23. 人血清白蛋白(HSA)是由肝脏细胞合成的,具有重要的医用价值,原本只能从血清中提取,现利用基因工程的方法生产HAS。请结合相关知识回答下列问题。
(图甲为获取的含HAS基因的DNA片段及酶切位点:图乙是三种限制酶的识别序列:图丙为质粒结构示意图)
(1)科研人员利用人肝细胞中的
_______________构建出
_______________文库,通过该方法合成的DNA含量较少,可通过PCR进行扩增获取较多的DNA分子,根据该基因的序列(5'CTAGGTCGAAATTC…TCTCCAACGATCGG3'),应选择
_______________作为PCR的引物。
A.引物Ⅰ是5′-CTAGGTCGAAATTC-3′,引物Ⅱ是5′-CCGATCGTTGGAGA-3'
B.引物Ⅰ是5′-CTAGGTCGAAATTC-3′,引物Ⅱ是5′-TCTCCAACGATCGG-3'
C.引物Ⅰ是5′-GATCCAGCTTTAAG-3',引物Ⅱ是5'-AGAGGTTGCTAGCC-3
D.引物Ⅰ是5′-GATCCAGCTTTAAG-3',引物Ⅱ是5′-CCGATCGTTGGAGA-3'
为使HSA基因能与质粒正确连接根据图甲、乙、丙,应选择的限制酶
_______________切割目的基因。
(2)PCR扩增结束后需要对PCR产物进行检测,常采用电泳的方法。PCR产物加到加样孔中,加样孔一端应朝向电极的
_______________极。电泳一段时间后进行检测,若电泳带有
_______________条,且与DNAMarker对比,产物大小正确,表明PCR扩增成功。
(3)目的基因与质粒连接后可以导入到不同的受体细胞中进行表达。若导入到原核生物大肠杆菌中,可用CaCl
2处理大肠杆菌,使之成为
_______________细胞,有利于重组质粒的导入。但由于原核细胞中缺少
_______________等细胞器,不能对表达产物进行加工,可能会影响蛋白质的功能。若将重组质粒导入到真核细胞,如小鼠细胞中,则可避免上述问题的产生。现利用小鼠乳腺作为生物反应器生产该蛋白,可将重组质粒通过
_______________法导入小鼠的
_______________细胞中,然后将转化的细胞进行培养,由于无法进行全体外胚胎培养,
_______________成为胚胎工程中获得转基因小鼠的唯一方法。利用
_______________技术检测小鼠乳腺分泌物,可以判断目的基因是否表达。