【推荐1】某科学家团队经过长期研究发现了nemuri基因有促进睡眠的功能。nemuri基因编码的NEMURI蛋白由果蝇大脑中的神经元分泌，以其抗菌活性抵抗细菌并促进果蝇长时间的深度睡眠。目前，该科学家团队正采用基因工程技术，生产NEMURI蛋白药物。请回答下列问题：
（1）获取nemuri基因是本研究的第一步。若nemuri基因核苷酸数少，核苷酸序列已知，可以使用_____________（仪器）用化学方法直接人工合成。
（2）研究者可从果蝇的基因文库中获取nemuri基因。基因文库包括基因组文库和部分基因文库。构建基因组文库时，需要用到的酶主要有_____________；构建cDNA文库时，还需要用到的酶主要是___________。cDNA文库中的基因____________（填“含有”或“不含有”）启动子。
（3）如果nemuri基因____________，研究者也可据此设计引物，用PCR技术扩增nemuri基因。PCR技术所需的原料为_______________，该技术____________（填“需要”或“不需要”）解旋酶。
（4）如果对nemuri基因进行鉴定。可依据NEMURI蛋白的功能，采用_______________方法进行鉴定。

【推荐3】人促红细胞生成素（EPO）是一种可用于治疗肾性贫血的糖蛋白类激素，可用乳腺生物反应器生产EPO。为了避免外源EPO基因随机整合到染色体的DNA上，科研人员设计和构建了大鼠染色体定位整合克隆载体，利用大鼠乳清酸蛋白（WAP）基因上游的调控序列及启动子和3'UTR序列构建了基因表达载体。构建前，科研人员扩增了WAP基因上游不同长度的片段，将这些片段分别插入EPO基因中，以确定WAP基因的启动子的具体位置，相关信息如图所示。请回答下列问题：

(1)人促红细胞生成素（EPO）在人体内的作用是___。
(2)在扩增WAP基因上游不同长度的片段时，PCR反应体系中一般要添加Mg²⁺，Mg²⁺的作用是___。
(3)大鼠WAP基因的启动子能插入EPO基因上游的原因是___。
(4)为将扩增后的产物定向插入基因表达载体中，以指导EPO基因的表达，需要在引物末端添加特定的限制酶的识别序列。由图中信息可知，在P1～P4末端添加的序列所对应的限制酶是___，在A末端添加的序列所对应的限制酶是___。
(5)乳腺生物反应器生产EPO会受到动物性别、哺乳期等限制而影响产量，请根据所学知识提出一条解决这些问题的方案：___。

【推荐1】下图是三个DNA片段上（依次表示出了EcoRⅠ、BamHⅠ和Sau3AⅠ三种限制性内切酶的识别序列与切割位点）和某种质粒（质粒上的EcoRⅠ、Sau3AⅠ的切点是唯一的）示意图。请回答下列问题：

（1）某研究人员经BamHⅠ切割得到了目的基因。为了构建目的基因表达载体，质粒需用_____________进行切割，原因是_____________。将目的基因插入质粒中，还需用到_____________酶。
（2）目的基因的获得还可以采用PCR技术，设计引物时，引物中的碱基序列设计的依据是_____________和_____________。
（3）用单酶切法构建目的基因表达载体时，常会遇到目的基因自身环化和_____________的问题，因此在实践中，常用双酶切法。
（4）某研究人员利用图中的质粒构建了某种目的基因的三个表达载体，如图。其中不能在宿主细胞中表达目的基因产物的有_____________，不能表达的原因是_____________。

【推荐2】研究者将动物体内的目的基因导入大肠杆菌的质粒中保存，该质粒含有氨苄青霉素抗性基因(Amp^R)、 LacZ 基因及一些酶切位点，其结构和操作步骤如下图所示。

(1)大肠杆菌等微生物是基因工程中研究最早、应用最广泛的受体细胞，这是因为微生物具有__________________等优点(至少两点)。一般使用__________种限制酶处理质粒和含有目的基因的DNA片段，这样做的优点是_______________________。
(2)步骤③中加入的物质是_______，目的是___________________。
(3)将连接产物导入大肠杆菌，先用__________处理大肠杆菌，目的是____________。
(4)酶切位点选择在LacZ基因上，目的是用于区分_______________的大肠杆菌，依据是_________________。

【推荐3】表面展示技术是通过重组DNA技术，将外源蛋白与细胞表面的蛋白质组装成融合蛋白，从而可展示在细胞表面。回答下列问题。
(1)若要将芽孢表面蛋白基因cotB与外源的绿色荧光蛋白基因gfp构建成基因表达载体，下图中最适合通过绿色荧光（绿色荧光蛋白在紫外光下会产生绿色荧光）确定融合蛋白成功表达的是_____。


注：Amp^r为氨苄青霉素抗性基因；→表示转录方向；UAG，UAA，UGA是终止密码子，AUG是起始密码子。
(2)导入基因表达载体后的芽孢杆菌接种在含有_______的固体培养基上，以获得携带载体的单菌落，该过程被称为微生物的________培养。
(3)培养基中可能既有含基因表达载体的单菌落，也有含______的单菌落，因此还需要对DNA进行提取，常用酒精初步分离DNA和蛋白质，这里酒精的作用原理是______。
(4)若要确定表面展示技术在芽孢杆菌上构建成功，应在紫外光环境下对其进行______水平的检测。

【推荐1】皇竹草属于单子叶禾本科植物，是一种高产、优质的刈割型饲草，可用于饲喂多种牲畜和鱼类，是饲草料产业发展的主要草种，但低温等逆境胁迫会导致皇竹草减产。科研人员从拟南芥植株中获取CBF1抗寒基因，通过转基因技术培育抗寒皇竹草，以使皇竹草安全越冬和提高产量。如图是某质粒载体上的SacⅠ、XbaⅠ、EcoRⅠ、SmaⅠ四种限制酶的切割位点示意图。回答下列问题：

(1)从拟南芥基因文库中获取CBF1抗寒基因，一般使用PCR技术扩增。扩增前，先根据______设计引物。扩增时，加热至70〜75℃时，互补链的______（填“3′”或“5′”）端可在______酶的作用下延伸。
(2)从PCR产物中分离出CBF1抗寒基因，将其重组连接到土壤农杆菌的Ti质粒上，获得T－CBF1重组质粒。在此过程中，同时使用SacⅠ和EcoRⅠ进行双酶切的目的是______。欲将T－CBF1重组质粒成功导入普通皇竹草愈伤组织细胞中，需在植物组织培养基中加入______类化合物。为鉴别受体细胞中是否含有CBF1抗寒基因，培养基中还应加入______进行筛选。
(3)检测抗寒转基因皇竹草的培育是否获得成功，除了分子水平上的检测外，还需要在个体水平进行鉴定。科研人员将生长健壮、苗龄一致的转基因皇竹草（实验组）与普通皇竹草（对照组）进行低温处理，鉴定两组之间的______差异。如果______，则说明获得了抗寒的皇竹草优质品种。

【推荐2】回答与植物转基因和植物克隆有关的问题：
(1)在用农杆菌侵染的方法进行植物转基因过程中，通常要使用抗生素，其目的一是抑制 _____生长，二是筛选转化细胞。当选择培养基中抗生素浓度 _____时，通常会出现较多假阳性植株，因此在转基因前需要对受体进行抗生素的 _____检测。
(2)为提高培育转基因植株的成功率，植物转基因受体需具有较强的 _____能力和遗传稳定性。对培养的受体细胞遗传稳定性的早期检测，可通过观察细胞内 _____形态是否改变进行判断，也可通过观察分裂期染色体的 _____，分析染色体组型是否改变进行判断。
(3)植物转基因受体全能性表达程度的高低主要与受体的基因型、培养环境、继代次数和 _____长短等有关。同时也与受体的取材有关，其中受体为 _____时全能性表达能力最高。

【推荐3】无核葡萄品质优良，但抗寒性差。我国科学家以中国野生葡萄资源中抗寒性最强的山葡萄为材料，对抗寒相关Va基因的功能展开相关研究。
(1)通过前期研究结果，科研人员推测Va基因的表达产物可能为转录因子。转录因子是一类有转录激活功能的蛋白，可以调控___________与启动子的结合。在PCR扩增Va基因的过程中需要添加引物，设计引物的原则是__________。
(2)为进一步验证Va基因的转录激活功能，科研人员利用pG载体首先构建了重组质粒，导入到敲除GAL4基因的酵母AH109菌株中，如图所示。GAL4基因可编码酵母中具有转录激活功能的蛋白，从而激活P启动子。AH109菌株为色氨酸、组氨酸缺陷型菌株，只有在添加相应氨基酸的培养基中才能生长。

①构建重组载体过程中，Va基因能与质粒连接的分子基础是____________。为了能够筛选得到重组酵母，培养基的配方为下列选项中的___________组，此外还需额外添加_____________，通过显色反应做进一步验证。
A组：不加色氨酸和组氨酸                           B组：加色氨酸和组氨酸
C组：加组氨酸，不加色氨酸                    D组：加色氨酸，不加组氨酸
②在下图中完善实验过程及对应结果：________

【推荐1】蜜蜂为社会性昆虫，由蜂王（2n=32）、雄蜂（n=16）、工蜂（2n=32）等个体组成。蜂群中的蜂王（雌蜂可育）与工蜂（雌蜂不育）均由受精卵发育而来，雄蜂（可育）由未受精的卵细胞直接发育而来。雄蜂产生精子的过程中会进行特殊的“假减数分裂”，其过程如下图所示，其中①~⑤代表过程，a~e代表细胞。请回答下列问题：

(1)②过程中，a细胞与正常蜂王的初级卵母细胞相比较，a细胞中不会发生______。④过程中，与蜂王的体细胞有丝分裂后期相比，d细胞发生的染色体的相同变化是______。
(2)蜜蜂正常眼与白眼受一对等位基因控制（A、a），且该等位基因位于常染色体上。一只白眼的雄蜂与正常眼蜂王杂交，部分卵细胞发生受精，获得F₁蜜蜂。F₁中雄蜂全是正常眼，工蜂全是白眼。则______性状受隐性基因控制，蜂王的基因型是______。
(3)以花粉、花蜜为食的蜜蜂幼虫将会发育成工蜂，幼虫发育成工蜂的机理如图所示。Dnmt3蛋白是Dnmt3基因表达的一种DNA甲基化转移酶，能使DNA某些区域添加甲基基团。若敲除幼虫细胞中的Dnmt3基因，幼虫都能发育成蜂王。

①Dnmt3基因控制生物性状的方式，说明基因可以通过控制______来控制代谢过程，进而控制生物的性状。
②科学研究发现蜜蜂在幼虫时期持续食用蜂王浆则发育为蜂王，推测其机理是______。

【推荐2】某种遗传病L受到一对等位基因A/a的控制，其致病基因a是由基因A编码序列缺失部分碱基产生的。通过对某家系（图1）的1～6号成员进行基因检测得到的电泳条带图如图2所示。若只呈现一条带，则说明只含有基因A或a；若呈现两条带，则说明同时含有基因A和a。图中成员的患病情况未标明，回答下列问题：

(1)基因A/a位于____染色体上，判断理由是____。8号个体的基因型可能是____。
(2)若该家系的1～6号成员中只有2号个体患遗传病L。据此分析，基因A对应的电泳条带是____。（填“基因①”或“基因②”）
(3)若7号个体表型正常，她与人群中正常男性婚配。
I．两人计划生育后代，7号个体进行了基因检测后，医生建议两人最好生育女孩。
据此分析，在图3中把7号个体基因检测最可能的结果的相图3应条带涂黑____。

Ⅱ．7号个体生育了一个女孩，但该女孩患有遗传病L。就医后，医生提出2种可能的解释：
原因一：父亲产生的某个精原细胞在减数分裂时发生了____而产生了含有基因a的精子，该精子与含有基因a的卵细胞进行受精作用而生育了该女孩。
原因二：父亲产生了含有基因A的精子，该精子进行受精作用而生育了该女孩，但基因A的启动子部分序列甲基化。根据前面所述信息继续分析，该女孩患遗传病的原因是____。

【推荐3】小鼠品系众多，是遗传学研究常用的实验材料，其性别决定方式为XY型。下面是关于小鼠某些性状的遗传实验，请分析回答：
(1)已知小鼠毛色的黄与灰由等位基因B、b控制，尾形的弯曲与正常由等位基因T、t控制，两对基因独立遗传。在毛色遗传中，具有某种纯合基因型的合子不能完成胚胎发育。从鼠群中选择多只基因型相同的雌鼠与多只基因型相同的雄鼠杂交，所得F₁的表现型及比例如下表所示，则：

	黄毛弯曲尾	黄毛正常尾	灰毛弯曲尾	灰毛正常尾
♂	2/12	2/12	1/12	1/12
♀	4/12	0	2/12	0

①控制尾形的基因T、t位于__________染色体上，判断的理由是__________。
②父本的基因型是__________。让F₁中表现型为黄毛弯曲尾的雌雄个体随机交配，则子代成熟个体中黄色正常尾的概率是___________。
③若F₁中出现了一只正常尾雌鼠，欲通过杂交实验探究这只雌鼠是基因突变的结果还是由环境因素引起的，请写出能达到这一目的杂交亲本的性状组合：___________。
(2)表观遗传是指DNA序列不改变，而基因的表达发生可遗传的改变。DNA甲基化是表观遗传中最常见的现象之一。小鼠的A基因编码胰岛素生长因子-2（IGF-2），a基因无此功能（A、a位于常染色体上）。IGF-2是小鼠正常发育必须的一种蛋白质，缺乏时小鼠个体矮小。在小鼠胚胎中，来自父本的A及a表达，来自母本的则不能表达。检测发现，这对基因的启动子在精子中是非甲基化的，在卵细胞中则是甲基化的。纯合矮小雄鼠与纯合正常雌鼠杂交，则F₁的表现型为___________。F₁雌雄个体间随机交配，后代F₂的表现型及其比例应为___________。