【推荐2】Ⅰ真核生物基因中通常有内含子，而原核生物基因中没有，原核生物没有真核生物所具有的切除内含子对应的RNA序列的机制。已知在人体中基因A(有内含子)可以表达出某种特定蛋白(简称蛋白A)。回答下列问题
（1）某同学从人的基因组文库中获得了基因A，以大肠杆菌作为受体细胞却未得到蛋白A，其原因是__________。
（2）若用家蚕作为表达基因A的受体，在噬菌体和昆虫病毒两种载体中，不选用______作为载体，其原因是________   。   
（3）若要高效地获得蛋白A，可选用大肠杆菌作为受体。因为与家蚕相比，大肠杆菌具有___，_________（答出两点即可）等优点。
（4）若要检测基因A是否翻译出蛋白A，可用的检测物质是_______________ (填蛋白A的基因”或蛋白A的抗体”)。
（5）艾弗里等人的肺炎双球菌转化实验为证明DNA是遗传物质做出了重要贡献，也可以说是基因工程的先导，如果说他们的工作为基因工程理论的建立提供了启示，那么，这一启示是_______________。
ⅠⅠ.某一质粒载体如图所示，外源DNA插入到Amp^r或Tet^r中会导致相应的基因失活(Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tet^r表示四环素抗性基因，有人将此质粒载体用BamH Ⅰ酶切后，与用 BamHⅠ酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌。结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题

（1）质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有__________，而作为基因表达载体，除满足上述基本条件外，还需具有启动子和终止子。
（2）如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述四种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅含环状目的基因的细胞是不能区分的，其原因是： _______，并且________和___________的细胞也是不能区分的，其原因是__________。在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌单菌落，还需使用含有___________的固体培养基。
（3）基因工程中，某些噬菌体经改造后可以作为载体，其DNA复制所需的原料来自于_____________。

【推荐3】北极比目鱼中有抗冻基因，下图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意图，过程①的mRNA序列为5'-AUCUAUGCGCUCAUCAG…（中间省略3n个核苷酸序列）…CGCAGCAAUGAGUAGCG-3'。请回答：
   
(1)过程②中既能连接黏性末端又能连接平末端的DNA连接酶是_____。
(2)为使过程①获取的目的基因能整合到番茄细胞的染色体的DNA上，在构建表达载体时，需要将目的基因插入______中，并且需在目的基因的首端和尾端分别加入_____。
(3)在分子水平上要检测番茄的DNA上是否插入了抗冻基因或抗冻基因是否转录出了mRNA，可以通过______等技术检测；要确认抗冻基因是否在转基因番茄植株中完全表达，应通过_____法检测转基因番茄植株中该基因的表达产物是否呈阳性。
(4)如果目的基因进行PCR扩增，循环5次，理论上至少需要加入______个引物，扩增的产物中同时含有两种引物的DNA分子有_____个，可选用的引物是_____。
①5′-ATCTATGCGCTCATCAG-3′       ②5′-GACTACTCGCGTATCTA-3′③5′-CGCAGCAATGAGTAGCG-3′       ④5′-GCGATGAGTAACGACGC-3′⑤5′-TAGATACGCGAGTAGTC-3′⑥5′-CGCTACTCATTGCTGCG-3′

【推荐1】T4溶菌酶是一种重要的工业用酶，但是它在温度较高时容易失去活性。为了提高T4溶菌酶的耐热性，对T4溶菌酶基因进行改造，使T4溶菌酶的第3位异亮氨酸变为半胱氨酸。于是，在该半胱氨酸与第97位的半胱氨酸之间形成了一个二硫键，T4溶菌酶的耐热性得到了提高。下图是通过两次PCR操作，运用大引物进行定点突变获取T4溶菌酶改良基因和利用质粒pCLY11构建含T4溶菌酶基因的重组质粒示意图。（注：一次PCR操作可进行多次循环）

   

(1)原核细胞中的限制酶可切割外源DNA，但不破坏自身DNA，其原因可能是____________（答出两点即可）。
(2)已知图中T4溶菌酶基因下链为模板链，异亮氨酸密码子为AUC，半胱氨酸密码子为UGC，则设计突变上游引物时，突变位点的碱基是____________，第一次PCR过程中至少需要____________次循环才能获得双链等长DNA片段。
(3)第二次PCR操作中使用的引物有____________，第二次PCR经过5次循环需要的引物数量为____________。
(4)若获得改良基因如图所示，使该基因与质粒pCLY11高效连接，需要使用的限制酶是____________。

【推荐3】薄荷可产生蚜虫报警信息素EβF，用于驱散蚜虫并吸引蚜虫的天敌。通过基因工程可制备含EβF合成酶基因的转基因抗蚜麦。请回答问题：
(1) 薄荷利用EβF驱散蚜虫并吸引蚜虫的天敌，体现了生态系统的信息传递具有________，维持生态系统稳定性的功能。
(2) 若利用PCR技术获取EβF合成酶基因，在PCR反应体系中需加入________、模板序列、原料及两种________。如果提取到薄荷细胞中EβF合成酶的mRNA，则可用________方法获取目的基因。
(3) 研究者利用4种限制酶切割目的基因和质粒，各限制酶的识别序列和切割位点如下图所示。酶切后的产物连接时，目的基因上Sal Ⅰ切割产生的末端应与质粒上________切割产生的末端相连接。连接完成后，该连接点_______(能/不能)被这两种限制酶中的某一种切割。


　　　
(4) 欲从个体水平上检测转基因抗蚜麦是否培育成功，在小麦叶片上接种蚜虫后，通过观察叶片上蚜虫的________或________作为判定的依据。
(5) 下列属于转基因抗蚜麦推广种植后引发的安全性问题的是________。
A. 小麦不再感染蚜虫     B. 目的基因向其他生物扩散
C. 减少杀虫剂对环境的破坏   D. 改变现有生态结构

【推荐1】如图所示为获得转基因鼠和单克隆抗体的制备过程，据图回答下列问题：

（1）过程Ⅰ将目的基因导入受体细胞的方法是____________。在分子水平上检测该过程是否成功的方法是_____________。
（2）过程Ⅱ表示受精卵经过体外培养，形成___________，再移植到受体母鼠体内。培养过程中，培养液中添加一定量的_________，以防培养过程中杂菌的污染。此外，还应定期_________________以便清除代谢产物，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。
（3）过程Ⅳ需要用特定的________培养基进行筛选，得到既能迅速大量繁殖，又能产生专一抗体的杂交瘤细胞。为了获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞，还需进行________培养和_______检测。
（4）过程Ⅴ获得的单克隆抗体主要的用途有__________________________________。（至少答两点）

【推荐2】糖尿病已经成为危害人类健康的严重疾病之一，注射胰岛素是目前治疗糖尿病最为有效的途径和手段，如何生产优质而不昂贵的人胰岛素，是当下医疗界和制药界急需攻克的科学难题。如图为利用基因工程技术生产人胰岛素的操作过程示意图，请回答：

（1）在基因表达载体中，________的作用是RNA聚合酶识别和结合的部位，并驱动基因转录出mRNA。
（2）图中细胞1是________细胞。过程②必需的酶是_______。过程③④⑤为_______技术扩增目的基因，此过程必需的酶是________。过程③断开的化学键名称为________，在体外进行PCR操作时，实现该过程的处理方法是___________。能否利用人的皮肤细胞来完成过程①，为什么_______________________________________________。
（3）图中B的基本组成单位有____种；为便于重组DNA的鉴定和选择，图中C的组成必须有__________；将体外重组DNA导入大肠杆菌体内，并使其在细胞内维持稳定和表达的过程称为转化。为使过程⑧更易进行，可用_______处理大肠杆菌，目的是使大肠杆菌细胞处于能够吸收周围环境中DNA分子的生理状态（或使大肠杆菌处于感受态细胞状态）。由于重组DNA分子成功导入受体细胞的频率低，所以在转化后通常需要进行________操作。
（4）若过程⑨发生了变异，则此变异为__________。过程⑩得到的人胰岛素需要体外加工才具有生物活性，原因是大肠杆菌_______________________________________。
（5）目的基因在受体细胞中是否能转录出mRNA，可用_________技术来检测。

【推荐3】乙肝基因工程疫苗是用基因工程技术将乙型肝炎表面抗原基因片段（转录以β链为模板）重组到中国仓鼠卵巢细胞（CHO）内，通过细胞培养，使其大量分泌乙肝表面抗原（HBsAg）于培养液中，经纯化加佐剂氢氧化铝后制成。利用基因工程技术生产乙肝疫苗流程。回答下列问题：

限制酶	BamHⅠ	EcoRⅠ	MfeⅠ	KpnⅠ	HindⅢ
识别序列和切割位点	G↓GATCC	G↓AATTC	C↓AATTG	GGTAC↓C	A↓AGCTT

   

(1)根据图表，应使用限制酶_____ 切割图中质粒，使用限制酶_____ 切割图中含乙型肝炎表面抗原基因的DNA片段，以获得能正确表达乙型肝炎表面抗原基因的重组质粒。
(2)研究人员欲对乙型肝炎表面抗原基因的mRNA进行RT—PCR，已知其mRNA的序列为5＇-UGAACGCUA…（中间序列）…GUCGACUCG-3＇。为了便于将扩增后的基因和载体成功构建成重组质粒，用于PCR扩增的引物应为_____ 。PCR反应体系中，需要加入Mg²⁺，目的是_____ 。至少经过_____ 次循环才能获得双链等长的乙型肝炎表面抗原基因。
(3)培养小鼠卵巢细胞时，首先应保证其处于_____ 的环境，除了适宜的营养物质、温度等条件外，还需要控制的气体条件是_____ 。检测小鼠卵巢细胞是否产生HBsAg，常用的方法是_____ 。

【推荐1】乳糖不耐症是由于乳糖酶（LCT）分泌少，不能完全消化分解母乳或牛乳中的乳糖所引起的非感染性腹泻。科研工作者利用生物技术培育出转基因低乳糖奶牛新品种，给患乳糖不耐症患者带来福音。下图1为转基因低乳糖奶牛培育流程，图2是使用限制酶BamHI切割DNA产生的结果。请分析回答问题：

（1）科学家在构建重组质粒T时，首先采用PCR技术对LCT基因进行扩增，在扩增目的基因的操作过程中，加入的物质有：模板DNA、引物、4种脱氧核苷酸以及___________酶；若一个该DNA分子在PCR仪中经过4次循环，需要___________个引物，产物中共有___________个等长的LCT基因片段。
（2）图1中的牛胎儿成纤维细胞无法直接发育成个体，需要利用去核卵母细胞构建重组细胞才能培育出新个体，其依据的原理是___________。
（3）据图2分析，BamHⅠ的识别序列以及切割位点（用“↓”表示）是___________。
（4）图1中，切割质粒S用的酶是_____________，切割后形成1．8kb和8．2kb（1kb=1000对碱基）两种片段。若用BamH I和EcoR I两种酶切割重组质粒T，获得1．6kb和8．8kb两种片段，则转入的LCT基因长度为____________kb。
（5）在转基因低乳糖奶牛的乳腺细胞中，可检测到的物质有___________。（填编号）
A．LCT基因                  B．LCT mRNA                 C．LCT

【推荐3】下面是将改造后的T4噬菌体的T4溶菌酶基因（T4L）导入巴斯德毕赤酵母菌生产T4溶菌酶的过程及有关资料，请分析回答下列问题。
资料1：科学家通过技术手段使T4溶菌酶的第3位异亮氨酸变为半胱氨酸（异亮氨酸的密码子是AUU、AUC、AUA，半胱氨酸的密码子是UGU、UGC），于是在该半胱氨酸与第97位的半胱氨酸之间形成一个二硫键，从而使T4溶菌酶的耐热性得到了提高。
资料2：甲醇可作为巴斯德毕赤酵母菌生活的唯一碳源，同时能诱导AOX1基因（醇氧化酶基因）表达，5’AOX1和3’AOXl（TT）是基因AOX1的启动子和终止子，此启动子也能使外源基因高效表达。
资料3：巴斯德毕赤酵母菌体内无天然质粒，下图为科学家改造的pPIC9K质粒，其与T4L基因形成的重组质粒在特定部位酶切后形成的线性重组DNA片段可以整合到酵母菌染色体上，最终实现目的基因的表达。
   
（注：质粒上限制酶酶切后产生末端均不相同）
(1)根据资料1，T4溶菌酶基因至少需要替换______个碱基对才能达到目的。耐热T4溶菌酶设计、改造的过程属于______工程。
(2)pPIC9K-T4L构建过程需要在T4L首、尾分别添加______酶的酶切位点，除T4L外，T4噬菌体还可为构建过程提供______酶。
(3)转化前，选择BglⅡ酶得到线性重组DNA片段。转化后，培养基中应添加______，用于筛选含重组DNA的酵母菌，此外培养基还需添加______，用于诱导T4L基因高效表达和为酵母菌提供______。
(4)从酵母菌中提取的T4溶菌酶可在______条件下对其进行活性鉴定。