真核基因的转录激活因子是两种相对独立的蛋白质BD和AD组成的复合物,BD负责识别基因上游特定的DNA序列并与之结合(不同基因的BD不同),AD负责活化转录过程,两者单独作用时都不能启动转录。在科学研究中,往往利用该原理判断两种蛋白质能否相互作用。具体过程为:让BD基因与诱饵蛋白基因融合,让AD基因与待测蛋白基因融合,并让它们在酵母菌中表达出相应的融合蛋白,若诱饵蛋白与待测蛋白可以相互作用,则AD和BD就能充分接近形成复合物,并启动标记基因的表达。具体过程如图1:
(1)构建重组质粒甲时使用双酶切可以有效防止目的基因与质粒________ ;用EcoR I和Sal I双酶切后,检测样品1、2中是否含有重组质粒乙,电泳结果为图2,其中_______ 号样品为成功插入AD-待测蛋白基因的重组质粒。
(2)质粒导入前,原核细胞作为受体细胞一般先用Ca2+处理,与此类似,Y2H酵母菌母液需先用醋酸锂(LiAc)处理,推测其目的是________ 。与原核细胞相比,由于酵母菌具有_______ 能对蛋白质进行加工,故蛋白质的空间构象不受影响,这也是选择其作为受体细胞的原因之一。
(3)野生型Y2H酵母菌缺乏His3(组氨酸合成基因)和Mel1(半乳糖苷酶合成基因。已知在培养基中含有X-gal的情况下,半乳糖苷酶的分泌可使酵母菌落呈蓝色,否则呈白色)。将这两种基因作为标记基因导入Y2H酵母菌将其制备成受体菌,来判断诱饵蛋白与待测蛋白能否相互作用。重组质粒甲和乙导入受体菌后,将受体菌接种到______ 培养基中培养。若观察到受体菌菌落能存活且呈现______ 色,则说明诱饵蛋白和待测蛋白能相互作用。
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(1)构建重组质粒甲时使用双酶切可以有效防止目的基因与质粒
(2)质粒导入前,原核细胞作为受体细胞一般先用Ca2+处理,与此类似,Y2H酵母菌母液需先用醋酸锂(LiAc)处理,推测其目的是
(3)野生型Y2H酵母菌缺乏His3(组氨酸合成基因)和Mel1(半乳糖苷酶合成基因。已知在培养基中含有X-gal的情况下,半乳糖苷酶的分泌可使酵母菌落呈蓝色,否则呈白色)。将这两种基因作为标记基因导入Y2H酵母菌将其制备成受体菌,来判断诱饵蛋白与待测蛋白能否相互作用。重组质粒甲和乙导入受体菌后,将受体菌接种到
更新时间:2023-07-01 17:40:26
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【推荐1】大肠杆菌是兼性厌氧的原核生物,其生命活动的主要能源物质是葡萄糖。大肠杆菌细胞内的β半乳糖苷酶能将乳糖水解为半乳糖和葡萄糖。请分析回答:
(1)大肠杆菌细胞内仅有的细胞器是_______ 。
(2)依据大肠杆菌细胞结构特点分析:大肠杆菌有氧呼吸的第_________ 阶段在细胞质基质中完成,第三阶段[H]与02结合生成水同时释放ATP的过程是在__________ (填写“线粒体内膜”或“细胞膜”)上完成的。
(3)在培养大肠杆菌时,培养基中若没有乳糖,编码β半乳糖苷酶的lac基因不表达;只有在培养基中有乳糖时,该基因才能表达。科学家用下图所示的假说来解释该现象。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2018/2/9/1878730681622528/1886207806357504/STEM/3b5d9bac644c41aaac45e9ed9a315ec2.png?resizew=539)
①根据上述假说,在无乳糖时,阻遏蛋白与操纵基因结合,阻碍了_______ 酶的移动,干扰了lac基因表达中的_________ 过程,导致β半乳糖苷酶不能合成。
②科学家筛选出3类大肠杆菌突变体,进行了下表所示实验,为证实上述假说提供了重要的证据。
第1类突变体最可能是______________ 基因突变体;第2类突变体最可能是________ 基因突变体;第3类突变体是阻遏基因突变体,与突变前相比,突变后阻遏蛋白与操纵基因的结合力_________ ,阻遏蛋白与乳糖的结合力_________ 。
③阻遏基因的突变结果说明,基因突变有___________________ 性。
(1)大肠杆菌细胞内仅有的细胞器是
(2)依据大肠杆菌细胞结构特点分析:大肠杆菌有氧呼吸的第
(3)在培养大肠杆菌时,培养基中若没有乳糖,编码β半乳糖苷酶的lac基因不表达;只有在培养基中有乳糖时,该基因才能表达。科学家用下图所示的假说来解释该现象。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2018/2/9/1878730681622528/1886207806357504/STEM/3b5d9bac644c41aaac45e9ed9a315ec2.png?resizew=539)
①根据上述假说,在无乳糖时,阻遏蛋白与操纵基因结合,阻碍了
②科学家筛选出3类大肠杆菌突变体,进行了下表所示实验,为证实上述假说提供了重要的证据。
突变体种类 | 突变体性状 | 实验操作 | 实验结果 |
第1类 | 在培养基中没有乳糖时也会合成β半乳糖苷酶 | 保留自身DNA的同时导入野生型大肠杆菌的部分DNA | 第1类突变体性状恢复野生型 |
第2类 | 第2类突变体性状不变 | ||
第3类 | 无论培养基中有没有乳糖都不能合成β半乳糖苷酶 | 第3类突变体性状不变 |
③阻遏基因的突变结果说明,基因突变有
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【推荐2】肺炎支原体(MP)是一种无细胞壁的原核生物,其粘附于宿主细胞膜表面后可模仿宿主细胞膜结构,逃逸机体的免疫应答,引起慢性感染和无症状携带。下图为支原体的结构示意图,请回答下列问题:
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2021/11/18/2853960990187520/2856699181654016/STEM/60cc5d41d30b4498b1afa96a2f570ca9.png?resizew=220)
(1)支原体中含有RNA的结构有________ (填序号),②处糖蛋白很少,从细胞结构的角度分析,其原因是_________________________________ 。
(2)广谱青霉素可抑制细菌的增殖,但支原体对其并不敏感,推测青霉素对细菌的作用位点为________ 。作用于核糖体小亚基的四环素类抗生素可抑制支原体和细菌的增殖,却不会抑制人体细胞的增殖,原因是_______________________ 。
(3)MP与新冠病毒均能导致机体患肺炎,二者结构上最大的差别是____________ 。有学说认为, MP感染后,由________ 产生的抗体也会引发脑、肝、肾等脏器组织的损伤,其理由是________________________ 。机体抗体基因表达过程与支原体中基因表达过程的不同之处在于_________________ 。
(4)临床上可采用咽拭子快速培养法、咽拭子荧光-PCR (FQ-PCR)法和血清MP被动凝集( MP-Ab)法进行支原体感染监测。下表为某院收集的1 000余例呼吸道感染患儿的咽拭子及血清样本采用以上三种方法进行检测的结果。
MP-Ab法需要抽取静脉血而不能使用咽拭子,原因是_______________ 。三种方法中,灵敏度最高的方法是____________ ,但该方法通常不用于治疗效果的评价,其原因可能是____________________________________ 。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2021/11/18/2853960990187520/2856699181654016/STEM/60cc5d41d30b4498b1afa96a2f570ca9.png?resizew=220)
(1)支原体中含有RNA的结构有
(2)广谱青霉素可抑制细菌的增殖,但支原体对其并不敏感,推测青霉素对细菌的作用位点为
(3)MP与新冠病毒均能导致机体患肺炎,二者结构上最大的差别是
(4)临床上可采用咽拭子快速培养法、咽拭子荧光-PCR (FQ-PCR)法和血清MP被动凝集( MP-Ab)法进行支原体感染监测。下表为某院收集的1 000余例呼吸道感染患儿的咽拭子及血清样本采用以上三种方法进行检测的结果。
检测方法 | 例数 | 阳性 | 阴性 | 阳性率 |
快速培养法 | 114 | 58 | 56 | 50.9% |
FQ-PCR法 | 114 | 107 | 7 | 93.9% |
MP-Ab法 | 114 | 98 | 16 | 86.0% |
MP-Ab法需要抽取静脉血而不能使用咽拭子,原因是
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【推荐3】葛仙米是一种具有较大经济价值的食用蓝藻,某科研小组在一定浓度CO2不同磷浓度下(0.088mmol/L、0.175mmol/L、0.350mmol/L)培养葛仙米,研究了磷对葛仙米相对生长速率和色素含量等的影响,结果如下:
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2022/1/21/2899363181297664/2907780974616576/STEM/773b28a1-8d8b-45af-bef4-123006305894.png?resizew=469)
(1)与菠菜叶肉细胞相比,葛仙米在光合作用结构上的不同点是______________ 。
(2)由图1可知,在一定浓度CO2不同磷浓度下,葛仙米相对生长速率的变化趋势是______________ 。
(3)磷元素对光合作用的光反应的影响有______________ (答1点即可),暗反应对光反应的影响是____________________________ 。
(4)由图2可知,在大气CO2浓度下随磷浓度增加,叶绿素a含量减少,推测可能的原因是磷抑制了叶绿素a合成酶的活性,某研究小组遂将含合成叶绿素a所需原料的缓冲溶液均分为若干组,分别加入______________ 磷溶液和等量叶绿素a合成酶,于适宜条件下反应一段时间,检测叶绿素a生成量,若____________________________ 则推断磷可抑制叶绿素a合成酶的活性。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2022/1/21/2899363181297664/2907780974616576/STEM/773b28a1-8d8b-45af-bef4-123006305894.png?resizew=469)
(1)与菠菜叶肉细胞相比,葛仙米在光合作用结构上的不同点是
(2)由图1可知,在一定浓度CO2不同磷浓度下,葛仙米相对生长速率的变化趋势是
(3)磷元素对光合作用的光反应的影响有
(4)由图2可知,在大气CO2浓度下随磷浓度增加,叶绿素a含量减少,推测可能的原因是磷抑制了叶绿素a合成酶的活性,某研究小组遂将含合成叶绿素a所需原料的缓冲溶液均分为若干组,分别加入
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(0.4)
【推荐1】表皮生长因子受体(EGFR)是原癌基因表达的产物。EGFR 由胞外区、跨膜区、胞内区三部分组成, EGFR与其配体结合后能引起一系列基因活化,导致肿瘤细胞增殖。DNEGFR 基因是EGFR基因缺失了胞内区的突变基因,科研人员研究了DNEGFR基因表达和定位情况,流程如下图, 请回答:
(1)从人结肠癌组织中提取总RNA,经_________ 过程合成cDNA。根据人EGFR 前体cDNA的序列设计合成引物,扩增得到 DNEGFRcDNA,其表达产物因缺失胞内区而没有信号转导功能,但其能够与_________ 竞争结合配体,从而达到抑制肿瘤细胞增殖的作用。
(2)RT-PCR 过程所用引物如下,据上图可知,构建重组质粒时使用的两种限制酶是_________ 。研究人员将DNEGFR 和y融合在一起的目的是_________ 。
(3)本实验将EGFP 序列融合在 DNEGFR序列的下游而不是上游,原因是若将 EGFP 序列放在上游,______________ 。
①DNEGFR基因表达的前体蛋白的信号肽段不能发挥定位作用
②会影响配体与胞外区的结合
③会影响 EGFP 基因的表达
④会影响质粒的复制
(4)向感受态细菌悬浮液中加入重组质粒混匀。扩大培养后取菌液涂布于卡那霉素筛选LB平板上,37℃正向放置0.5h,正向放置0.5h的目的是_________ ,然后倒置平皿37℃培养12~16h。挑选菌落分别扩增、鉴定,待鉴定正确后大量提取质粒。
(5)将重组质粒pEGFP-N1-DNEGFR包裹到主要由_________ 构成的脂质体内,与动物细胞发生融合,重组质粒最终发生转化。72h后再利用光谱激光扫描共聚焦显微镜观测结果见下图A,检测表明融合蛋白成功锚定于_________ ,细胞质存在少量荧光的原因可能是_________ 。为了让结果更加严谨,设置B、C两组对照,推测 B组的处理方式是_________ 。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/editorImg/2023/9/11/216e0ab8-4ec5-4991-87c8-596e5fffb439.png?resizew=772)
(1)从人结肠癌组织中提取总RNA,经
(2)RT-PCR 过程所用引物如下,据上图可知,构建重组质粒时使用的两种限制酶是
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/editorImg/2023/9/11/4e28a01b-a69b-4249-9310-ff7d6fc53659.png?resizew=613)
(3)本实验将EGFP 序列融合在 DNEGFR序列的下游而不是上游,原因是若将 EGFP 序列放在上游,
①DNEGFR基因表达的前体蛋白的信号肽段不能发挥定位作用
②会影响配体与胞外区的结合
③会影响 EGFP 基因的表达
④会影响质粒的复制
(4)向感受态细菌悬浮液中加入重组质粒混匀。扩大培养后取菌液涂布于卡那霉素筛选LB平板上,37℃正向放置0.5h,正向放置0.5h的目的是
(5)将重组质粒pEGFP-N1-DNEGFR包裹到主要由
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【推荐2】请回答有关下图的问题。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2015/6/3/1567051989377024/1567051992489984/STEM/605d8c5fa5c24a68b22da32fa8e79342.png?resizew=420)
(1)图甲中①~⑤所示的生物工程为________ 。该工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础,通过________ 修饰或基因合成,对现有________ 进行改造,或制造出一种新的蛋白质,以满足人类的生产和生活的需求。
(2)图甲中序号④所示过程叫做________ ,该过程遵循的碱基互补配对原则不同于翻译过程的是________ (请将模板链上的碱基写在前)。
(3)如图乙,一个基因表达载体的组成,除了目的基因外,在基因尾端还必须有[2]________ ;图中[3]________ 的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2015/6/3/1567051989377024/1567051992489984/STEM/9dd3e97892a045e09e137982ae753ccd.png?resizew=128)
(4)若欲通过乳腺生物反应器生产预期蛋白质,则构建基因表达载体时,图乙中序号[1]代表的是______ ;且在图甲中⑨过程之前,要对精子进行筛选,保留含性染色体______ 的精子。
(5)为获得较多的受精卵进行研究,图甲中⑥过程一般用激素对供体做________ 处理;为提高培育成功率,进行⑩过程之前,要对________ 动物做________ 处理。
(6)若图甲中的卵母细胞来自从屠宰场收集的卵巢,则其在⑧之前需进行体外培养到________ 期方能受精。
(7)用________ 技术处理发育到________ 期或囊胚期的早期胚胎,可获得同卵双胎或多胎。若是对囊胚进行处理,要注意将________ 均等分割。
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(1)图甲中①~⑤所示的生物工程为
(2)图甲中序号④所示过程叫做
(3)如图乙,一个基因表达载体的组成,除了目的基因外,在基因尾端还必须有[2]
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2015/6/3/1567051989377024/1567051992489984/STEM/9dd3e97892a045e09e137982ae753ccd.png?resizew=128)
(4)若欲通过乳腺生物反应器生产预期蛋白质,则构建基因表达载体时,图乙中序号[1]代表的是
(5)为获得较多的受精卵进行研究,图甲中⑥过程一般用激素对供体做
(6)若图甲中的卵母细胞来自从屠宰场收集的卵巢,则其在⑧之前需进行体外培养到
(7)用
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(0.4)
解题方法
【推荐3】图为“乙肝基因工程疫苗”生产过程图解,质粒上箭头所指部位为相应的限制酶的切割位点。质粒lacZ基因编码产生的酶可以分解培养基中的X-gal,产生蓝色物质,使菌落呈现蓝色,否则菌落为白色。请回答下列问题:_________ 连接形成重组DNA分子;若用病毒作为载体将目的基因送入上图受体细胞,应选择_________ (填“动物病毒”、“植物病毒”或“噬菌体”)。
(2)为了防止目的基因和质粒的自身环化,选用限制酶的最佳方案是_________ 。
(3)过程②处理大肠杆菌后,大肠杆菌处于_________ 的生理状态。
(4)为了筛选含目的基因表达载体的大肠杆菌,可在培养大肠杆菌的通用培养基中额外加入_________ ,培养一段时间后挑选_________ (填“蓝色”或“白色”)的菌落进一步培养,从而获得大量目的菌。
(5)目的基因导入受体细胞后,常用_________ 技术检测目的基因是否翻译出乙肝病毒外壳。
(2)为了防止目的基因和质粒的自身环化,选用限制酶的最佳方案是
(3)过程②处理大肠杆菌后,大肠杆菌处于
(4)为了筛选含目的基因表达载体的大肠杆菌,可在培养大肠杆菌的通用培养基中额外加入
(5)目的基因导入受体细胞后,常用
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(0.4)
名校
【推荐1】为培育矮秆性状的水稻,科研人员进行了下列研究。
(1)科研人员构建含T—DNA的重组质粒,在T—DNA区段中含有已知序列的潮霉素抗性基因。将野生型水稻W的愈伤组织浸入含有上述重组质粒的____________ 菌液中,20min后转入水稻愈伤组织培养基培养,3d后转入含________________ 的培养基中筛选抗性愈伤组织。
(2)将抗性愈伤组织________________ 形成水稻幼苗,提取叶片细胞的总DNA,通过____________ 技术对转基因水稻进行分子水平检测,检测阳性的移栽到大田,得到T0代转基因水稻。
(3)以_____________ 为对照,对T0代水稻进行表现型分析,筛选得到矮秆突变体G。
(4)G自交得T1,从T1代筛选矮秆突变体,T2~T4每代均种植矮秆突变体,各代植株上剪取叶片进行潮霉素抗性检测,统计T2代和T4代潮霉素抗性和株高表型,得到下表结果。
据表分析,矮秆突变性状的遗传遵循______________________ 定律,表中矮秆植株均表现潮霉素抗性,正常株高植株均表现为潮霉素敏感,说明:_________________________________ 。
(1)科研人员构建含T—DNA的重组质粒,在T—DNA区段中含有已知序列的潮霉素抗性基因。将野生型水稻W的愈伤组织浸入含有上述重组质粒的
(2)将抗性愈伤组织
(3)以
(4)G自交得T1,从T1代筛选矮秆突变体,T2~T4每代均种植矮秆突变体,各代植株上剪取叶片进行潮霉素抗性检测,统计T2代和T4代潮霉素抗性和株高表型,得到下表结果。
潮霉素抗性 | 世代 | 植株数目 | |
矮秆 | 正常株高 | ||
抗性 | T2 | 259 | 0 |
T4 | 298 | 0 | |
非抗性 | T2 | 0 | 80 |
T4 | 0 | 92 |
据表分析,矮秆突变性状的遗传遵循
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(0.4)
【推荐2】农杆菌是一种在土壤中生活的微生物,能在自然条件下感染植物,因而在植物基因工程中得到了广泛的运用。下面是农杆菌转化法的示意图,试回答下列问题:
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2018/5/26/1953402374258688/1956955050156032/STEM/af35d6b0217b4dc691bc97e4a9f79eb4.png?resizew=388)
(1)获取目的基因的方法一般有_____ 、______ 等(写出两种)。理论上,基因组文库含有一种生物的____ 基因;而cDNA文库中含有生物的_____ 基因。
(2)图中c过程中,农杆菌能感染_______ 、______ 植物,原理是:在农杆菌的Ti质粒上存在______ 片段,它具有可以整合到受体细胞______ 的特点,从而通过农杆菌的转化作用,使目的基因进入植物细胞并稳定维持和表达。
(3)植物基因工程中将目的基因导入受体细胞的方法除了农杆菌转化法之外,还可采取的方法是________ 、_______ 。(至少写出两种)
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2018/5/26/1953402374258688/1956955050156032/STEM/af35d6b0217b4dc691bc97e4a9f79eb4.png?resizew=388)
(1)获取目的基因的方法一般有
(2)图中c过程中,农杆菌能感染
(3)植物基因工程中将目的基因导入受体细胞的方法除了农杆菌转化法之外,还可采取的方法是
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(0.4)
【推荐3】胰岛素是人体血糖调节中的重要激素,其释放受到机体的精确调控。
(1)人体内胰岛素释放通路是:餐后血糖升高,葡萄糖由细胞膜上的载体蛋白转运到胰岛B细胞内,经过__________ 过程产生大量ATP,阻断ATP敏感型钾离子通道,进而抑制了钾离子的外流,使细胞膜内的电位___________ ,打开电压依赖性的Ca2+通道,升高了胞内的Ca2+浓度,促进胰岛素分子以__________ 的方式释放到细胞外。
(2)研究发现,高浓度葡萄糖可引起胰岛A细胞合成并分泌谷氨酸,为研究谷氨酸的作用机理,科研人员将三组数目相等的小鼠离体胰岛进行培养,培养条件及结果如图1所示(CQNX为谷氨酸受体阻断剂)。实验结果表明:____________________________________ 。由此推测,谷氨酸与胰岛B细胞表面的_________ 结合发挥作用。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/editorImg/2023/1/4/3b4abc3a-43cb-41e5-801a-56508039e698.png?resizew=256)
(3)科研人员进一步用谷氨酸溶液处理正常小鼠和K+通道基因敲除小鼠的胰岛B细胞,检测细胞内Ca2+荧光强度,结果如图2所示。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/editorImg/2023/1/4/82efe872-299d-4aed-9bda-58a3a497ea1e.png?resizew=333)
①由实验结果可知,谷氨酸能够__________ 正常小鼠胰岛B细胞内的Ca2+浓度。
②K+通道基因敲除小鼠和正常小鼠相比,细胞内的基础Ca2+浓度显著高于正常小鼠,从胰岛素释放通路分析,是由于K+通道基因敲除小鼠的K+通道不能正常发挥作用,导致Ca2+通道_________ 。
③该实验结果说明谷氨酸对胰岛B细胞的作用是通过__________ 实现的。
(4)基因敲除是一种特殊的基因重组技术,即将外源目的基因导入细胞从而干扰该细胞内某一基因的功能。将外源目的基因导入小鼠的胰岛B细胞常用方法是__________ 。
(1)人体内胰岛素释放通路是:餐后血糖升高,葡萄糖由细胞膜上的载体蛋白转运到胰岛B细胞内,经过
(2)研究发现,高浓度葡萄糖可引起胰岛A细胞合成并分泌谷氨酸,为研究谷氨酸的作用机理,科研人员将三组数目相等的小鼠离体胰岛进行培养,培养条件及结果如图1所示(CQNX为谷氨酸受体阻断剂)。实验结果表明:
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/editorImg/2023/1/4/3b4abc3a-43cb-41e5-801a-56508039e698.png?resizew=256)
(3)科研人员进一步用谷氨酸溶液处理正常小鼠和K+通道基因敲除小鼠的胰岛B细胞,检测细胞内Ca2+荧光强度,结果如图2所示。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/editorImg/2023/1/4/82efe872-299d-4aed-9bda-58a3a497ea1e.png?resizew=333)
①由实验结果可知,谷氨酸能够
②K+通道基因敲除小鼠和正常小鼠相比,细胞内的基础Ca2+浓度显著高于正常小鼠,从胰岛素释放通路分析,是由于K+通道基因敲除小鼠的K+通道不能正常发挥作用,导致Ca2+通道
③该实验结果说明谷氨酸对胰岛B细胞的作用是通过
(4)基因敲除是一种特殊的基因重组技术,即将外源目的基因导入细胞从而干扰该细胞内某一基因的功能。将外源目的基因导入小鼠的胰岛B细胞常用方法是
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(0.4)
解题方法
【推荐1】科研人员构建了可表达H-M3融合蛋白的重组质粒并进行了检测,该质粒的部分结构如图所示,其中M3编码序列表达标签短肽M3。_____ 。除图中标出的结构外,作为载体,质粒还需具备的结构有_____ (答出两点即可)。构建重组质粒需要使用T4DNA连接酶,下列属于T4DNA连接酶底物的是_____ 。_____ ,添加引物的原因是_____ 。PCR是在PCR扩增仪中自动完成的,完成以后常采用_____ 来鉴定PCR的产物。
(3)图中胰岛素基因以_____ 链作为模板进行转录。构建基因表达载体时一般至少需要两种限制酶,以防止_____ 和_____ 。为使胰岛素基因能够在大肠杆菌中表达出正确的蛋白质,获取目的基因时通常先_____ ,然后再通过逆转录得到胰岛素基因。
(4)PCR扩增胰岛素基因的前提是_____ ,以用于特异性制备PCR扩增需要的引物。PCR扩增过程中,经过4轮循环后,得到的产物中只含一种引物的DNA分子占比为_____ ,n次循环后,至少消耗引物_____ 个。
(5)若H基因为水母体内的绿色荧光蛋白基因,科研人员将构建的表达载体导入大肠杆菌,结果发现大肠杆菌有的发绿色荧光,有的发黄色荧光,有的不发荧光。将发黄色荧光的大肠杆菌分离纯化后,对H基因进行测序,发现其碱基序列发生改变,将该基因命名为H1基因(黄色荧光蛋白基因)。若要通过基因工程的方法探究H1基因能否在真核细胞中表达,实验思路是_____ 。
(3)图中胰岛素基因以
(4)PCR扩增胰岛素基因的前提是
(5)若H基因为水母体内的绿色荧光蛋白基因,科研人员将构建的表达载体导入大肠杆菌,结果发现大肠杆菌有的发绿色荧光,有的发黄色荧光,有的不发荧光。将发黄色荧光的大肠杆菌分离纯化后,对H基因进行测序,发现其碱基序列发生改变,将该基因命名为H1基因(黄色荧光蛋白基因)。若要通过基因工程的方法探究H1基因能否在真核细胞中表达,实验思路是
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【推荐2】人参是一种名贵中药材,具有良好的滋补作用。干扰素可用于治疗慢性乙肝、丙肝及部分肿瘤。下图为三种限制酶识别序列与酶切位点及制备能合成干扰素的人参愈伤组织细胞的示意图。请回答:______ 种DNA片段。利用PCR技术扩增干扰素基因时,扩增第n次时,需要______ 个引物。
(2)假设图中质粒上BamHI识别位点的碱基序列变为了另一种限制酶BclI识别位点的碱基序列,现用限制酶BclI和HindⅢ切割质粒,那么该图中①的DNA右侧选择______ 进行切割,理由是______ 。形成的重组质粒能被______ 切开。
(3)在构建重组质粒的过程中,用HindⅢ、BamHI切割质粒和目的基因比只用BamHI切割好,这样可以防止______ 。②过程需要用到的酶是______ 。
(4)④过程检测人参愈伤组织细胞是否产生干扰素,所用的方法是______ 。
(2)假设图中质粒上BamHI识别位点的碱基序列变为了另一种限制酶BclI识别位点的碱基序列,现用限制酶BclI和HindⅢ切割质粒,那么该图中①的DNA右侧选择
(3)在构建重组质粒的过程中,用HindⅢ、BamHI切割质粒和目的基因比只用BamHI切割好,这样可以防止
(4)④过程检测人参愈伤组织细胞是否产生干扰素,所用的方法是
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【推荐3】蔗糖合酶是调控蔗糖代谢的关键酶,催化蔗糖进入各种代谢途径。为探究铁皮石斛蔗糖合酶2(DoSUS2)在非生物胁迫响应中的调控机制,科研人员从铁皮石斛叶组织中克隆了DoSUS2基因,并对其进行了生物信息学分析和表达特性研究,以下是部分研究结果,请回答下列问题:____ 方法,该反应体系中需要加入的物质有:铁皮石斛叶组织cDNA、一定的缓冲溶液、____ 。该方法扩增出来的DoSUS2基因与原细胞中的DoSUS2基因相比不含____ 。扩增结果如左图,推测正常情况下铁皮石斛蔗糖合酶2最多可由____ 个氨基酸组成。
(2)DoSUS2基因在低温、干旱和脱落酸处理下的转录结果如右图所示,据图在低温胁迫下DoSUS2基因的表达水平随着处理时间延长整体上呈____ 趋势,在低温和脱落酸处理6h后表达量达到峰值,干旱处理9h后表达量达到峰值,表明DoSUS2基因的表达受到____ 的诱导。据此,推测在低温、干旱等非生物胁迫下,铁皮石斛的应对机制和意义是____ 。
(2)DoSUS2基因在低温、干旱和脱落酸处理下的转录结果如右图所示,据图在低温胁迫下DoSUS2基因的表达水平随着处理时间延长整体上呈
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