【推荐3】Ⅰ．转基因草莓中有能表达乙肝病毒表面抗原的基因，由此可获得用来预防乙肝的一种新型疫苗，其培育过程如图所示（①至④代表过程，A至C代表结构或细胞）。请据图回答：

（1）图中①过程用到的酶是_____________，所形成的B叫做_____________。
（2）②过程常用_____________处理农杆菌，使之成为____________细胞，利于完成转化过程。
（3）图中③过程需要用到的激素是_____________。
Ⅱ．黄瓜花叶病毒（CMV）是能侵染多种植物的RNA病毒，可危害番茄的正常生长并造成减产，研究人员通过农杆菌介导将该病毒外壳蛋白的cDNA导入番茄植株中，成功获得抗CMV的番茄植株。
（1）获得CMV的RNA后，需在_____________的催化下才能合成CMV外壳蛋白的cDNA。
（2）获得cDNA后，需先通过一定方法将其插入到农杆菌的________________片段中，然后将番茄子叶切段与该农杆菌共同培养，以实现对番茄细胞的转化。
（3）将经共同培养后的番茄外植体接种于含有卡那霉素和青霉素的选择培养基上培养一段时间，只有部分外植体生出愈伤组织。研究人员据此确定这些生出愈伤组织的外植体都已成功导入了cDNA，你认为他们做出以上判断的理由是________________________________。
（4）要想确定转基因番茄已经成功表达出CMV外壳蛋白，需要进行_______________________实验。
（5）若要验证转基因番茄具有较好的抗CMV能力，请写出实验设计思路：_____________________。转基因番茄自交，子代中抗性植株与敏感植株数量之比接近3：1，由此可以得出的结论是___________________（答出两点）。

【推荐3】HSV1是单纯疱疹病毒的一种类型，HSV1病毒颗粒的组装主要由包装信号序列（a′）介导。科研人员从HSV1基因组中分离出a′，利用基因工程技术构建了质粒pHSL并进行了相关实验（如图1），从而为某些神经系统疾病的基因治疗提供依据。请回答问题：
   
(1)从HSV1中分离a′时，将人工合成的含特定序列的核酸探针与含有目的序列的酶解片段进行_____，根据阳性信号逐步筛选出尽可能短的a′所在片段。
(2)构建质粒pHSL时，过程②需要用限制酶_____处理质粒pHSV和质粒pSK，处理后的产物经鉴定、纯化后用_____酶连接。结合本题，说出选择限制酶的方法：________________________
(3)步骤③将质粒pHSL导入大肠杆菌是因为质粒pHSL中含有_____，能在大肠杆菌细胞内复制而获得大量拷贝。
(4)Vero细胞系是从非洲绿猴的肾脏上皮细胞中分离培养出来的。进行Vero细胞培养时，通常采用添加了_____等天然成分的基本培养基提供营养。
(5)tsK株是具有感染性的HSV1温度敏感株。在tsK株的辅助下，pHSL能组装成不含完整病毒基因组的颗粒（假病毒），获得含假病毒和tsK株的混合毒株。图2是Vero细胞连续传代过程中，混合毒株的滴度变化曲线及每代中假病毒所占的比例（柱形图）。据图分析，应选用_____代混合毒株用于后续神经细胞的接种实验。
   
(6)为验证假病毒能否感染体外培养的神经细胞并表达Laz基因，科研人员将混合毒株与大鼠神经细胞按一定比例在_____℃下混合培养48h，用含_____的检测液原位检测β半乳糖苷酶的活性，结果发现大约20%的细胞变蓝，说明假病毒_____（能/不能）感染神经细胞，将外源基因Laz导入并表达。
(7)做实验分析题的一般思路是什么？____________

【推荐1】基因工程中的载体分为克隆载体和表达载体。克隆载体用来克隆和扩增DNA片段，而表达载体是使外源基因在宿主细胞中有效表达。图1为利用乳腺生物反应器生产某种药用蛋白过程中使用的一种载体，其中含有氨苄青霉素抗性基因（Amp^r）、四环素抗性基因（Tet^r）及多种限制酶的识别位点；图2为目的基因及限制酶的识别位点。回答下列问题：
   
(1)图1所示的载体为______载体，判断依据是__________________。
(2)质粒上一般具有两种抗生素抗性基因，且其中一个会因目的基因的插入而失活。这种双标记和插入失活能使____________（质粒）的受体细胞在含有抗生素的培养基中得以区分。
(3)构建重组质粒时不能使用SmaI的原因是________。限制酶的最好选择为______。
(4)重组质粒的受体细胞和目的基因表达的细胞分别是______，供体胚胎在受体内能够存活的最主要原因是_________________。

【推荐3】回答下列问题：
甜玉米与普通玉米相比，甜玉米中可溶性糖向淀粉的转化较慢含可溶性糖量高，汁多质脆，富含多种维生素。为了使甜玉米更有应用价值，科研人员通过转基因技术培育出了超量表达P蛋白转基因甜玉米。在超量表达P基因载体的构建中，所用DNA片段和Ti质粒的酶切位点如图所示。
（说明：强启动子是一段有特殊结构的DNA片段：BamHⅠ、HindⅢ、EcoRI、NotI、SacI代表不同的限制酶；T-DNA是农杆菌的Ti质粒上的DNA片段；）

(1)构建超量表达P基因载体，需选用________________限制酶的组合和DNA连接酶。
(2)为了特异性扩增P基因序列，一般要加入的原料为_______________，需根据_______________设计特异性引物。
(3)经农杆菌液浸泡过的玉米愈伤组织，超量表达P基因会随T-DNA_______________，从而获得转基因植物细胞。继而进行植物组织培养，培养能中需加入_______________进行筛选，筛选出的愈伤组织再分化形成丛芽，然后在_______________培养基上形成根，最终获得多个玉米株系。发现某株系的P蛋白表达量较低，请对该现象作出合理的解释：______________________________。

【推荐1】紫杉醇是红豆杉细胞中产生的一种高效抗癌物质，在植物体中含量极低。为取代从天然植株中提取紫杉醇的方式，可通过植物组织培养和细胞培养技术来获取。回答下列问题：
(1)获取的外植体需要先进行消毒处理，然后接种到______（固体/液体）培养基上通过_______________（脱分化/再分化）过程培养出愈伤组织，这一过程对光照的要求为_______________。
(2)紫杉醇是存在于红豆杉属植物体内的一种次生代谢物，可利用_______________技术实现其工业化生产。用少量果胶酶处理愈伤组织获取单细胞，在_______________（固体/液体）培养基中进行培养，可有效提高紫杉醇的产量。据下图分析，为获得最大紫杉醇总产量，最适合的2，4-D浓度应为_______________mg/L。

   

(3)多倍体愈伤组织细胞产生的次生代谢产物量常高于二倍体。若愈伤组织细胞（2n）经诱导处理后，观察到染色体数为8n的细胞，合理的解释是_______________。

【推荐2】应用细胞工程的知识，回答下列问题：
(1)A、B是染色体数目相同的两种二倍体药用植物，A含有效成分X，B含有效成分Y。某研究小组拟培育同时含有X和Y的新型药用植物。为了培育该新型药用植物，可取A和B的叶片，先用__________________酶去除细胞壁，获得具有活力的_____________，再用物理方法如_______________法诱导二者融合，形成的融合细胞经过脱分化培养形成愈伤组织，然后经过再分化形成完整的杂种植株。在再分化阶段，生长素和细胞分裂素参与了细胞分化方向的调节，与生根培养基相比，一般情况下生芽培养基中__________________。这种培育技术称为________________。
(2)上述杂种植株含有______个染色体组，该项技术的意义是__________________。
(3)美国化学家从红豆杉树皮中分离出高抗癌活性的紫杉醇，发现紫杉醇具有独特的抗肿瘤作用。如图是通过植物细胞工程技术获得紫杉醇的途径，据图回答问题：

①过程①需对外植体消毒，可以先后用_______________和_______________分别处理红豆杉外植体，消毒时既要能杀死材料表面的_______________，又要减少消毒剂对红豆杉细胞的伤害，以免将外植体也杀死。
②为达到高产紫杉醇的目的，有两种途径：
一是在培养基中添加某些既能促进愈伤组织细胞_______________，还能提高细胞合成紫杉醇能力的物质。
二是对愈伤组织进行诱变处理，由于愈伤组织一直处于_______________状态，因此对其诱变处理易获得突变细胞。
③过程①②③是否需要光照？ _______________，原因是______________________________。

【推荐3】乙肝表面抗原是乙肝病毒的蛋白质外壳，该蛋白质由乙肝病毒的乙肝表面抗原基因控制合成。利用乙肝表面抗原可以制成乙肝疫苗。科学家将乙肝表面抗原基因(SSI)导入双子叶植物马铃薯细胞中，成功获得了乙肝表面抗原，为乙肝疫苗的制备提供了新的途径。回答下列问题：
(l)在获得SSI基因后，若需要增加其数量，可以采用___ 技术进行扩增，该技术的前提是有____以便合成引物；该操作过程中需要将反应体系加热至90～95℃，其作用是____。
(2)将SSI基因导入马铃薯细胞之前，需要构建基因表达载体，该结构上启动子的作用是 _________。构建基因表达载体时，一般是将SSI基因插入到农杆菌的___上。
(3)通过筛选可以获得成功导入SSI基因的马铃薯细胞，然后利用____技术对该细胞进行培养可以获得转基因马铃薯植株；可以通过抗原一抗体杂交技术进行检测，若出现____，则说明该植株已产生乙肝表面抗原。