融合蛋白表达效率的原因______。

【推荐1】杨树是重要的经济树种，但其害虫很多，利用基因工程培育抗虫杨树是害虫防治的有效手段。胰蛋白酶抑制剂能干扰昆虫的代谢，引起昆虫死亡，但对人体无害。科学家将马铃薯胰蛋白酶抑制剂基因（Pin-Ⅱ）通过农杆菌导入杨树细胞，培育成了抗虫杨树。图1表示含目的基因的DNA分子片段，图2表示质粒，其中Apr表示氨苄青霉素抗性基因，Ner表示新霉素抗性基因，复制原点是质粒DNA复制的起点，使其能在受体细胞中存在和遗传。箭头表示识别序列完全不同的4种限制酶的酶切位点。

（1）利用农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA，就可以使目的基因插入到杨树细胞的__________上，使目的基因的遗传特性得以维持稳定和表达。
（2）为使目的基因与质粒高效重组，最好选用__________（限制酶）作用于含目的基因的DNA和质粒，然后在________酶的作用下形成重组质粒。
（3）成功导入重组质粒的农杆菌在分别含有氨苄青霉素和新霉素的培养基上生长状况是_________。
（4）用转基因杨树叶片喂养某种杨树害虫，发现害虫死亡率显著增加。试从分子水平写出转基因杨树和非转基因杨树的叶片细胞的不同点________________（至少答出两条）。

【推荐3】在培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因（kan）常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。下图为获得抗虫棉的技术流程。

请据图回答：
（1）A过程需要的酶有_______________________________________________。
（2）B过程及其结果体现了质粒作为运载体必须具备的两个条件是_________________。
（3）C过程的培养基除含有必要营养物质、琼脂和激素外，还必须加入_____________。
（4）如果利用DNA分子杂交原理对再生植株进行检测，D过程应该用____________作为探针。
（5）科学家发现转基因植株的卡那霉素抗性基因的传递符合孟德尔遗传规律。
①将转基因植株与___________________杂交，其后代中抗卡那霉素型与卡那霉素敏感型的数量比为1：1。
②若该转基因植株自交，则其后代中抗卡那霉素型与卡那霉素敏感型的数量比为________。
③若将该转基因植株的花药在卡那霉素培养基上作离体培养，则获得的再生植株群体中抗卡那霉素型植株占____________%。

【推荐2】[生物——选修3现代生物科技专题]
科学家从某无限增殖细胞的细胞质中分离出无限增殖调控基因(prG)，该基因能激发细胞分裂，这为单克隆抗体的制备提供了新思想。某国家重点实验室准备利用基因工程生产单克隆抗体，请回答下列问题：
（1）该实验室已获得无限增殖调控基因(prG)。在体外，可采用_______技术大量扩增该目的基因，该技术的基本反应过程：目的基因(DNA)受热变性后解链变成单链，________与单链相应互补序列结合，然后在Taq酶的作用下进行延伸，如此重复多次。该技术的前提是要有________，以便根据这一序列合成引物。
（2）该基因工程操作的核心是_______，其目的是使________。本研究中，受体细胞为_______，欲将目的基因转入受体细胞，常采用_________法。
（3）也有人提出用细胞核移植技术构建重组细胞来生产单克隆抗体，试用相关的图示及文字表示该过程。
________。

【推荐1】菊花是重要观赏花卉，为增加菊花花色类型，某科研小组从植物A的基因文库中选出花色基因C（图1），并将其与质粒（图2）重组，再借助农杆菌导入菊花中。请回答下列问题：

（1）利用PCR技术可扩增花色基因C，扩增前需根据花色基因C的一段核苷酸序列合成_____________，便于扩增时热稳定DNA聚合酶延伸DNA子链。
（2）构建基因表达载体时，需用EcoRⅠ分别处理C基因和质粒而不用BamHⅠ的理由是_____________；当C基因和质粒连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是_____________。
（3）用含C基因的农杆菌侵染菊花愈伤组织时，需在培养基中添加酚类物质，其目的是_____________；C基因的遗传特性能在菊花体内维持和表达的关键是_____________；为筛选出成功转化的菊花细胞，应在筛选培养基中添加_____________。
（4）经检测部分菊花植株的基因组中已有C基因，但没有发现基因C对应花色，为分析原因，可从分子水平上采用_____________技术检测C基因是否转录。

【推荐2】为研究肝癌致病机理，科研工作者利用下图所示的差异杂交法和基因工程获取相关癌基因以作进一步研究。请据图回答问题：

（1）图 1 中，A 过程需要用___________ 酶，D 过程需要回收___________ （填“未杂交”或“杂交分子”）的含 ³²P 的 cDNA 单链，继而通过人工合成，获得___________， 并用其构建基因文库。
（2）分子生物学检测是基因工程成功与否的重要一环，其中检测目的基因是否发挥功能作用的第一 步是检测_________________________ ，若检测目的基因是否成功表达，则需用_______________ 方 法，该方法的原理是_____________________。
（3）上图 2 为改造后的目的基因。图 3 为两种质粒，其中 Ampr 为氨苄青霉素抗性基因，Tetr 为四环素抗性基因，lacZ 为蓝色显色基因，其表达产物可使底物 X-Gal 呈蓝色。EcoRⅠ（0.7Kb）、NotⅠ（1.2Kb）等为限制酶及其切割位点与复制原点之间的距离（1kb=1000 个碱基对）。
①图 3 中能作为载体的最理想的质粒是___________（填“X”或“Y”），用选定的质粒与图 2 的目的基因构建基因表达载体时，应选用的限制酶是___________。
②若用 EcoRⅠ完全酶切上述①中获得的重组质粒，并进行电泳观察，可出现四种长度不同的片段，其长度分别为 1.7kb、5.3kb、______________________。

【推荐3】Cre-loxP系统能够实现特定基因的敲除，其技术过程如图1所示。科学家把几种荧光蛋白基因和Cre酶能识别并切割的序列（loxP1和loxP2）串在一起，构建如图2所示的表达载体T，在Cre酶的帮助下，一部分荧光蛋白基因会被随机地“剪掉”，而剩下的部分得以表达，这样就可以随机呈现不同的颜色。这种利用荧光蛋白“点亮”神经元的大脑成像技术被称为“脑彩虹”，能帮助科学家了解大脑。

(1)loxP序列的方向是由图1中的区域____（填序号）决定的。经Cre酶敲除后获得的片段1和2共有____个游离的磷酸基团。
(2)构建表达载体T时应先用____分别切割目的基因和载体，再用____酶连接形成重组DNA。用PCR扩增表达载体T，3轮扩增共需要消耗引物____个。
(3)表达载体T构建成功后常用____法将其导入小鼠的____中，经____得到细胞中含有一个表达载体T的转基因小鼠A（体内不含Cre酶）。该小鼠A的脑组织细胞和其他组织细胞的色彩分别是____和____。
(4)已知两个1oxP1之间或两个loxP2之间的基因，最多会被 Cre酶敲除一次。研究者将 Cre酶基因与病毒基因重组构建Cre病毒，然后将Cre病毒注入小鼠A体内，出现“脑彩虹”现象，小鼠A的一个脑细胞的色彩为____。