【推荐1】某二倍体豆科植物易感染白粉病而严重影响产量。该植物体内含有E和F基因，E基因决定花粉的育性，F基因决定植株是否存活。科研人员利用基因工程技术将抗白粉病基因随机导入EEFF植株的受精卵，获得改造后的EeFF和EEFf两种抗病植株（e和f分别指抗病基因插入E和F基因）。请回答下列问题∶
（1）从E和F基因的角度分析，插入抗病基因，引起其发生的变异为_______。
（2）科研人员利用PCR技术检测抗病基因是否插入E（或F）基因中。甲、乙、丙3种引物在基因中的相应位置如下图所示，PCR鉴定时应选择的引物是_______，合成该对引物的前提是_______。

（3）现选择EeFF与EEFF为亲本进行正反交实验，EeFF分别作为母本和父本时，F₁中抗病植株所占的比例分别为1/2和1/3，则E基因失活为e基因使___（填“花粉”或“雌配子”）的育性减少了_______（填“1/2”或“1/3”）。若EeFF自交，F₁中抗病植株所占的比例为_______。
（4）为进一步研究这两对基因在同源染色体上的位置关系（不考虑基因突变和交叉互换），科研人员利用两种抗病植株作进一步实验。
实验方案∶将EeFF和EEFf杂交获得F₁，在F₁中选择基因型为_______的植株自交，观察F₂的植株中抗病与不抗病性状的比例。预期结果∶
①若F₂中抗病植株与不抗病植株的比例为_______，则两对基因分别位于两对同源染色体上；
②若F₂中抗病植株与不抗病植株的比例为_______，则两对基因位于一对同源染色体上。
（4）经上述研究，若结果为情况①，则F₂的抗病植株中，产生花粉育性都相同的基因型有_______种。若结果为情况②，则F₂的抗病植株中，产生花粉育性都相同的基因型为_______。

【推荐2】新冠病毒（＋RNA）的棘突蛋白S通过与人体黏膜细胞表面的ACE2受体结合而进入细胞，是宿主抗体的重要作用位点。下图1是科研人员利用新冠病毒的＋RNA提取S蛋白基因和S蛋白受体结合域RBD基因作为抗原基因序列，研制新冠病毒双抗原疫苗的技术路线。已知PCR1与PCR2要分别进行，然后将产物混合，使用引物1和引物4进行PCR3，最终获得大量S－RBD融合基因（1300bp）。
   
(1)新冠病毒囊膜主要由______ 组成，囊膜上蛋白质的合成场所在________ 。
(2)PCR3过程中，片段1与片段2连接形成S－RBD融合基因，需要使用______酶，该酶的作用是______。为使S－RBD融合基因能与pX质粒相连接，并在工程菌中表达时先合成S蛋白，则PCR1过程中，应在引物1的5'端添加的限制酶序列是______。
(3)为初步检测过程B构建是否成功，对重组pX系列质粒及其酶切产物进行凝胶电泳检测，结果如图2。据图可知，酶切时用到的酶是_______，重组质粒pX2和pX5构建成功的依据是_______。
   
(4)在工程菌的筛选时，可先后用两种抗生素进行影印培养实验（即使用无菌的绒毡布压在培养基A的菌落上，带出少许菌种，平移并压在培养基B上），在培养基B中存活的菌落是否含有目的基因_______（填“是”或“否”）。鉴定重组pX质粒是否导入工程菌还可以采用的方法是_______。
(5)试从免疫学角度分析此种双抗原疫苗比常规S蛋白疫苗更具优势的原因_______。

【推荐3】低温、干旱、高盐等均是植物遭受的逆境胁迫，某研究团队欲培育某种抗旱水稻，利用了表1中有关限制酶（表中“↓”处表示限制酶作用位点）、图1中耐干旱基因和图2中的质粒展开研究。请分析回答：

限制酶	BamHI	Sau3AI	BclI	EcoRI
识别序列	-G↓GATCC-	-↓GATC-	-T↓GATCA-	-G↓AATC-

(1)用PCR技术扩增耐干旱基因时，需选用的引物为_____，PCR过程可以在_____中自动完成，引物与a、β链结合后，温度升至72℃左右的目的是_____。
(2)为保证耐干旱基因的定向插入和减少随意连接，需要用上表中的限制酶_____处理含耐干旱基因的DNA片段，同时还需要用限制酶_____处理质粒。
(3)利用农杆菌Ti质粒上T-DNA_____的特性，构建的基因表达载体中_____（填写图2中数字序号）之间的碱基序列可转移到水稻细胞中。
(4)将耐干旱基因导入水稻后，为检测抗旱基因是否成功表达，可通过_____技术从分子水平上检测。
(5)过量Na⁺对植物有毒，通过调控Na⁺、K⁺运输，维持细胞质较低Na⁺/K⁺比值，可提高耐盐性。科研人员尝试利用小麦细胞液泡膜Na⁺/K⁺逆向转运蛋白基因（AINHX基因）培育转基因耐盐水稻。

实验步骤的目的	简要操作过程
获得目的基因	从小麦①_____中获取AINHX基因
构建载体质粒	将目的基因克隆导入Ti载体质粒
②_____	经脱分化培养获得大量细胞
转化细胞	用农杆菌法转化水稻细胞
转基因细胞筛选	用含抗生素的选择培养基筛选
转基因植株培育	③_____获得转基因植株
转基因植株分析	转基因幼苗转入④_____中培养

【推荐1】肿瘤疫苗是新型治疗方法，其原理是将肿瘤抗原导入人体内，激活患者自身的免疫应答，从而达到控制或清除肿瘤的目的。
1．通过肿瘤疫苗激活的免疫应答归类正确的是______________________。
①细胞免疫                       ②体液免疫                           ③ 人工免疫   
④天然免疫                       ⑤特异性免疫                       ⑥非特异性免疫

A．①②⑥

B．②④⑥

C．①③⑤

D．①④⑥

2．下列可做为肿瘤抗原的是___________。

A．衰老肿瘤细胞	B．肿瘤相关蛋白或多肽
C．肿瘤细胞内的脱氧核糖	D．含有肿瘤抗原基因的质粒

CAR-T疗法又叫嵌合抗原受体T细胞免疫疗法，从病人血液中分离出T细胞，经改造后能表达CAR受体，回输体内识别肿瘤细胞，激活免疫系统。该疗法在新近开发的癌症免疫治疗技术中，备受青睐。图为CAR-T细胞制备流程。

3．图所示①-⑤过程，需要使用限制酶的是____________过程。
4．图中所用的生物技术有________________。

A．转基因技术	B．细胞融合技术
C．单克隆抗体技术	D．组织细胞培养技术

5．据已有知识判断，图中筛选的 CAR-T细胞具备特点是__________。

A．能在人体内分泌抗体	B．体外培养可表达CAR受体
C．激活体内T淋巴细胞	D．识别不同种类的癌细胞

6．放疗是用放射性元素对人体肿瘤的部位进行局部方面的扫描和照射，通过辐射杀死瘤细胞。化疗是通过药物的手段，使药物进入人体血液，并去除人体中的癌细胞。放疗和化疗对人体正常细胞也有杀伤作用。相对于放疗化疗，肿瘤疫苗治疗法的优点有______________（答出两点）。

【推荐2】请阅读下文，分析回答下列问题
正常细胞中含有抑癌的P53基因，能表达抗病毒蛋白，帮助修复轻度变异的基因，也能使重复变异的细胞发生凋亡而避免肿瘤的发生；若它失活而不能表达，则基因突变的细胞易形成肿瘤。基因治疗肿瘤是根本的方法，腺病毒以其嗜好增殖细胞和对人体基本无害而成为良好的基因载体。野生型腺病毒含有抑制P53基因活性的55Kda基因，以及病毒复制基因E1，因此需要重新构建有疗效的、安全的腺病毒。图甲、乙中箭头所指为相应限制酶切点。

（1）DNA解旋酶直接作用于脱氧核苷酸之间的____________键（化学键）；DNA限制酶直接作用于脱氧核苷酸之间的____________键（化学键）。
（2）构建重组腺病毒时，限制酶最好选择______________，理由是：既可以去除_____基因以防止病毒复制后损伤健康细胞，同时还能破坏___________基因以防止其____________。
（3）将目的基因与腺病毒重组时，重组的成功率较低，依然还有大量非重组的野生型病毒的DNA，这是因为_____________________________________。
（4）要获得更多重组病毒，采用的方法是：获取人体某肿瘤细胞→将E1基因导入肿瘤细胞的基因组中→重组病毒侵染含E1基因的肿瘤细胞→体外培养侵染的细胞。该过程中利用肿瘤细胞能不断复制的特点可以为病毒提供更多的生活场所，那么选用含E1基因的肿瘤细胞进行重组病毒侵染的理由是____________________。筛选重组病毒，可采用离心分层纯化法，其依据是________________________________________。
（5）某DNA分子片段含有1000个碱基对。经扩增后，分别只用限制酶EcoRⅠ与同时用EcoRⅠ和HalⅢ两种方法切割，其电泳结果如图丙所示，可推断限制酶HalⅢ在该DNA片段上的切点有________________个。
（6）如果需将目的基因利用PCR技术扩增10次，则需要在缓冲液中至少加入[_____]个引物。
A．2¹⁰                 B． 2¹⁰ +2            C．2¹¹             D．2¹¹-2

【推荐3】某生物的W基因可编码一种营养价值极高的W物质。为了大批量获得W物质，某研究小组构建了W基因的表达载体，并利用工程菌生产W物质。质粒、含W基因的DNA片段及有关限制酶识别序列和切割位点如图所示。回答下列问题：

限制酶	BamHI	EcoRI	MfeI	KpnI	HindⅢ
识别序列和切割位点（5'→3'）	G↓GATTC	G↓AATTC	C↓AATTG	GGTAC↓C	A↓AGCTT

部分限制酶及其识别序列
(1)质粒作为常用的运载体，其特点有____________（答出2点）。
(2)若图中W基因的转录方向是从左向右，结合图1和图2分析，应使用限制酶____________切割图中质粒，使用限制酶____________切割图中含W基因的DNA片段。不能选择BamHI切割质粒和含W基因的DNA片段的理由是____________。
(3)若图中W基因的转录方向是从左向右，则W基因转录的模板链是____________（填“甲链”或“乙链”）。利用PCR技术对W基因进行扩增的原理是______。
(4)研究人员利用W基因的mRNA进行逆转录得到了cDNA，已知其mRNA的序列为5'—UGAACGCUA…（中间序列）…GUCGACUCG—3'。为了便于将扩增后的基因和载体连接构建重组质粒，用于PCR扩增的引物应为____________。

A．5'—GAATTCTGAACG—3'	B．5'—AAGCTTCGAGTC—3'
C．5'—GAATTCCGAGTC—3'	D．5'—AAGCTTTGAACG—3'

【推荐1】端木银熙被誉为常熟的袁隆平，他善于利用常规育种成果选育不育系，善于改进育种程序，以此缩短育种年限。水稻是自花授粉作物，杂交水稻育种成功得益于对雄性不育性状的利用，育种工作者就某水稻品系中发现的雄性不育基因开展了下面的一系列研究。请分析并回答下列问题：
（1）水稻在抽穗期，幼穗中的雄蕊进行减数分裂产生花粉，此期间水稻对温度敏感。温敏雄性不育系S₂表现为高温条件下(≥25℃)雄性不育，此雄性不育性状由RNZ基因控制。为了研究高温对RNZ基因表达的影响，研究人员选取长势基本一致的S₂植株，均分为两组分别在低温、高温条件下进行处理，请根据后续实验过程分析：
①检测RNZ基因的表达情况。
分别提取叶片或幼穗总______，进行反转录；根据cDNA序列设计引物，PCR扩增，从而检测RNZ其因表达情况。
②实验记录数据如图。

与S₂叶片中RNZ基因表达情况比较，温度变化对S₂幼穗中RNZ基因表达的影响是______。
（2）已知RNZ基因编码的核糖核酸酶在生物体各组织细胞中广泛存在，催化tRNA的加工。依据上述实验结果，研究人员猜测，由于叶片光合速率不同于幼穗，RNZ编码产物可能也分布于叶绿体中。为验证此推测，研究人员做了如下实验：
①构建RNZ-GFP融合基因表达载体(GFP为绿色荧光蛋白基因)。此表达载体除具有融合基因、启动子、终止子外，还应具有______。
②将表达载体导入______中，然后通过______技术获得转入RNZ-GFP融合基因的水稻。
③实验者将转基因植物细胞置于适宜的波长光谱的激发下(该操作会使叶绿体会发出红色荧光)，观察到______，证明RNZ蛋白定位在叶绿体中。
④本实验还应补充一组______作为对照，若结果为______能支持③的结论成立。

【推荐2】（四）回答下列有关现代生物技术以及遗传信息的表达的问题
科学家在 ATGC 之外，引入了一种人工碱基对——X和Y（如图；接着，将“绿色荧光蛋白”基因当中一个编码丝氨酸的序列 AGT 改成了包含人工碱基的 AXC；然后又专门特制了一个能将 AXC 翻译为丝氨酸的人工 tRNA 的基因。随后，他们将这个带有人工碱基的绿色荧光蛋白基因和编码 tRNA 的基因一起转入大肠杆菌细胞（如图 ），最终“人工基因” 表达的绿色荧光蛋白和天然荧光蛋白相比无明显差异。

1．该基因工程目的基因的获取方式是_______。
2．该基因工程导入的目的基因包括       。
①带有人工碱基的绿色荧光蛋白基因
②能将 AXC 翻译为丝氨酸的人工 tRNA 的基因
③天然绿色荧光蛋白的基因
④天然携带丝氨酸的 tRNA 的基因

A．①②

B．②③

C．③④

D．①④

3．该基因工程中重组 DNA 分子的构建所需要的工具酶有_______、_______。
4．右图 中标注的密码子的碱基序列是_______。
5．“ 带有人工碱基的 DNA 表达出了有生物活性的蛋白质”这一实验成功的意义在于       。

A．增加 DNA 分子的多样性	B．提高 DNA 分子的稳定性
C．提高遗传密码的多样性	D．为扩大氨基酸以及蛋白质的种类提供了可能性

【推荐3】[生物--选修3：现代生物科技专题] 多聚半乳糖醛酸酶（PG）能降解果胶使细胞壁破损。成熟的番茄果实中，PG量合成显著增加，能使果实变红变软，但不利于保鲜。利用基因工程减少PG基因的表达，可延长果实保质期。科学家将PG基因反向接到Ti质粒上，导入番茄细胞中，得到转基因番茄，具体操作流程如图。据图回答下列问题：

（1）若已获取PG的mRNA，可通过_______获取PG基因；在该基因上游加结构A可确保基因的反向转录，结构A上应具有___________结合位点；重组质粒转移到大肠杆菌中的目的是______。
（2）用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后，可用含有______的培养基进行筛选。由于导入的目的基因能转录出反义RNA，且能与_________互补结合，因此可抑制PG基因的正常表达。
（3）若________，则可确定转基因番茄培育成功。获得的转基因番茄产生的种子不一定保留目的基因，科研人员常用____________方法使子代保持转基因番茄的优良性状。

【推荐1】径柳匙叶草是一种泌盐植物。科研工作者将径柳匙叶草液泡膜Na⁺/K⁺逆向转运蛋白基因（TaNHX2基因）转移到棉花细胞内，获得了转基因耐盐棉花新品种。图1是获取的含有目的基因的DNA片段，Sau3AI、EcoRI、BamHI为三种限制酶，图中箭头所指为三种限制酶的切点；图2是三种限制酶的识别序列与酶切位点示意图；图3是土壤农杆菌中用于携带目的基因的Ti质粒结构示意图，请分析回答问题：

（1）将含有径柳匙叶草不同基因的DNA片段导入受体菌的群体中储存，再根据TaNHX2基因的特定核苷酸序列从中提取图1的片段，此法为从__________获取目的基因。
（2）不能在径柳匙叶草根尖分生区细胞中获得TaNHX2基因的mRNA，其原因是______________________________。
（3）若用BamHI切割图1所示的DNA片段，获得目的基因，则需选用_______切割图3所示质粒，以便构建基因表达载体，该方案的缺陷是_________。故切割图1所示DNA片段的最佳方案是选用____________酶。
（4）用上述最佳方案构建基因表达载体，所得重组质粒____________（选填“能”“不能”或“不一定能”）被BamHI切割。
（5）图3中，质粒上的抗生素抗性基因的作用是_________________________________。
（6）为了检测技术成果，科研工作者将转基因棉花种植在盐碱地，观察其生长状况，这属于___________________________水平的检测。

【推荐2】下图是将乙肝病毒表面主蛋白基因HBsAg导入巴斯德毕赤酵母菌生产乙肝疫苗的过程示意图。巴斯德毕赤酵母菌是一种甲基营养型酵母，能将甲醇作为其唯一碳源，此时AOX1基因受到诱导而表达，图中pPIC9K质粒上5'AOX1和3'AOX1（TT）分别是基因AOX1的启动子和终止子。该酵母菌体内无天然质粒，科学家改造出了图1所示质粒用作载体，其与目的基因形成的重组质粒经酶切后可以与酵母菌染色体发生同源重组，将目的基因整合于染色体中以实现表达。请分析并回答下列问题。
(1)为实现HBsAg基因和pPIC9K质粒重组，设计引物时需要在引物的__________端添加相应①限制酶的识别序列，则在HBsAg基因两侧的A和B位置添加的碱基序列分别是__________、__________，这样设计与只添加同一种碱基序列相比的优点是__________。

(2)酶切获取HBsAg基因后，需用___________（填“E．coliDNA连接酶”或“T₄DNA连接酶”）．将其连接到pPIC9K质粒上，形成重组质粒，构建重组质粒的目的是__________。
(3)若用限制酶SnaBI、BglⅡ联合酶切pPIC9K质粒，获得的DNA片段按顺时针方向，依次分别是42kb、26kb、68kb；用限制酶BglⅡ、AvrⅡ联合酶切pPIC9K质粒，得到的DNA片段按顺时针方向，依次是42kb、40kb、54kb；已知HBsAg基因长度是60kb。步骤3中应选用限制酶__________来切割重组质粒以获得重组DNA，切割后的重组DNA的长度是___________。
(4)转化的酵母菌在培养基上培养一段时间后，需要向其中加入甲醇，其目的是__________。