【推荐3】反硝化细菌能在无氧环境中将硝酸盐转化为氮气（2NO₃^— +10e^-+12H⁺→。。。→N₂O→N₂），在处理工业污水、治理水体富养化中具有重要作用。科研人员想从一污水处理厂的活性污泥中筛选分离出耐高温（42℃）的反硝化细菌（目的菌），用于提升温度较高的工业污水的脱氮效率，具体流程如下：

注：BTB培养基初始pH=6.8.BTB是酸碱指示剂，酸性条件下为黄色，中性条件下为绿色，碱性条件为蓝色。
(1)BTB培养基以______________为唯一氮源，使用________________法进行灭菌。待平板凝固后，应倒置放在超净台上，目的是__________________________。
(2)将污泥样品梯度稀释后，使用_________________将样液均匀涂布在BTB培养基上，放在_________环境中培养2-3天后，挑选显______色的单菌落在固体培养基上划线分离，获得纯菌株。
(3)将纯菌株接种在液体培养基上培养一段时间，若在培养瓶顶部检测到N₂O，即可鉴定为目的菌。不能依据培养液中硝酸盐的浓度变低来鉴定目的菌，原因是___________。
(4)C/N（碳氮含量比）对反硝化效率有一定的影响。科研人员测得不同C/N条件下目的菌对硝酸盐的去除率，结果如图所示：

科研人员提出，在利用目的菌株处理工业污水时，需要适当向污水中投放少量淀粉，据图分析这样做的主要目的是____________。

【推荐3】β-地中海贫血是一种常染色体隐性遗传病， 我国南方这种遗传病的常见病因 是血红蛋白 β 珠蛋白基因（HBB）编码区 4 个碱基（3＇－CTTT －5＇）缺失。下图 1 是一种基因治疗 β-地中海贫血的技术路线，图 2 是图 1 过程③外源 DNA 导入 iPS 细胞 （诱导多能干细胞） 后， 在细胞内利用 CRISPR/Cas9 基因编辑系统和外源单链 DNA 及 DNA 自我修复系统进行基因治疗的主要过程。请据图回答问题。

(1)利用患者的成纤维细胞诱导形成 iPS 细胞，不仅可以避免在进行细胞移植时发生 _________ ，还因为 iPS 细胞能_________，可获得足够多的回输细胞。
(2)根据图 2 分析，在利用CRISPR/Cas9 基因编辑技术进行基因修复时，需要根据_________ 设 计 2 种 gRNA；导入单链 DNA 作为修复模板的目的是_________ 。
(3)图 1 的过程③中， 研究人员将 gRNA 基因与Cas9 基因分别整合到不同的载体中，这是 因为整合到同一载体中会_________ ，不容易导入细胞。研究人员将 gRNA 载体、Cas9 载体 和单链 DNA 按一定比例与 iPS 细胞混和后， 对混合液进行瞬时高压电激处理，其目的 是_________ 。
(4)导入 iPS 细胞的 gRNA 基因和 Cas9 基因需要利用细胞中的_________ 催化合成 gRNA 和 Cas9 mRNA，后者指导合成 Cas9 蛋白， 并组装成CRISPR/Cas9 系统。图 2 中酶 B 的功能是 _________ 。
(5)为检测 iPS 细胞中 HBB 基因是否正确修复， 研究人员设计特异引物时， 最好将插入片 段（CTTT）或互补序列设计在引物的_________ 端。 在 PCR 时可_________ ，以提高引物结合 的特异性。

【推荐3】Ri质粒位于发根农杆菌中。研究发现，当发根农杆菌侵染双子叶植物时，植物伤口处产生的酚类化合物会使 Vir 区处于抑制状态的基因被激活，产生一系列的酶，在酶的切割作用下产生 T-DNA 链， T-DNA进入植物细胞内，整合到植物细胞的基因组中。侵染时，Ri 质粒中仅T-DNA 片段进入植物细胞，并随机整合到基因组中，诱导植物产生大量高度分支的不定根，请回答下列问题∶
（1）质粒是基因工程的载体，作为载体应具备的条件有____________________（答出3点）。
（2）利用Ri质粒转运目的基因时，要将目的基因插入到其T-DNA 区的内部，原因是______。发根农杆菌侵染植物时，其 Vir 区处于抑制状态的基因被激活后产生的酶是__________；构建重组质粒时，不能破坏 Vir 区，其原因是__________。
（3）欲判断重组 Ri质粒是否导入受体细胞，一方面可以利用质粒上的_____进行检测，另一方面还可以利用______技术进行检测。
（4）单子叶植物不易被 Ri 质粒感染，其原因是_______________。