某病毒对动物养殖业危害十分严重。我国学者拟以该病毒外壳蛋白A为抗原来制备单克隆抗体，以期快速检测该病毒，图1为其主要技术路线，图2为A基因和载体及有关限制酶的识别序列。基因A为0.98kb。
       

名称	识别序列及切割位点	名称	识别序列及切割位点
HindⅢ	A↓AGCTTTTCGA↑A	EcoRⅠ	G↓AATTCCTTAA↑G
PvitⅡ	CAG↓CTGGTC↑GAC	PstⅠ	CTGC↓AGGA↑CGTC
KpnⅠ	G↓GTACCCCATG↑G	BamHⅠ	G↓GATCCCCTAG↑G

回答下列问题：
(1)为构建重组载体，需先设计引物，通过PCR特异性扩增A基因。用于扩增A基因的引物需满足的条件是___________、为使PCR产物能被限制酶切割，需在引物的___________端（3’或5’）添加相应的限制酶识别序列，由图可知在A基因的两端应添加___________和___________两种不同限制酶的识别序列。这样就方便后面用这两种限制酶进行酶切，相比用同一种酶，该方法的优点在于___________（答出2点）。经过这两种酶酶切的A基因和载体连接时，可选用___________（填“E.coliDNA连接酶”或“T₄DNA连接酶”）
(2)将转化后的大肠杆菌接种在含氨苄青霉素的培养基上进行培养，随机挑取单菌落（分别编号为1、2、3、4）培养并提取质粒，用（1）中选用的两种限制酶进行酶切，酶切产物经电泳分离，结果如图3，可知___________号菌落的质粒很可能是含目的基因的重组质粒。
   
(3)基因工程常用大肠杆菌作为受体细胞，是因为其具有___________等优点。般需用___________处理大肠杆菌细胞，以便将重组质粒导入其中。由图1可知，该转基因工程菌中的重组质粒是________（填“克隆载体”或“表达载体”）
(4)下列说法错误的有哪几项

A．与小鼠骨髓瘤细胞融合前，已免疫的脾细胞需要通过原代培养扩大细胞数量。

B．单克隆抗体筛选中，将抗体与该病毒外壳蛋白进行杂交，其目的是通过抗体检测呈阳性来获得分泌所需抗体的杂交瘤细胞。

C．进行酶切产物电泳时，加样孔一端朝向正极。

D．停止电泳后用0.1%的亚甲基蓝溶液对凝胶进行染色，染料使用后按规定灭菌后再废弃。