【推荐1】利用转基因技术使外源DNA片段在组织或器官中特异性表达的转基因生物叫生物反应器。请回答下列问题：
（1）利用转基因动物生产生长激素时，若要使生长激素在动物的乳汁中批量生产，应选择性染色体组成为____________的哺乳动物的____________作为受体细胞。
（2）外源基因在血液中表达的转基因动物叫血液生物反应器，血液生物反应器中的转基因产物应从____________中提取。不宜用血液生物反应器生产动物激素，原因是____________。
（3）叶绿体生物反应器是通过将目的基因导入叶绿体基因组实现的，叶绿体基因组有基因区和基因间隔区，为了保证原有基因的功能不受影响，外源基因应导入_________区。叶绿体基因工程能避免外源基因随花粉扩散，原因是____________。

【推荐2】基因敲除是根据DNA重组原理发展起来的一门新兴技术。通常用设计好的DNA片段替代动物细胞内的基因片段，从而达到基因敲除的目的。运用基因敲除技术构建基因敲除动物模型是研究基因功能中较为普遍的一种方法，其基本原理如下图所示。

请回答下列问题：
(1)在将目的基因导入受体细胞前，需要构建一个基因表达载体。一个理想的基因表达载体，通常由启动子、终止子、目的基因和____________等四部分组成。在此过程中，所需使用的相关工具酶是____________________。
(2)如果要获得一只含目的基因的小鼠，则选择的受体细胞通常为______________，基因导入该细胞时，可以采用____________________等方法。
(3)上述途径所获得的动物，其后代并非每一个个体都含目的基因，原因是_______。
(4)假设通过基因敲除构建了一个非球形红细胞性贫血（Ⅱ型）模型动物，该动物因丙酮酸激酶缺陷或葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PD）缺陷，使红细胞膜变化引起红细胞自溶现象，但若向该动物注射ATP后，自溶现象可明显降低。由此可表明，基因对生物性状的控制方式之一是：____________________。
(5)某实验小组向正常小鼠胚胎细胞内导入某“X基因”后，发现靶基因能正常转录形成mRNA,但细胞内却不再合成相应蛋白质，其原因最可能是______________。

【推荐3】2015年，屠呦呦因发现青蒿素治疗疟疾的新疗法而获得诺贝尔奖。工业上青蒿素一般从黄花蒿中提取，产量低，价格高。基因工程和细胞工程等技术为培育出含青蒿素高的黄花蒿提供了思路。科学家先通过紫外线处理大量黄花蒿幼苗后，偶然发现了一株高产植株通过基因测序发现该高产植株中与青蒿素合成相关的一种关键酶的基因发生了突变。
（1）提取了高产植株的全部DNA后，可以采用PCR技术快速扩增以大量获得该突变基因。PCR扩增时每一个循环分为_______________三步，使突变基因序列呈指数增加。
（2）将获得的突变基因导入普通黄花蒿之前，先构建基因表达载体，构建基因表达载体的目的是________________________，基因表达载体中，驱动突变基因转录的结构为________________________。
（3）将突变基因导入受体细胞除花粉管通道法外，还有____________法；该方法主要通过质粒上的____________能整合到侵染细胞的染色体DNA上的特点来实现基因的转移。
（4）含有突变基因的受体细胞经组织培养过程能够长成植株，根本原因是________________________。

【推荐1】动物乳腺组织具有较强的合成蛋白的功能，如能利用转基因技术将外源基因转入动物体内，就有可能生产出大量的药用蛋白。下图中甲是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线，图乙是用于构建基因表达载体的质粒和目的基因示意图，箭头表示相关限制酶的酶切位点。图丙列出了几种限制酶识别序列及其切割位点。请回答下列问题：

(1)如果将图乙中的质粒进行改造，插入的Sma Ⅰ酶切位点越多；质粒的热稳定性__________，原因是__________。
(2)图中将人乳铁蛋白基因插入质粒，如果使用单酶切法，应该选用_____________同时酶切质粒和人乳铁蛋白基因；如果使用双酶切法，应该使用____________两种限制酶同时酶切质粒和人乳铁蛋白基因，双酶切法的优点有__________。
(3)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入__________酶。重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了_______________。
(4)如果将人乳铁蛋白基因大肠杆菌中进行表达，表达的蛋白通常因为缺少翻译后修饰而不具备生物活性，这是因为____________。构建乳腺生物反应器来表达外源蛋白，其优点是____________。
(5)图甲过程①可采用的操作方法是__________。该雌性转基因牛经与普通雄性个体交配所产的雌性后代不一定能分泌含人乳铁蛋白的乳汁，原因是___________。

【推荐2】研究者运用基因工程手段将SLA-2基因进行改造并在猪肾上皮细胞（sT2细胞）中表达。实验的主要流程如图1，图1中SLA-2基因长度为1100bp，质粒B的总长度为4445bp，其限制酶切点后的数字表示距复制原点的距离。图1中的限制酶的识别序列及切割位点如图2所示。请回答：

(1)对SLA-2基因进行PCR时下列4种引物中应选择的是___。

A．5'-GCGATCATGCGGGTCAGGGCCCCTCAAGCCATCCTC

B．5'-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGA

C．5'-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCT

D．5'-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGGTCCTTGGTAAGGG

(2)控制表达载体大量扩增的组成元件是___。
(3)若用Sau3AI和XbaI完全酶切质粒C后，获得的DNA片段长度为___（不考虑PCR时所用的引物长度对结果的影响）。
(4)科研中常用嘌呤霉素对真核细胞进行筛选，一般选择最低致死浓度的前一个浓度作为筛选浓度的原因是：既可以让没有抗性的细胞死亡又不会让具有抗性的细胞死亡。用没有抗性的细胞实验，实验结果如下图3，根据实验结果最佳的嘌呤霉素筛选浓度为___。

(5)过程⑦研究人员用___（填物质）检测肾上皮细胞生产的抗原肽。

【推荐1】利用基因工程手段构建重金属富集植物是修复土壤重金属污染的重要方向之一。景天科植物伴矿景天是一种镉富集生物，研究人员将伴矿景天的SpHMA2基因（简称S基因）转入油菜，获得了镉富集转基因油菜。以下是主要实验步骤：
I.取伴矿景天的叶，提取总RNA，进一步获取DNA：
II.利用第I步获得的DNA，经PCR扩增S基因：
Ⅲ.利用凝胶电泳对扩增片段进行鉴定，得到了图1所示的结果（1号泳道为样品，2号泳道为阴性对照，M为已知长度的标准DNA分子；左侧数字为标准DNA分子的碱基数，单位bp），回收S基因；
IV.S基因与pCAMBIA1301质粒（简称pC质粒）重组，转入大肠杆菌，培养后提取重组质粒；
V.用电击法将第IV步提取的重组质粒转入农杆菌，培养；
VI.将第V步培养获得的农杆菌与野生型油菜外植体共培养，利用共培养后的油菜外植体获得转基因油菜植株。

(1)I~VI中，获取目的基因的步骤有____。
(2)第II步中，PCR参数设置为：

其中，60℃20s环节发生____；72℃1min环节发生____。（编号选填）
①双链DNA变性形成单链
②引物与单链DNA结合
③DNA解旋酶打开氢键
④DNA聚合酶催化合成DNA子链
⑤RNA聚合酶催化形成磷酸二酯键
(3)已知S基因的序列为ATGGCCTTAGGA.......TGTTGTGGAGTAG OH，则步骤II中PCR扩增仪中加入的一对引物的碱基序列是（5'→3'，只显示前6个碱基）____

A．ATGGCC	B．GATGAG
C．CTACTC	D．TACCGG

(4)由于DNA分子片段带负电荷，所以电泳开始前应将____（正/负）电极插在凝胶板上靠近DNA样品的一端。根据图1所示电泳结果，S基因长约____bp。
(5)第IV步中，科研人员用一种限制性内切核酸酶A处理S基因，使用另一种限制性内切核酸酶B处理pC质粒。由此可以推测酶A和酶B____。（编号选填）
①识别序列相同，产物的黏性末端相同
②识别序列不同，产物的黏性末端相同
③识别序列相同，产物的黏性末端不同。
④识别序列不同，产物的黏性末端不同
(6)pC质粒上有Kar和Hyg两个抗生素抗性基因，I~VI中，需要考虑这两个抗性基因进行筛选才能达到预期目的的步骤有____。
(7)为检测转基因油菜的镉富集能力，将野生型油菜（WT）和三个株系的转基因油菜（S1、S2、S3）种植于含200μM氯化镉的培养液中，10天后分别测定各油菜的镉含量，得到了图2所示的结果（*表示存在显著性差异），该结果说明____。

【推荐2】磷酸吡哆醛（PLP）是维生素B6的活性形式，是多种酶的重要辅酶。科研人员从大肠杆菌（E.coliK12）中找到了合成PLP的关键酶A，通过基因工程构建了高产PLP的工程菌，流程如下图所示。回答下列问题：

(1)①过程得到的酶A基因称为_______________基因。利用PCR获取和扩增酶A基因过程中温度最高的一步称为_______________，该步的目的是___________________。
(2)③过程常用Ca²⁺处理，并在一定温度下促进E.coliBL21吸收表达载体从而完成_______________过程。
(3)③过程后将工程菌先置于含_______________的培养基中筛选出能够生长的菌落。将筛选出的4个工程菌菌落进一步检测，结果如下图。1-4号菌落中需要舍弃的菌落是_______________，理由是______________。

(4)长时间培养后发现，未被杂菌污染的选择培养基中导入了目的基因的受体菌形成了菌落。此外，周围还出现了一些未导入目的基因的受体菌形成的较小菌落，这些小菌落形成的原因是________________。

【推荐3】加端RCR是使扩增产物的末端加上一段DNA序列的PCR，加端PCR的引物被设计成除与模板配对的那一部分以外再加上若干碱基，以便能使扩增产物的末端加上额外的一段DNA。HPT酶（尿黑酸植基转移酶）是拟南芥中天然维生素E合成途径中的关键酶。为获得高产维生素E的油菜种子，科研工作者将编码HPT酶的HPT1基因转入油菜细胞并获得转基因油菜。请回答下列问题：

(1)研究人员从拟南芥细胞中提取HPT酶的mRNA，利用___酶获得编码HPT酶的cDNA，进而构建特定表达载体。获得的cDNA片段与拟南芥细胞中编码HPT酶的HPT1基因序列不同，原因是cDNA___。
(2)利用获得的cDNA进行加端PCR时，在目的基因的两端添加限制酶识别并切割位点的目的是___。
(3)若HPT1基因已经整合到油菜细胞的基因组中，经检测发现转基因植株产生维生素E能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是___。若利用蛋白质工程对HPT酶进行改造，基本途径是：预期HPT酶的功能→___→___→找到对应的脱氧核苷酸序列。