【推荐2】我国中科院科学家经过长达10年不懈努力，从野生玉米“大刍草”中，成功找回玉米人工驯化过程中丢失的一个控制高蛋白含量的优良基因THP9，克隆出来并将此高蛋白基因转移到玉米细胞内，获得转基因高蛋白玉米新品种。请回答相关问题：

EcoRⅠ	BamHⅠ	KpnⅠ	MfeⅠ	HindⅢ

(1)THP9基因游离的磷酸基团侧为______（“5”或“3”）端，已知图中THP9基因转录方向为从左往右，则TPH9基因转录时的模板链是______链。
(2)构建基因表达载体时，若科研人员需将THP9基因整合到如图质粒上，应使用限制酶______切割图中质粒，使用限制酶______切割图中含THP9基因的DNA片段，以获得能正确表达THP9基因的重组质粒。这些限制酶一般来源于原核生物，它们不会切割其本身DNA分子的原因可能是其DNA分子中不存在该酶的识别序列或______。
(3)为了筛选出含重组质粒的受体细胞，应在添加______的选择培养基上培养，培养后获得的菌落不能判定是否含有重组质粒，原因是______。
(4)研究人员常用DNA分子杂交技术检测THP9基因有没有整合到受体细胞的染色体DNA上。检测时常使用______标记的目的基因单链片段作为探针。不对称PCR能够大量制备单链DNA片段，其基本原理是采用不等量的一对引物，经若干次循环后，低浓度的引物（限制性引物）被消耗尽，以后的循环只产生高浓度引物（非限制性引物）的延伸产物，结果获得大量单链DNA（ss-DNA）。若反应体系中原有100个模板DNA，最初10个循环后限制性引物耗尽，再进行20个循环，理论上可制备ss-DNA______（用科学记数法表示）个，该过程中ss-DNA的产生量主要受______的影响。
(5)为了检测转基因玉米新品种的培育是否成功，科研工作者在个体水平上的检测方法是______。

【推荐3】中国是香蕉的原产地之一，已有2000多年的栽培历史。香蕉在生长过程中会遇到多种病害，如由病毒引起的香蕉束顶病、由炭疽菌引起的香蕉炭疽病，从而影响其产量和品质。回答下列问题。
(1)为防治香蕉束顶病，科研人员利用植物组织培养技术培育脱毒香蕉。培养时，常选用香蕉植株的茎尖作为外植体，原因是___________；消毒后的外植体需要接种在___________(填“固体”或“液体”)培养基上；在培养过程中一般要用愈伤组织培养基、发芽培养基和生根培养基，这三种培养基在成分上最主要的区别是___________。
(2)研究发现，酵母菌对香蕉炭疽病具有很好的防治效果。科研人员对酵母菌进行纯培养时，为了检测培养基是否出现杂菌污染，应将___________都放入恒温培养箱进行培养。
(3)科研人员常用PCR技术对香蕉果实病害进行快速检测。在操作时，要根据病原体的一个特殊基因(如图所示)两端的碱基序列设计引物。引物的结合部位是___________(用图中数字作答)。若已知该基因引物I的碱基序列，能否依据其设计出引物Ⅱ？理由是___________。

   

【推荐1】日本福岛核污染水，于2023年10月23日已完成第二轮排海，总量为7810吨。受到放射性污染的核污水排放入海，将对全球生态环境造成重太影响。某小组从耐辐射奇球菌中克隆出抗胁迫调节基因(pprI基因)，研究转基因油菜对放射性污染物¹³³Cs(铯)的吸收能力，结果如下表。完成下列各题：

133Cs浓度(mmol·kg-l)	非转基因		转基因
	地上部分含量(mg‧g-l)	根系含量(mg‧g-l)	地上部分含量(mg‧g-l)	根系含量(mg‧g-l)
0.5	1.39	1.73	1.24	2.11
1.0	2.79	4.42	2.3	4.59
5.0	6.30	6.37	4.58	9.69
10	8.77	10.02	7.55	12.54

(1)DNA重组技术中所用的质粒载体具有一些特征，如质粒DNA分子上有标记基因(如某种抗生素抗性基因)，利用抗生素可筛选出含质粒载体的宿主细胞。方法是_________。
(2)构建基因表达载体时，通常采用___________(酶)将pprI基因与Ti质粒连接成重组质粒。利用分子杂交技术检测发现，某些受体植物细胞中的pprI基因无法转录，其原因可能是___________。
(3)由表可知，对¹³³Cs污染的土壤进行生物修复时，应优先选择转pprI基因油菜，其原因在于_____。
(4)耐辐射奇球菌对电离辐射、紫外线、干旱、盐碱等胁迫环境的极强抗性与pprI基因有关。据此请写出该基因在生活生产中的应用___________(写出两项即可)。

【推荐2】新冠疫苗能有效预防新冠肺炎。目前中国已经上市的疫苗中有重组蛋白疫苗和重组腺病毒载体疫苗等。科研人员选择了SARS-CoV-2的S蛋白基因通过转基因技术制备了重组蛋白疫苗和腺病毒载体疫苗（如图所示）。回答下列问题：

(1)据图1可得到含有多个限制酶切位点的S蛋白基因序列，若要在短时间内获得大量的S蛋白基因，可采取的方法是_________，该方法的实质是进行_____________。该过程需要人工合成部分核苷酸片段，合成的该片段具有的特点是______________（答两点）；若合成的该部分核苷酸片段过短，可能带来的影响是_______________。
(2)获得足够量的S蛋白基因后须构建基因表达载体，其目的是_______________。如图2是相关的质粒，要保证S蛋白基因的正确表达，需选用_______________和HindⅢ酶进行切割，且不破坏标记基因。
(3)重组腺病毒载体疫苗是把腺病毒中原有与复制相关的基因剔除，替换为新冠病毒S蛋白的基因。与重组蛋白疫苗相比，重组腺病毒载体疫苗对新冠肺炎的预防效果更好，从免疫的角度分析，原因是______________。

【推荐3】人血清蛋白在临床上需求量很大，通常从人血中提取，可利用转基因技术将人的血清白蛋白基因转入奶牛体内后，从转基因奶牛的乳汁中提取人血清白蛋白。回答下列问题：
（1）对获得的人血清白蛋白基因常用___________技术扩增其数量，该过程中用到的DNA聚合酶区别于其他酶的显著特点是____________________。
（2）基因工程的核心步骤是构建基因表达载体，其中____________位于基因的首端。将人血清白蛋白基因导入受精卵的常用方法是________________。
（3）体外受精前需要对奶牛的精子进行__________处理。通常用激素处理代孕母奶牛和供体母奶牛，使其生理条件达到同步，称为_____________处理。
（4）早期胚胎发育到_______阶段即可移植到代孕奶牛体内，移植后的胚胎能在受体子宫内存活的生理基础是_____________________。

【推荐1】2019年新冠疫情爆发以来，疫情防控成为社会关注的热点问题。下图所示某科研团队运用基因工程研制新冠病毒疫苗的过程。质粒中lacZ基因编码的酶可以分解X-gal产生蓝色物质，使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。回答下列问题：

(1)获取目的基因时，首先提取新冠病毒的RNA，再通过______过程获得cDNA（互补DNA），并可借助特异性引物通过PCR扩增图中的片段，PCR的原理是______，其中引物的作用是_____，若一个含有目的基因的DNA扩增n代，则共消耗________对引物。
(2)图中过程①有两种限制酶选择方案（注：图中几种限制酶切割产生的末端不同）：方案一：选用____一种限制酶；方案二：选用_______两种限制酶；方案二优于方案一的原因是______。
(3)将重组质粒导入大肠杆菌之前，需要用一定浓度的Ca²⁺处理大肠杆菌，使细胞处于_______。筛选含重组质粒的大肠杆菌时，须在培养大肠杆菌的通用培养基中加入_______，培养一段时间后，挑选出______色的菌落进一步培养获得大量目的菌。

【推荐2】某科研小组从土壤菌株A、B中分离到同源性为93%的Btl抗虫基因和Bt2抗虫基因的编码序列，并运用交错延伸PCR技术获得了抗虫性能强的重组Bt基因，并将其成功导入烟草，过程如图所示。回答下列问题：
   
注：交错延伸PCR：基因Btl和Bt2均作为模板，所需引物相同，图中仅示其中一条链的延伸情况。
(1)启动子是______酶的识别并结合部位，驱动基因转录。引物的作用是____。图中交错延伸PCR前，需要进行复性，复性的温度一般为_____℃左右。通过交错延伸PCR获得的重组Bt基因同时具有Bt1和Bt2基因序列的原因是第一轮以Bt1为模板合成的子链片段在第二轮复制时，作为引物结合到______（填“Btl”或“Bt2”）的模板上继续合成子链，经多轮交错循环扩增，使产物同时含有两种基因的序列。
(2)过程③将构建好的基因表达载体导入农杆菌细胞并用农杆菌感染植物细胞。筛选含有重组Bt基因的细胞的方法是________。
(3)过程⑤需要照光培养，原因是______。过程④和过程⑤需要用到愈伤组织培养基，发芽培养基和生根培养基。在设计这三种培养基时最主要的区别是_____。

【推荐3】苎麻俗称“中国草”，苎麻纤维所制纺织品具有挺括凉爽、易洗快干、牢固舒适等特点，颇受国内外消费者青睐。
(1)苎麻的β-葡糖基转移酶能催化纤维素合成，该酶能提高反应速率的机理是_______。
(2)几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入苎麻体内，可增强其抗真菌病的能力。
①若要从真菌细胞中提取几丁质酶所需的mRNA，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是_________。
②以mRNA为材料可以获得cDNA，其原理是__________。
③若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是__________。

(3)为解决苎麻纤维颜色单一的问题，科研人员利用基因工程对苎麻进行了改良，其基本流程如下图。请分析回答下列问题：
①构建重组质粒时，需要用到限制酶和DNA连接，质粒的③端会和切出的目的基因的______端 (填①或②) 相连接。DNA连接酶催化形成的化学键是_________。
②某同学在用PCR技术获取蓝色色素基因B的过程中，在PCR反应体系中加入了DNA聚合酶、引物等，还加入了序列甲作为_________，加入了______作为合成DNA的原料。
③若要使几丁质酶基因在受体细胞中表达，采用农杆菌转化法的目的是__________。
④苎麻茎尖细胞通过植物组织培养获得完整植株的过程，有力地证明了即使高度分化的细胞仍具有______性。

【推荐1】某植物的A基因是一个受低温等因素诱导表达的基因，其表达产物A蛋白是该种植物获得耐寒性不可或缺的一种防冷冻蛋白。科研小组欲利用A基因培育转基因抗冻番茄新品种。A基因上的两个限制酶切割位点及载体结构如图所示，回答下列问题：

   

(1)研究人员用限制酶EcoRⅠ切出的末端Ⅰ为   ，用限制酶SmaⅠ切出的末端Ⅱ为   ，请依次写出这两种限制酶的识别序列，并用箭头标出切割位点___、___。
(2)利用PCR扩增目的基因时，需向反应体系中加入两种引物，引物的作用是___。图中启动子的作用是___。
(3)A基因转录时以图一中α链为模板链，mRNA自身的延伸方向为（5'—3'。A基因应插入图二中___（填“启动子甲”或“启动子乙”）的下游，并且酶切位点___（填“1”或“2”）离该启动子更近些。
(4)基因工程育种与杂交育种相比具有___的优势，与诱变育种相比具有___的优势。
(5)为使甘蓝具有抗除草剂能力，科研人员将除草剂草甘膦抗性基因转入甘蓝植株，获得抗草甘膦转基因甘蓝。回答下列问题：

a.草甘膦抗性基因一条链的两端序列如图1所示，采用PCR技术获取和扩增草甘膦抗性基因时应选用的2种引物序列是___（标出5'端和3'端）。若初始加入1个草甘膦抗性基因，则历经4次PCR循环需要消耗引物数量为___个。
b.图2中步骤③将农杆菌与甘蓝愈伤组织共培养后，在步骤④的培养基中添加___以便筛选出含目的基因的甘蓝植株。添加此抗生素而不选用添加另一种抗生素筛选的原因___。
c.若要检测转基因甘蓝植株是否产生抗除草剂蛋白，所用的方法是___。

【推荐2】基因工程是花卉培养中的一种重要技术手段，这能够培养出不少新品种的花卉。如图为利用矮牵牛花中编码3，5－羟氧化酶的基因（HE）改造玫瑰，培育能够产生蓝色花冠玫瑰的新品种的技术流程图。图中Tet^R、Amp^R、NPTⅡ分别表示四环素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因、氨基糖苷类－3－磷酸转移酶基因。请分析回答下列问题：
   
(1)基因工程的核心步骤是____________。
(2)从矮牵牛花细胞中获得目的基因后，对其扩增的技术叫____________，这种技术手段需要用到的一种特殊工具酶是____________。若初始加入1个目的基因，则历经4次PCR循环需要消耗引物数量为______________个。
(3)根据图示分析，为了便于后期筛选成功导入大分子A的农杆菌，选择的限制酶的种类是____________，农杆菌侵染玫瑰茎尖愈伤组织细胞后在转化过程中表现出的特点是________________________。
(4)构建基因表达载体时，一般将目的基因插在启动子和终止子之间，其中启动子的作用是作为____________酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终表达出人类所需蛋白质。
(5)成功导入大分子A的农杆菌在含四环素培养基、含氨苄青霉素培养基、同时含两种抗生素的培养基上的生存状况应是____________。
(6)检测HE是否成功插入到染色体DNA上，检测方法是采用____________。

【推荐3】下图是通过生物工程技术生产抗体的两种途径，据图回答下列问题：

（1）生产抗体1和抗体2所用的工程技术名称分别是_________和_________。
（2）①过程类似于植物组织培养技术中的_______过程。与纤维母细胞的全能性相比，诱导干细胞的全能性比较______________。
（3）②过程产生的细胞在结构和功能上产生差异的根本原因是____________。
（4）③过程通常使用灭活的病毒诱导融合的原理是_____________________________。
（5）通过⑦过程获取的目的基因与基因组文库中的基因相比，该基因在结构上的特点是_____________。获取目的基因后可以利用PCR技术进行扩增，利用该技术扩增目的基因的前提是______________，以便合成引物，且利用热变性原理，通过控制_____________来控制双链的解聚与结合。
（6）④和⑩过程均需要筛选，其目的分别为_________和_________。
（7）采用蛋白质工程技术对该抗体进行改造，直接操作的对象是_____。正确顺序是(用数字表示)：_______
①推测新抗体的氨基酸序列和基因的核苷酸序列；
②新抗体的功能分析和结构设计；
③新抗体基因的修饰(合成)：
④表达出新抗体。