组卷网 > 高中生物综合库 > 生物技术与工程 > 基因工程 > 基因工程的基本操作程序 > 目的基因的获取 > PCR扩增的原理与过程
题型:非选择题-解答题 难度:0.65 引用次数:513 题号:22187396
许多植物病毒运动蛋白可以增加植物胞间连丝的通透性,介导病毒核酸的转移。黄瓜花叶病毒(CMV)是一种寄主范围非常广泛的植物病毒,已有研究表明黄瓜花叶病毒运动蛋白(CMP)介导了病毒核酸分子在植物细胞间的转移。GFP是在水母细胞中表达的一种绿色荧光蛋白。研究人员拟构建CMP-GFP融合基因,并将其转入工程菌中大量合成CMP-GFP融合蛋白,以追踪病毒运动蛋白对植物胞间连丝物质运输中的生理功能。图1表示利用PCR技术获取融合基因的过程。图2表示pUC质粒,Amp²是氨苄青霉素抗性基因;LacZ基因编码产生的β-半乳糖苷酶能分解β-半乳糖苷,产生蓝色物质,使菌落呈现蓝色,否则菌落为白色;SmaI、NcoI、EcoRI、Pst1是4种限制酶,它们切割产生的黏性末端均不相同。

(1)构建CMP-GFP融合基因设计引物时,需要把CMP基因的对应终止密码子的3个碱基去掉,原因是___________。质粒上终止子的作用是___________
(2)若对图1过程中形成的CMP-GFP融合基因进行大量扩增,需要的酶是___________,可以使用的引物是图中的___________。若从以下四个引物中选择其中两个作为引物P2和引物P3的组成部分,应选择___________(填序号)。
①:5’-CGGGGATCCATACATATGAGTAAA-3’
②:5’-ACCTTGGAAAGCCATTTTGTATAGTTCATC-3’
③:5’-ACAGGATCCTATAGATATAG-3’
④:5’-GATGAACTATACAAAATGGCTTTCCAAGGT-3’
(3)为了使CMP-GFP融合基因能够正确插入pUC质粒中,需要在构建融合基因时在所需引物的___________(填“5’”或“3’”)端添加限制酶____________的序列。将构建成功的重组质粒导入大肠杆菌中,在添加了氨苄青霉素和β-半乳糖苷的培养基中菌落的生长状况和菌落颜色分别是______________

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【推荐1】萝卜是百姓喜爱的一种蔬菜,筛选优良性状,开展种质创新,对落实国家“种业振兴行动”计划,丰富“菜篮子工程”有重大应用价值。
(1)采用常规杂交育种,可培育出不同根形的品种。萝卜的根形由A、a和R、r两对等位基因控制,且独立遗传。现将两种稳定遗传的圆形萝卜进行杂交,F1全为扁形;F1自交,F2有扁形、圆形和长形三种表型,比例为9:6:1。由题意可知,F2中,长形萝卜的基因型为_________________,扁形萝卜中杂合子比例为__________________
(2)利用返回式航天器搭载萝卜种子可使细胞产生基因突变。假设突变发生在某基因的内部,若编码区缺失一个核苷酸,则会引起编码的肽链__________________改变;若突变是一个核苷酸的替换,但没有引起编码的蛋白质功能改变,其原因可能是_________________(答出2点即可)。
(3)萝卜硫素具有抗炎、抗癌等生理功能,由黑芥子酶(Myr)水解前体物质形成。研究人员提取总RNA、逆转录形成cDNA,然后设计Myr基因特异引物,采用PCR方法扩增目的基因,经凝胶电泳后,发现有多条扩增带(其中也包含目的基因片段)。在不改变引物、PCR扩增体系和模板量的情况下、可采用_________________的方法,特异扩增目的片段。研究人员对扩增出的DNA片段进行了序列测定,序列信息见下图,推测其最多可以编码_________个氨基酸的多肽(终止密码子为UAA/UAG/UGA)。在多肽合成过程中,tRNA“搬运”氨基酸到核糖体上,氨基酸结合部位在tRNA的__________________端。

(4)研究人员希望采用Ti质粒上的T-DNA转移Myr基因,以便获得萝卜新品种。图中A、B、C、D、E为5种限制酶及其酶切位点,选用__________________(填字母)进行酶切,以使插入T-DNA中的目的基因正确表达;将转入目的基因的体细胞培养形成_________________,分化成植株,用于生产。
2024-01-23更新 | 1180次组卷
非选择题-解答题 | 适中 (0.65)
名校
【推荐2】如果已知一小段DNA的序列,可采用PCR的方法,简捷地分析出已知序列两侧的序列,具体流程如下图(以EcoR Ⅰ酶切为例):

请据图回答问题:
(1)步骤Ⅰ用的EcoR Ⅰ是一种_____酶,它通过识别特定的_____切割特定位点。
(2)步骤Ⅱ用的DNA连接酶催化相邻核苷酸之间的3′—羟基与5′—磷酸间形成_____;PCR循环中,升温到95 ℃是为了获得_____;Taq DNA聚合酶的作用是催化_____
(3)若下表所列为已知的DNA序列和设计的一些PCR引物,步骤Ⅲ选用的PCR引物必须是_____(从引物①②③④中选择,填编号)。
DNA序列(虚线处省略了部分核苷酸序列)
已知序列

PCR引物

(4)对PCR产物测序,经分析得到了片段F的完整序列。下列DNA单链序列中(虚线处省略了部分核苷酸序列),结果正确的是 _____。
A.5′—AACTATGCG……AGCCCTT—3′
B.5′—AATTCCATG……CTGAATT—3′
C.5′—GCAATGCGT……TCGGGAA—3′
D.5′—TTGATACGC……CGAGTAC—3′
2022-08-10更新 | 363次组卷
非选择题-解答题 | 适中 (0.65)
名校
【推荐3】大多数动物和人类体内的抗体为由轻链和重链组成的Y形结构,科学家发现驼科动物(骆驼、羊驼及其近期物种)体内存在天然缺失轻链的抗体,却具有亲本抗体的完整抗原结合活性,将其称为纳米抗体。纳米抗体具有相对分子质量小、亲和力高、稳定性高、免疫原性低、穿透能力强、可溶性好等特点。下图是纳米抗体的制备流程:
   
(1)抗体与抗原的结合部位主要是由__________(答“轻链”或“重链”或“轻链和重链”)构成。
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(4)一般选择大肠杆菌等微生物作为生产纳米抗体的受体细胞,原因是__________
(5)相较于单克隆抗体更容易捕获相关抗原,原因是__________结合以上信息,试分析纳米抗体的应用前景(答出一点即可)__________
2023-06-06更新 | 88次组卷
共计 平均难度:一般