组卷网 > 高中生物综合库 > 生物技术与工程 > 基因工程 > 基因工程的基本操作程序 > 目的基因的获取 > PCR扩增的原理与过程
题型:非选择题-解答题 难度:0.65 引用次数:340 题号:20105685
人血清白蛋白(HSA)是由肝脏细胞合成的,具有重要的医用价值,原本只能从血清中提取,现利用基因工程的方法生产HAS。请结合相关知识回答下列问题。

(图甲为获取的含HAS基因的DNA片段及酶切位点:图乙是三种限制酶的识别序列:图丙为质粒结构示意图)
(1)科研人员利用人肝细胞中的_______________构建出_______________文库,通过该方法合成的DNA含量较少,可通过PCR进行扩增获取较多的DNA分子,根据该基因的序列(5'CTAGGTCGAAATTC…TCTCCAACGATCGG3'),应选择_______________作为PCR的引物。
A.引物Ⅰ是5′-CTAGGTCGAAATTC-3′,引物Ⅱ是5′-CCGATCGTTGGAGA-3'
B.引物Ⅰ是5′-CTAGGTCGAAATTC-3′,引物Ⅱ是5′-TCTCCAACGATCGG-3'
C.引物Ⅰ是5′-GATCCAGCTTTAAG-3',引物Ⅱ是5'-AGAGGTTGCTAGCC-3
D.引物Ⅰ是5′-GATCCAGCTTTAAG-3',引物Ⅱ是5′-CCGATCGTTGGAGA-3'
为使HSA基因能与质粒正确连接根据图甲、乙、丙,应选择的限制酶_______________切割目的基因。
(2)PCR扩增结束后需要对PCR产物进行检测,常采用电泳的方法。PCR产物加到加样孔中,加样孔一端应朝向电极的_______________极。电泳一段时间后进行检测,若电泳带有_______________条,且与DNAMarker对比,产物大小正确,表明PCR扩增成功。
(3)目的基因与质粒连接后可以导入到不同的受体细胞中进行表达。若导入到原核生物大肠杆菌中,可用CaCl2处理大肠杆菌,使之成为_______________细胞,有利于重组质粒的导入。但由于原核细胞中缺少_______________等细胞器,不能对表达产物进行加工,可能会影响蛋白质的功能。若将重组质粒导入到真核细胞,如小鼠细胞中,则可避免上述问题的产生。现利用小鼠乳腺作为生物反应器生产该蛋白,可将重组质粒通过_______________法导入小鼠的_______________细胞中,然后将转化的细胞进行培养,由于无法进行全体外胚胎培养,_______________成为胚胎工程中获得转基因小鼠的唯一方法。利用_______________技术检测小鼠乳腺分泌物,可以判断目的基因是否表达。

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回答下列问题:
(1)米曲霉发酵过程的主要目的是使米曲霉充分生长繁殖,大量分泌制作酱油过程所需的酶类,这些酶中的________________________能分别将发酵池中的蛋白质和脂肪分解成易于吸收、风味独特的成分,如将蛋白质分解为小分子的肽和____________
(2)在发酵池发酵阶段添加的乳酸菌属于____________(填“自养厌氧” “异养厌氧”或“异养好氧”),酵母菌是一种单细胞真菌,能以___________作为主要营养物质和能量来源。
(3)为了在发酵池中添加性状优良的菌种,科技人员进行了下列PCR部分实验操作。请完成表格相关内容:
参与成分相关操作
缓冲液PCR反应缓冲液中一般要添加①____
模板、引物、原料和酶需提供DNA模板、2种引物、4种脱氧核苷酸和②____
PCR仪能够自动调节③_____的仪器
反应过程每次循环一般分为④_____三步
循环次数一次PCR一般要经历⑤________循环
产物鉴定常采用⑥___来鉴定PCR的产物

2022-05-07更新 | 99次组卷
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回答下列问题:
(1)与图1中启动子结合的酶是_______。除图1中标出的结构外,作为载体的质粒还需具备的结构有_______(答出2个即可)。
(2)已知F1与图1中P基因的a链相应部分的序列互补配对,由此可知P基因转录的模板链是_______链。
(3)随机挑取甲、乙、丙、丁4个品系细胞通过PCR和电泳技术验证基因型,结果如图2所示。PCR产物进行电泳时,琼脂糖凝胶的加样孔在_______端。
(4)结合图1和图2推测,在进行PCR扩增时,应选择图1中的引物组合是_______,其中属于GFP基因纯合子的品系是_______
2024-05-28更新 | 169次组卷
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【推荐3】α1-抗胰蛋白酶(α1-AT)是下呼吸道中最主要的蛋白酶抑制剂,其在血清中含量越低,肺气肿越易发生。α1-AT补充治疗不仅是先天性α1-AT缺乏症的主要治疗方法,而且也为其他炎症性肺疾病的治疗开辟了新的途径。我国科研人员利用羊乳腺生物反应器生产α1-AT并用于临床,下图是科研人员选用的载体(图中bp表示碱基对,α1-AT基因为1182bp)。回答下列问题:
   
注:质粒除图示部位外以及目的基因内部和外部均无XbaI、SacI、HindⅢ三种限制酶的识别位点。
(1)从人体获得α1-AT基因后,通过PCR技术快速扩增。该技术的前提是___________,以便设计引物,引物在DNA复制中的作用是___________。若经PCR并未扩增出任何条带,可能的原因有:___________(填写字母)。
A.引物太短                    B.引物自连或互连                    C.复性温度过低                    D.所用酶的质量不好
(2)构建基因表达载体时,需将α1-AT基因与___________的启动子等调控组件重组在一起,启动子是___________识别、结合的序列,驱动基因的转录。
(3)科研人员在构建基因表达载体时选用的限制酶是XbaI和HindIII,操作成功后的基因表达载体长__________bp。没有选择限制酶XbaI和SacI的理由是___________。为方便构建基因表达载体,还需在引物的___________端添加限制酶识别序列。
(4)现对筛选出的5只转基因羊个体进行DNA水平的检测,判断目的基因是否导入成功。请填写表格,完成实验设计:
组别实验组1-5对照组1对照组2
模板____________________空载体
PCR体系中加入的其他物质扩增缓冲液、水、引物、③____________、四种脱氧核苷酸
电泳预期结果有条带__________无条带
2023-05-28更新 | 281次组卷
共计 平均难度:一般