请回答有关如图的问题：
(1)图甲中序号④所示过程叫做_________ 。
(2)如图乙，一个基因表达载体的组成，除了目的基因外，在基因尾端还必须有[2]_________ ；图中[3] _________ 的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。
(3)若预期蛋白质欲通过乳腺生物反应器生产，则构建基因表达载体时，图乙中序号[1]代表的是_________ ；且在图甲中⑨过程之前，要对精子进行筛选，保留含性染色体__________ 的精子。
(4)为获得较多的受精卵进行研究，图甲中⑥过程一般用激素对供体做_________ 处理；为提高培育成功率，进行⑩过程之前，要对供体和受体动物做_________ 处理。
(5)用_________ 技术处理发育到_________ 期或囊胚期的早期胚胎，可获得同卵双胎或多胎。
(1)图甲中序号④所示过程叫做
(2)如图乙，一个基因表达载体的组成，除了目的基因外，在基因尾端还必须有[2]
(3)若预期蛋白质欲通过乳腺生物反应器生产，则构建基因表达载体时，图乙中序号[1]代表的是
(4)为获得较多的受精卵进行研究，图甲中⑥过程一般用激素对供体做
(5)用
更新时间：2023-08-04 23:33:17
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【推荐1】人体肝脏细胞中的乙醛脱氢酶2（ALDH2）是人体酒精代谢中的关键酶。研究人员利用定点诱变技术对ALDH2基因进行改造后在大肠杆菌中表达，获得具有较好溶解性的乙醛脱氢酶2。所用质粒和操作过程如图。其中，Ampr为氨苄青霉素抗性基因，Tetr为四环素抗性基因。质粒的外侧链为a链，内侧链为b链。基因Tetr转录的模板链属于b链的片段。改造后的ALDH2基因编码区首端到末端（其中一条链）的序列为5'-ATCCATGCGCTC…（中间核苷酸序列）CAGTGAGTAGCG-3'。四种限制酶的识别序列及切割位点见下表。
(1)通过定点诱变技术可制备自然界原本__________ （选填“存在”或“不存在”）的蛋白质。
(2)基因Amp'转录的模板链属于___________ 链的片段，质粒复制的模板链是___________ 链。
(3)过程②需要的限制酶是__________ ，选择依据是___________ 。过程③常采用__________ 处理以提高操作效果。经过程④，在培养基上能形成菌落的大肠杆菌类型有___________ 。
(4)为扩增上图中改造的ALDH2基因，某同学设计了如下六种PCR引物，其中可选用（符合题意）的一对引物是___________ （选填数字序号）。根据选定的引物，经过4次循环，最多可获得__________ 个符合要求的目的基因。
①5'-TCTAGACGCTACTCACTG-3' ②5'-TCTAGAATCCATGCGCTC-3'
③5'-CTGCAGATCCATGCGCTC-3' ④5'-GGATCCCGCTACTCACTG-3'
⑤5'-GGATCCATCCATGCGCTC-3' ⑥5'-CTCGAGCGCTACTCACTG-3'
限制酶 | BamHⅠ | PstⅠ | XhoⅠ | XbaⅠ |
识别序列和切割位点（5'-3） | G↓GATCC | C↓TGCAG | C↓TCGAG | T↓CTAGA |
(2)基因Amp'转录的模板链属于
(3)过程②需要的限制酶是
(4)为扩增上图中改造的ALDH2基因，某同学设计了如下六种PCR引物，其中可选用（符合题意）的一对引物是
①5'-TCTAGACGCTACTCACTG-3' ②5'-TCTAGAATCCATGCGCTC-3'
③5'-CTGCAGATCCATGCGCTC-3' ④5'-GGATCCCGCTACTCACTG-3'
⑤5'-GGATCCATCCATGCGCTC-3' ⑥5'-CTCGAGCGCTACTCACTG-3'
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【推荐2】学习以下材料，回答（1）-（5）问题。
中心法则中的RNA通常指的是能够编码蛋白质的mRNA，但细胞中有许多不编码蛋白质的RNA-非编码RNA，但对细胞生命活动有调控作用。微小RNA（miRNA）是一种真核细胞中广泛存在的短链非编码RNA，长度为17~25个核苷酸。miRNA通常与mRNA的3'端非编码区结合，抑制依赖该mRNA的蛋白质翻译或促进靶标mRNA的降解，从而在转录后水平上调控基因的表达。当人体内某些miRNA功能失调时，疾病就可能发生。
(1)miRNA与mRNA的3'端非编码区通过____ 原则互补结合，从而在转录后水平上调控基因的表达。
(2)P载体上有荧光素酶基因F，将SIRT基因3'端非编码区域片段连接到P载体的F下游，获得重组载体P-F-SIRT，转入CW细胞中，检测荧光素酶F的mRNA水平及蛋白质水平，如图3所示。实验发现：SIRT3'端非编码区域存在转录后调控区域，依据是____ 。____ 片段可能是miRNA靶位点，原因是____ 。
(4)结合全文的信息，下列说法正确的有____。
(5)你认为本文介绍的miRNA调控转录是否属于表观遗传学？请陈述原因____ 。
中心法则中的RNA通常指的是能够编码蛋白质的mRNA，但细胞中有许多不编码蛋白质的RNA-非编码RNA，但对细胞生命活动有调控作用。微小RNA（miRNA）是一种真核细胞中广泛存在的短链非编码RNA，长度为17~25个核苷酸。miRNA通常与mRNA的3'端非编码区结合，抑制依赖该mRNA的蛋白质翻译或促进靶标mRNA的降解，从而在转录后水平上调控基因的表达。当人体内某些miRNA功能失调时，疾病就可能发生。
(1)miRNA与mRNA的3'端非编码区通过
(2)P载体上有荧光素酶基因F，将SIRT基因3'端非编码区域片段连接到P载体的F下游，获得重组载体P-F-SIRT，转入CW细胞中，检测荧光素酶F的mRNA水平及蛋白质水平，如图3所示。实验发现：SIRT3'端非编码区域存在转录后调控区域，依据是
(4)结合全文的信息，下列说法正确的有____。
| A．miRNA结构稳定性差，易降解 |
| B．miRNA编码蛋白引起细胞免疫排斥 |
| C．可调控miR-34a或miR124靶向治疗前列腺癌 |
| D．miRNA可用脂质载体递送到细胞内 |
(5)你认为本文介绍的miRNA调控转录是否属于表观遗传学？请陈述原因
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【推荐3】油菜是我国重要的油料作物，黄籽油菜比黑籽油菜的含油量更高，色素积累更少，但我国主栽的甘蓝型油菜缺乏天然的黄籽种质资源。研究表明，TT8基因作为一个重要的基因参与了黄籽性状的形成。科研人员首次利用CRISPR/Cas9技术对甘蓝型油菜中的BnaTT8基因进行定点突变改造（如图1），PCR扩增BnaTT8基因，构建基因表达载体（如图2），再将重组质粒通过农杆菌转化法导入受体甘蓝型油菜甲9707（J9707）中，创建甘蓝型油菜黄籽突变体，CRISPR/Cas9介导的BnaTT8基因突变可以显著提高种子的含油量和蛋白质含量，使得用甘蓝型油菜种子生产的菜籽油的营养价值更高。请回答下列问题：
(1)图1中向导RNA与BnaTT8基因按照_______ 原则特异性结合，Cas9蛋白切割BnaTT8基因使a链和互补链中的_______ 断裂，通过随机增添、删除或替换部分碱基对，获得所需目的基因。
(2)PCR扩增目的基因的原理是_______ 。为保证BnaTT8基因正确插入质粒中，需要在引物的_______ （填“3'端”或“5'端”）添加限制酶的识别序列。
(3)图2字母A~E表示不同限制酶的切割位点，构建基因表达载体时，将BnaTT8基因插入_______ （填字母）处，目的是_______ 。重组质粒导入受体细胞后，可在个体水平上通过_______ 来鉴定BnaTT8基因是否表达。
(1)图1中向导RNA与BnaTT8基因按照
(2)PCR扩增目的基因的原理是
(3)图2字母A~E表示不同限制酶的切割位点，构建基因表达载体时，将BnaTT8基因插入
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【推荐1】随着生物科学技术的发展，动物的生殖方式变得越来越多样化。如图是胚胎工程技术研究及应用的相关情况﹐供体1是良种荷斯坦高产奶牛，供体2是健康的黄牛，请据图回答下列问题：
(1)应用1中获得的良种小牛，遗传物质来源于______________ 个体，性别为______________ 。
(2)应用3可解决良种动物快速大量繁殖的问题；对囊胚阶段的胚胎进行分割时，要注意将_________ 均等分割，否则将影响分割后胚胎的恢复和进一步发育，如需做性别鉴定，还需从_____________ 细胞取样做DNA分析。
(3)应用4中细胞进行定向诱导，可分化形成各种组织和器官。在胚胎干细胞培养过程中除需要适宜的温度、无菌、无毒等环境条件以外，培养液通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、核苷酸，还要加入______ ；向培养液中通入95%空气和5%二氧化碳，空气中的氧气参与细胞的代谢，二氧化碳的主要作用是____________ 。
(1)应用1中获得的良种小牛，遗传物质来源于
(2)应用3可解决良种动物快速大量繁殖的问题；对囊胚阶段的胚胎进行分割时，要注意将
(3)应用4中细胞进行定向诱导，可分化形成各种组织和器官。在胚胎干细胞培养过程中除需要适宜的温度、无菌、无毒等环境条件以外，培养液通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、核苷酸，还要加入
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【推荐2】近年来，生物工程运用分子生物学的最新成就，发展出一系列的技术，可以为人类健康、生产、生活等服务。运用所学知识回答下列问题。
（1）科学家为了建立生产“干扰素”的乳房生物反应器，利用基因工程技术，构建含有启动子、_______________ 、目的基因、复制原点和 _______________ 等元件的基因表达载体，其中启动子的作用是 _______________________________ ，最后通过显微注射法，导入羊的 _______________ 中，最终发育成能生产干扰素的转基因羊。
（2）在单克隆抗体制备过程中，诱导_______________ 细胞与骨髓瘤细胞融合获得杂交瘤细胞，此过程需要两次筛选，第二次筛选出 ________________________ ，单克隆抗体的优点有 _____________________________ 。
（3）在胚胎工程中，通过对供体母羊注射_______________ 激素，促进其 _______________ ，从而获得大量羊的卵母细胞；获取的卵母细胞需要培养至 _______________ ，才能与 _______________ 的精子结合。
（1）科学家为了建立生产“干扰素”的乳房生物反应器，利用基因工程技术，构建含有启动子、
（2）在单克隆抗体制备过程中，诱导
（3）在胚胎工程中，通过对供体母羊注射
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【推荐3】现代生物工程技术的发展给人类的生活带来了很多惊喜。请据图回答有关问题：
（1）若A、B分别是白菜和甘蓝的原生质体，则细胞D再生出细胞壁后需要通过什么技术才能发育成杂种植株白菜－甘蓝_______ ？若白菜和甘蓝杂交产生了子代，该子代是否可育?________
（2）若该图表示产抗丙肝病毒的单克隆抗体的制备过程中的一环，A细胞为小鼠骨髓瘤细胞，则B细胞表示什么_______ ？符合要求的D细胞应具有哪些特点？_______
（3）若A、B分别是取自优良奶牛的卵细胞和精子，在进行体外受精时，一般要把A培养到什么时期_______ ？B细胞则要经过什么处理才能与A细胞结合为受精卵？_______
（1）若A、B分别是白菜和甘蓝的原生质体，则细胞D再生出细胞壁后需要通过什么技术才能发育成杂种植株白菜－甘蓝
（2）若该图表示产抗丙肝病毒的单克隆抗体的制备过程中的一环，A细胞为小鼠骨髓瘤细胞，则B细胞表示什么
（3）若A、B分别是取自优良奶牛的卵细胞和精子，在进行体外受精时，一般要把A培养到什么时期
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【推荐1】下图是转乳糖酶基因试管牛和克隆牛的培育过程，回答下列问题：_________ ，是动物基因工程中常用的受体细胞，可通过_________ 法导入目的基因，基因工程的核心步骤是_________ 。
(2)胚胎移植前需要将细胞1在发育培养液中培养成胚胎，培养时的气体环境条件为_________ 。胚胎移植前可对早期胚胎进行胚胎分割和性别鉴定，性别鉴定一般用发育到囊胚期的细胞，对囊胚期胚胎进行分割时，要注意将_________ 均等分割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。
(3)克隆牛的培育是通过__________ 技术实现的，属于____________ （填“有性”或“无性”）生殖。从进化角度分析，试管牛相比于克隆牛的优势是__________ 。
(4)有人提出，克隆动物的培育技术已经逐渐成熟，是时候将其应用于培育克隆人了，你是否赞同这种观点?______________ 。对于克隆，中国政府的态度是_________
(2)胚胎移植前需要将细胞1在发育培养液中培养成胚胎，培养时的气体环境条件为
(3)克隆牛的培育是通过
(4)有人提出，克隆动物的培育技术已经逐渐成熟，是时候将其应用于培育克隆人了，你是否赞同这种观点?
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【推荐2】干扰素是一种能抵御几乎所有病毒早期感染的糖蛋白，如图为通过生物工程生产干扰素的相关过程。回答下列问题：_______________ 。构建干扰素基因表达载体时，可将目的基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件结合，_______________ 可与启动子识别并结合，驱动目的基因的转录。选用受精卵作为受体细胞的主要原因是_______________ 。
(2)进行胚胎培养时，对不同发育阶段的胚胎使用的培养液成分_______________ （填“相同”或“不同”）。要实现批量生产干扰素，需要确保受体母牛所生小牛为雌性，可采集囊胚的_______________ 细胞进行性别鉴定。
(3)人们从转基因小牛乳汁中提取干扰素后给患者注射，而不是将牛乳直接提供给患者食用，这是因为_______________ 。
(2)进行胚胎培养时，对不同发育阶段的胚胎使用的培养液成分
(3)人们从转基因小牛乳汁中提取干扰素后给患者注射，而不是将牛乳直接提供给患者食用，这是因为
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【推荐3】利用体细胞核移植来克隆高产奶牛的大致流程如下图，其中Kdm4d为组蛋白去甲基化酶。回答下列问题：___ 的卵母细胞，采用显微操作法去“核”，其实是去除___ 。
(2)重构细胞经分裂、发育至___ 时期，可移植到受体母牛子宫中。移植之前，需要对受体母牛进行___ 处理。若要获得遗传性状完全相同的多只犊牛，可对重构胚进行___ ，再进行移植。犊牛的表型不完全与高产奶牛一致，原因可能是___ （答一点）。
(3)科研人员为确定Kdm4d的mRNA的作用，进行了如下实验，其中A组用正常培养液培养重构胚，B组用正常培养液培养注入了Kdm4d的mRNA的重构胚，实验结果如图所示。根据实验结果推测Kdm4d的mRNA的作用是___ 。
(2)重构细胞经分裂、发育至
(3)科研人员为确定Kdm4d的mRNA的作用，进行了如下实验，其中A组用正常培养液培养重构胚，B组用正常培养液培养注入了Kdm4d的mRNA的重构胚，实验结果如图所示。根据实验结果推测Kdm4d的mRNA的作用是
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【推荐1】EB病毒（EBV）可引发鼻咽癌等癌症。我国科研人员制备有效阻断EBV感染的单克隆抗体，为治疗和疫苗研发提供思路。
(1)如图1所示，EBV表面的糖蛋白gHgL与上皮细胞表面受体（如E2等）结合后，引起gB发生___ 变化，启动病毒包膜和上皮细胞膜融合。膜融合过程体现了膜具有___ 性。gHgL可作为制备有效阻断EBV感染的单克隆抗体的___ 。___ 为cDNA，扩增出gHgL抗体基因，转入细胞成功表达出单克隆抗体。筛选出的目标细胞应具有荧光___ （选填字母）。
(3)经筛选得到单抗D8，与已报道的单抗A1相比，两者都有较强的gHgL结合能力，都能显著抑制EBV病毒感染上皮细胞。将gHgL与D8或A1混合接触后，检测与上皮细胞表面受体E2的结合能力，结果如图2。___ 。
(1)如图1所示，EBV表面的糖蛋白gHgL与上皮细胞表面受体（如E2等）结合后，引起gB发生
| 不同荧光标记的分子 | 相关分子的特点 |
| 荧光A-抗CD4抗体 | CD4为辅助性T细胞的标记分子 |
| 荧光B-抗CD8抗体 | CD8为细胞毒性T细胞的标记分子 |
| 荧光C-抗CD20抗体 | CD20为B细胞的标记分子 |
| 荧光D-抗CD56抗体 | CD56为NK细胞的标记分子 |
| 荧光E-gHgL | gHgL可与细胞上的受体特异性结合 |
(3)经筛选得到单抗D8，与已报道的单抗A1相比，两者都有较强的gHgL结合能力，都能显著抑制EBV病毒感染上皮细胞。将gHgL与D8或A1混合接触后，检测与上皮细胞表面受体E2的结合能力，结果如图2。
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【推荐2】回答下列（一）、（二）小题：
（一）科研人员从长期受到废弃油脂污染的淤泥中得43%种油脂降解菌A和B，现对2种油脂降解菌进行培养分析，请回答下列问题：
(1)科研人员配置了含有0.3%NH4NO3、0.05%KH2PO4、0.05%K2HPO4、0.02%MgSO4、微量元素液和含废弃油脂等的培养基，从功能上来看，该培养基属于____________ 培养基，加入0.05%KH2PO4、0.05%K2HPO4的目的是____________ 。
(2)如图所示，科研人员称取了5g淤泥样品，将其加入45mL无菌水中，进行梯度稀释，在5个平板上分别用____________ 取0.1ml稀释液，涂布均匀后适当培养，5个平板上的菌落数分别为155、175、150、41、160，则1g淤泥中活菌数约为____________ 个（保留小数点后两位）。用这种方法统计得到的数值往往____________ （填“偏大”或“偏小”）。
(3)将水母细胞破碎后提取____________ ，在逆转录酶的作用下形成单链互补DNA，然后利用PCR技术扩增，再与pBIN质粒连接形成重组质粒，并导入大肠杆菌构建成____________ 。将文库中的大肠杆菌进行单菌落分离后，选择具有____________ 的菌落，进而获得目的基因。
(4)野生pBIN质粒不能将其上的DNA片段整合到植物细胞的染色体DNA上，因此需使野生pBIN质粒接入____________ 片段。在构建重组质粒时，选用两种不同的限制性内切核酸酶联合酶切的目的是_________ 。
(5)若利用农杆菌转化法进行矮牵牛的活体目的基因导入，通常需对叶片、子叶等感染部位进行损伤处理。若将农杆菌菌液加在未进行损伤处理的腋芽处，也可完成转化，原因是_____________ 。植物组织完成转化后常用抗生素进行除菌，选用抗生素种类时需要考虑____________ 。抗生素的使用也会对外植体产生一定的毒害作用。如果选用发根农杆菌介导目的基因导入的同时会引起外植体产生大量的不定根，选择不定根的____________ 进行继代培养2-3次就可在不使用抗生素的情况下获得无菌苗。
（一）科研人员从长期受到废弃油脂污染的淤泥中得43%种油脂降解菌A和B，现对2种油脂降解菌进行培养分析，请回答下列问题：
(1)科研人员配置了含有0.3%NH4NO3、0.05%KH2PO4、0.05%K2HPO4、0.02%MgSO4、微量元素液和含废弃油脂等的培养基，从功能上来看，该培养基属于
(2)如图所示，科研人员称取了5g淤泥样品，将其加入45mL无菌水中，进行梯度稀释，在5个平板上分别用
(3)将水母细胞破碎后提取
(4)野生pBIN质粒不能将其上的DNA片段整合到植物细胞的染色体DNA上，因此需使野生pBIN质粒接入
(5)若利用农杆菌转化法进行矮牵牛的活体目的基因导入，通常需对叶片、子叶等感染部位进行损伤处理。若将农杆菌菌液加在未进行损伤处理的腋芽处，也可完成转化，原因是
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【推荐3】甘蔗线条花叶病毒(SCSMV) 是引发甘蔗花叶病的主要病原之一 ，在世界各大 甘蔗区普遍发生，严重威胁甘蔗产业的发展，如何建立快速有效的检测方法对于该病毒的防 控有着极为重要的意义。研究人员通过病株汁液提纯得到病毒并以此制备抗体，由于不能完 全排除寄主蛋白的影响，制备的抗体在检测时易出现假阳性；改进科研方案后，研究人员利 用基因工程和细胞工程技术制备出甘蔗线条花叶病毒(SCSMV) 的 P1 蛋白的单克隆抗体，相关流程如图1所示，图2为pET28a 质粒及 P1 基因结构示意图。请回答下列问题。
(1)甘蔗线条花叶病毒是一种 RNA 病毒，可采取RT-PCR 法获得大量P1 基因，该过程中需要用到的酶有__________ 。
(2)图1中，过程①需根据__________ 设计特异性引物，还需在引物的5′端添加限 制酶___________________ 的 识别序列，确保P1 基因正确插入启动子与终止子之间，其目的是_________ 。 已知P1 基因右端 X 处的碱基序列为5′ —GAATAAAATACTAAAATCTTC-3′, 则其中一个引物序列为5′ 一 ______ — 3′(从5′端到3′端)。
(3)pET28a-P1CS 载体可导入经_________________ 处理的大肠杆菌以提高转化效率。该载体 上存在调节基因，在大肠杆菌中可指导合成阻遏蛋白，阻遏蛋白与操纵基因结合，阻止 ____________ 与启动子结合，抑制 P1 基因的转录，其原理如图3所示。分析图3可知，需将转化 后的大肠杆菌接种在含__________ 的培养液中进行培养，并从培养液中分离提纯P1蛋白。
(4)图1中的过程⑤目的是__________ ,随后可利用__________ 诱 导B 细胞与骨髓瘤细胞融合，再进行筛选。获得杂交瘤细胞后，在注入家兔腹腔前还应进行__________ 。
(1)甘蔗线条花叶病毒是一种 RNA 病毒，可采取RT-PCR 法获得大量P1 基因，该过程中需要用到的酶有
(2)图1中，过程①需根据
(3)pET28a-P1CS 载体可导入经
(4)图1中的过程⑤目的是
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