【推荐1】移植器官筛选和免疫抑制剂的应用，大大提高了器官移植的成活率，给需要移植器官的患者带来了希望。但供体器官短缺也是世界各国器官移植方面普遍存在的问题。人们寄希望于利用干细胞培养相应的组织、器官。同时，也寄希望于唤醒潜藏于人们心灵深处的爱心，有更多的人加入到自愿捐献器官的行列中来。请思考：
(1)干细胞培养组织、器官的原理是什么_________？
(2)干细胞培养组织、器官在器官移植方面有什么优势_______？

【推荐1】CRISPR/Cas9是目前应用最广泛的基因组编辑技术，能对DNA分子中的基因进行编辑，引入人们想要的基因或破坏已有的基因。使用该技术，需要向待编辑的细胞中加入以下主要组分：人工合成的向导RNA.和一种来自细菌的核酸酶Cas9蛋白。其原理是向导RNA与DNA分子中希望被编辑的序列通过碱基互补配对结合后，Cas9蛋白再结合上去将与向导RNA结合的DNA进行切割，使DNA双链断裂，过程如下图所示。回答下列问题：

(1)据图推测Cas9蛋白切断的化学键是____。
(2)当DNA双链断裂后，可导入目的基因，目的基因的导入往往需要利用基因工程方法构建基因表达载体，基因表达载体上除了含有目的基因和标记基因，还必须有____（写出两项即可）。
(3)目的基因在与运载体结合前需要用PCR技术进行大量扩增，该过程需要Taq酶，该酶与普通DNA聚合酶相比，特点是____。获得PCR产物后，常用____电泳法对PCR产物进行鉴定。
(4)与传统的限制酶切割基因技术相比，CRISPR/Cas9基因编辑技术的明显优点是____。

【推荐2】PCR技术应用非常广泛，可用于扩增目的基因，制作探针，引入定点突变，定量检测DNA等。完成下列有关PCR技术和相关应用的问题：
(1)PCR技术可用于基因工程四个基本步骤中的______________步骤。
(2)在影响扩增反应的各种因素中，引物的设计最为重要，引物的3'端应采用简并密码较少的氨基酸的对应核苷酸序列，否则会导致扩增的非特异性序列数量__________。
(3)在正常变性和退火之后研究某TaqDNA聚合酶的催化效率，得到了下列表格：

	22℃	37℃	55℃	70℃	78℃	83℃
子链延伸速率(个核苷酸·秒·酶分子-1)	0.25	1.5	22	60	250	0

83℃下没有产物的原因是__________。
(4)PCR反应后期，由于__________等原因，反应速率会降低。
(5)PCR过程中，温度的控制至关重要，变性温度过低会因为___________，最终都会导致反应效率降低。退火温度过高则会因___________导致目标产物的量______________。
(6)不对称PCR是利用不等量的一对引物来产生大量单链DNA的方法。这两种引物分别你为限制性引物与非限制性引物，其最佳比例一般为1：50~1：100，在PCR反应的最初10-15个循环中，其扩增产物最初主要是双链DNA，但当限制性引物消耗完后，非限制性引物引导的PCR就会产生大量的单链DNA。假设反应体系中原来有a个模板DNA，最初10个循环扩增产生双链DNA，后20个循环均只扩增一条链，则需要限制性引物__________个，需要非限制性引物___________个。因为双链DNA和单链DNA的分子量大小不同，可通过__________方法将其分离。

【推荐3】人胰岛素基因表达的最初产物是一条肽链构成的前胰岛素原，经加工后形成两条肽链（A链和B链）的有生物活性的胰岛素。此后科学家又提出了利用基因工程改造大肠杆菌生产人胰岛素的两种方法：“AB”法是根据胰岛素A、B两条肽链的氨基酸序列人工合成两种DNA片段，利用工程菌分别合成两条肽链后将其混合自然形成胰岛素；“BCA”法是利用人体某细胞中的mRNA得到胰岛素基因，表达出胰岛素原后再用特定酶切掉C肽段。这两种方法使用同一种质粒作为载体。请据下图分析并回答下列问题：

(1)“BCA”法是利用人体__________细胞中的mRNA，再由mRNA经__________得到的胰岛素基因，__________（填“AB”、“BCA”或“AB和BCA”）法获取的目的基因中不含人胰岛素基因启动子。
(2)如图是利用基因工程生产人胰岛素过程中使用的质粒及目的基因的部分结构。为使目的基因与载体正确连接，在设计PCR引物时可添加限制酶__________的识别序列，PCR引物应该添加在识别序列的__________（填“3′或5′”）端。通过上述方法获得人的胰岛素基因后，需要通过PCR技术进行扩增，若计划用1个胰岛素基因为模板获得m（m大于2）个胰岛素基因，则消耗的引物总量是__________个。模板序列中的的GC含量越高，对PCR过程中的__________步骤（写出具体过程）影响最大，越__________（填“有利于”或“不利于”）目标DNA的扩增。
(3)PCR扩增的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定，下列叙述中正确的有__________。

A．PCR反应体系中需加入耐高温的DNA聚合酶，该酶主要在退火过程起作用

B．待测样品中DNA分子的大小和构象、凝胶的浓度等都会影响DNA在电泳中的迁移速率

C．进行电泳时，带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动

D．琼脂糖溶液中加入的核酸染料利于DNA在紫外灯下被检测

(4)β-半乳糖苷酶可以分解无色的X-gal产生蓝色物质使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。经__________处理大肠杆菌后，与重组质粒混合培养一段时间，将大肠杆菌接种到添加了__________和X-gal的培养基上筛选出__________色的菌落即为工程菌种。

【推荐1】我国某些地区常年干旱少雨，将小麦耐旱基因TaLEA3导入到不耐旱的药用植物丹参中，可提高后者的耐旱性。回答下列问题：
（1）TaLEA3基因是种子成熟后期大量表达的一类基因，请推测该基因所表达蛋白的主要功能是____。（答出两点即可）
（2）为确认该耐旱基因是否在再生植株中正确表达，应检测此再生植株中该基因的____________，如果检测结果呈阳性，再在田间试验中检测植株的________________是否得到提高。
（3）假如用得到的二倍体转基因耐旱植株自交，子代中耐旱与不耐旱植株的数量比为3∶1时，则可推测该耐旱基因的整合情况是_______________________。
（4）叶绿体内大多数基因的排列方式、转录与翻译系统均与________________________（填“原核生物”，“真核生物）相似，将目的基因导入到叶绿体基因组内能避免传统基因工程所带来的基因污染，其原因是_________________。

【推荐2】将野生型谷氨酸棒状杆菌利用同源重组(将外源目的基因与受体的同源序列交换)的方法敲除葡萄糖转运系统关键酶基因 ptsG，可以实现葡萄糖转运阻断，为分子水平研究葡萄糖转运提供参考。ptsG 基因敲除质粒构建过程如图1 所示，其中 KanR 是抗生素抗性基因，SacB 是将蔗糖转变为果聚糖的基因，果聚糖积累对细菌有毒害，XhoI、EcoRI的识别序列和切割位点分别是——C↓TCGAG——、——G↓AATTC——。据此回答下列问题:

(1)图1中利用PCR获得上同源臂或下同源臂区段至少需要扩增_______轮。从引物角度分析，扩增得到上、下同源臂能拼接到一起的关键是_______。ptsG 基因敲除质粒构建过程中，选用XhoI和 EcoRI双酶切的优点是________。
(2)将敲除 ptsG基因质粒导入工程菌中能实现扩增。在工程菌筛选时，可分别接种到含卡那霉素培养基、含 10%蔗糖培养基，________(填“仅能在含卡那霉素”“仅能在含 10%蔗糖”或“两种”)培养基上生长的为目的菌。
(3)将敲除 ptsG 基因质粒导入野生型谷氨酸棒状杆菌，通过同源重组可敲除 ptsG 基因(如图2)。
①两次同源重组共有_______个磷酸二酯键的断裂(或合成)。验证同源重组是否成功，可以设计特定的引物进行PCR，通常将扩增产物利用_______方法鉴定。
②若从细胞水平上证明谷氨酸棒状杆菌的ptsG基因敲除成功，还需要将该菌和野生型谷氨酸棒状杆菌分别培养在___________的培养基上，该菌对葡萄糖的利用率明显比野生型菌_____。

【推荐3】在人体内胰岛素基因表达可合成出一条称为前胰岛素原的肽链，此肽链在内质网中经酶Ⅰ切割掉氨基端一段短肽后成为胰岛素原。进入高尔基体的胰岛素原经酶Ⅱ切割，去除中间片段C后，产生A、B两条肽链，再经酶Ⅲ作用生成由51个氨基酸残基组成的胰岛素。   目前，利用基因工程技术可大量生产胰岛素。
（1）人体细胞内合成前胰岛素原的细胞器是_______。胰岛素原由内质网运输到高尔基体，体现了生物膜具有_______性。
（2）你认为酶Ⅰ～Ⅲ是否为同种酶？_______。你作出此判断的理由是_______。
（3）利用基因工程技术生产胰岛素原过程中：
①可根据胰岛素原的氨基酸序列，设计并合成编码胰岛素原的_______序列，用该序列与_______构建胰岛素原基因重组表达载体。根据DNA的结构及组成，分析不同物种的DNA能拼接在一起的原因是_______。
②将重组表达体导入工程菌内，诱导目的基因表达。用胰岛素原的_____（填“抗体”或“抗原”）检测工程菌的提取物。若提取物发生反应，则用该工程菌进行_____（填“液体”或“固体”）发酵。

【推荐1】从2019年底爆发的突发公共卫生事件受到了国际上的广泛关注。2020年2月7日，国家卫健委决定将“新型冠状病毒感染的肺炎”暂命名为“新型冠状病毒肺炎”，简称“新冠肺炎”。2月11日，世界卫生组织（WHO）总干事谭德塞在日内瓦的全球研究与创新论坛上宣布，将其英文正式命名为Corona Virus Disease 2019（COVID-19），其中“Co”代表“冠状”，“Vi”为“病毒”，“D”为“疾病”。新冠肺炎是一种急性感染性肺炎，其病原体是一种先前未在人类中发现的新型冠状病毒，即2019新型冠状病毒（2019-nCov）。患者初始症状多为发热、乏力和干咳，并逐渐出现呼吸困难等表现，部分严重病例可能出现急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒和凝血功能障碍，甚至死亡。目前，针对病原体的有效抗病毒药物还未研制成功，仍然以隔离治疗、对症治疗为主。2019-nCov进入机体后引发一系列的免疫反应，就所学知识，回答下列问题：
(1)2019-nCov侵入人体内，首先要突破保卫人体的第一道防线和第二道防线，这两道防线人人都有，也不针对某一类特定病原体，因此叫做________________。2019-nCov突破前两道防线后，通过与宿主细胞膜表面的_______特异性结合，从而进入细胞，靠____________裂解靶细胞。
(2)感染2019-nCov后，人体内环境会发生以下改变：
①肺炎患者出现持续高热现象，是由于机体的产热量_______散热量（填“大于”、“等于”或“小于”），位于________的体温调节中枢调节功能受阻。
②患者有脱水症状，脱水会导致渗透压______（填“上升”或“下降”），_______（填激素名称）分泌增多，其作用是__________________，从而使尿量减少；同时__________（填中枢名称）产生渴感，进行主动饮水行为。
(3)疫区的人们采取了以下措施，其中属于切断传播途径的是_________。
①紧急封城，隔离病人       ②使用一次性口罩、手套和防护服③接种疫苗      ④用紫外线、福尔马林等对室内外环境进行消毒

【推荐2】迄今新型冠状病毒仍在肆虐全球，初步研究表明，新型冠状病毒通过其表面的S-蛋白与人细胞膜上的受体识别，感染人的呼吸道上皮细胞。请分析回答问题：
(1)新型冠状病毒表面的S-蛋白作为_________刺激淋巴细胞，使机体产生_________性免疫反应， 感染病毒后，免疫系统对肺细胞强烈攻击引发肺炎，此时可通过适度使用_______________对病人进行治疗，使其免疫功能下降，以避免肺部严重受损。感染该病毒后人体会发烧，人体发烧体温升高的直接原因是_______________。
(2)在控制新冠肺炎患者的病情中，T细胞发挥着重要作用。T细胞在人体内发育成熟的场所是____________，T细胞除了参与体液免疫外，在抗病毒感染过程中还参与________________过程。
(3)该类病毒侵入人体后，在体液中机体需要借助_________细胞产生的抗体，该细胞不具有识别抗原能力的原因主要是_____________________。

【推荐3】下图 1 为某细胞的亚显微结构模式图；图 2 是细胞膜内陷形成的囊状结构即小窝，与细胞的信息传递等相关。请据图回答下列问题：

(1)图 1 细胞是动物细胞还是植物细胞？___________，判断理由是_______________________。细菌细胞与该图所示的细胞比较，其根本区别是__________________________________。从化学成分角度分析，新型冠状病毒（SARS-CoV-2）与 图1 中结构_____________（填写序号）化学组成最相似。
(2)图 1中参与图2小窝蛋白形成的细胞器有 __________（填写序号）。
(3)小窝蛋白中的某些氨基酸在一定的激发光下能够发出荧光，当胆固醇与这些氨基酸结合，会使荧光强度降低。为研究小窝蛋白中间区段与胆固醇的结合位点，分别向小窝蛋白的肽段 1（82～101 位氨基酸）和肽段 2（101～126 位氨基酸）加入胆固醇，检测不同肽段的荧光强度变化，结果如 图 3，据图可知小窝蛋白中间区段与胆固醇的结合位点在____________（填“肽段1”或“肽段2”）中。

(4)当小窝中结合的胆固醇过少时，小窝蛋白的 __________结构改变，小窝会变扁平，影响细胞的信息传递功能。