【推荐1】研究发现，牛的瘤胃中含有多种纤维素分解菌，这些纤维素分解菌可用于分解秸秆等废弃物。某科研小组按以下实验流程分离获取了牛瘤胃中的纤维素酶高产菌株。

（1）纤维素酶是由多种酶组成的复合酶，其中能催化纤维二糖水解的是________。纤维素酶的测定方法，一般是采用对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的_______进行定量测定。
（2）步骤A是_____________，可以通过此步骤增加______________________。
（3）科研小组的某个同学将瘤胃菌种提取液接种到适宜的培养液中，调节pH及温度至适宜条件，并持续通入无菌空气，结果一段时间后发现培养液中几乎没有菌种，原因是_________。
（4）按照修正后的实验方法，研究人员在刚果红培养基平板上，筛选到了几株有透明圈的菌落（如图）。图中透明圈的大小与纤维素酶的________有关；图中降解纤维素能力最强的菌株是____________。

（5）现利用稀释涂布平板法测定该目的菌的数量，在同一稀释倍数下4个平板上均接种0.1ml样品溶液，菌落数分别为156、178、486、191，通过计算得知原样品溶液中每毫升含有目的菌1.75×10⁸个，则稀释倍数是________________。

【推荐2】氮素污染物是造成水体污染和富营养化的主要原因之一，水体中氮素的去除对清洁水体有重要意义、异养硝化细菌能降解硝酸铵产生氨，科研工作者从污水中筛选出异养硝化细菌ZW2和ZW5菌株，并研究其去氮能力。回答下列问题：
(1)进行ZW2和ZW5菌株初步筛选时，通常采用______法或______法进行接种。初步筛选时，样品中含有多种微生物，培养后，一般依据______来区分不同的微生物。
(2)从污水中分离ZW2和ZW5菌株时，培养基中需要加入硝酸铵等营养物质、琼脂和酚红指示剂。培养后，这两种细菌都能生长并形成菌落，结果如图所示。______（填“ZW2”或“ZW5”）菌株的去氮能力更强，判断依据是______。
(3)在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为10⁶的样品液0.1mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为168、171、165、178和168。则每毫升样品中的细菌数量______个、与此方法相比，用血细胞计数板计数法统计得到的细菌数量______。

(4)上图培养基从物理性质分应属于______，接种用到的工具是______。

【推荐1】人β防御素是一种由H基因编码的抗菌肽，抑菌谱广，可通过构建重组酵母菌及其发酵实现量产。
(1)为获得β防御素目的基因，研究人员利用致病细菌的脂多糖（LPS）刺激结肠癌细胞株提高防御素的表达量，提取总RNA，进一步进行____后，采用PCR扩增，将基因测序结果与Genebank公开数据进行比较，进而得到正确的目的基因。
(2)本实验选用毕赤酵母表达载体pPIC9K（如图甲所示），扩增目的基因时设计的一对引物（P1和P2）如图丙所示。

   

①本实验中引物的作用是____。
②结合载体与引物，推测本实验中采用的一对限制酶是____。采用双酶切法的优势是____。
(3)毕赤酵母真核表达系统最大的优点在于，该体系可对目的蛋白____，直接表达出具有生物活性的蛋白。
(4)重组毕赤酵母合成的β防御素在面包制作中还具有局限性。因其与哺乳动物糖蛋白链结构的差异存在抗原性，作为防腐剂添加，有引起机体免疫反应造成过敏的危险。请结合已有的基因工程和蛋白质工程知识给出改良思路去除上述β防御素的糖链结构____。

【推荐2】透明质酸（HA）是一种高黏度氨基多糖，枯草芽抱杆菌无透明质酸合成酶 （HAS），但含有HA代谢的其它途径，而动物病原体链球菌含有HAS的基因（H基因）。研究者通过基因工程来改变枯草芽抱杆菌代谢通路，以实现枯草芽抱杆菌生产HA。回答下列问题。
(1)利用PCR扩增H基因时，每次循环需要经过三步，依次是_____。图1中H基因以a链为转录的模板链，在PCR扩增仪中加入的引物的碱基序列为_____（从5'一端书写出前12个碱基序列），至少经过_____次循环可得到等长的目的DNA片段。

(2)将构建好的重组质粒转入枯草芽抱杆菌（D菌），需先用Ca²⁺处理D菌，其目的是_____，然后在含_____的培养基上筛选，得到枯草芽抱杆菌E（E菌）。
(3)质粒在细菌细胞中遗传不稳定、易丢失，研究者尝试将重组质粒进行改造，将H基因插入枯草芽抱杆菌的基因组得到整合型枯草芽抱杆菌F（F菌）。对三种枯草芽抱杆菌进行培养，结果如图2，_____最适宜工业发酵生产透明质酸，理由是_____（答出3点）。

【推荐3】人们试图利用基因工程技术将牵牛花的蓝色基因导入白玫瑰中，以培育转基因的蓝色玫瑰花。请回答下列问题：
（1）将牵牛花的蓝色基因导入白玫瑰细胞之前需要先构建基因表达载体，这一过程所需要的工具酶是_______。基因表达载体中除含有蓝色基因外，还应含有_________、终止子、标记基因和复制原点。在体外，可通过PCR技术扩增蓝色基因，为了保证PCR反应的进行，反应体系需要加入_____________酶、模板DNA、dCTP，dATP、dGTP、dTTP，以及____________等。
（2）将基因表达载体导入白玫瑰细胞内常用的方法是____________，而检测目的基因是否导入白玫瑰染色体DNA上，常用____________技术。
（3）将导入了蓝色基因的白玫瑰细胞培养成个体，需采用________技术，该技术利用的原理是_________。

【推荐1】牛的雄性胚胎中存在特异性的H－Y抗原，可在牛早期胚胎培养液中添加H－Y单克隆抗体，筛选胚胎进行移植，以利用乳腺生物反应器进行生物制药。为研制H－Y单克隆抗体，某同学以小鼠甲为实验材料设计了以下实验流程。请回答有关问题：

（1）转基因动物通过分泌的乳汁来生产所需要的药品，称为乳腺生物反应器。将药用蛋白基因与乳腺蛋白基因的_____________等调控组件重组在一起，通过_____________的方法，导入哺乳动物的_____________中，然后使其生长发育成转基因动物。
（2）上述实验前必须给小鼠甲注射H－Y抗原，该处理的目的是_________________。
（3）实践中常用_____________作为促融剂，以提高细胞融合的成功率。
（4）写出以小鼠甲的脾脏为材料制备单细胞悬液的主要实验步骤：_____________。
（5）研究发现，在小鼠细胞内DNA的合成有两条途径，主要途径（简称D途径）是在细胞内由氨基酸和其他小分子化合物合成核苷酸，进而合成DNA的过程，该过程中叶酸必不可少，氨基蝶呤是叶酸的拮抗剂，可以阻断此途径；另一辅助途径（简称S途径）是在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情况下，经酶的催化作用合成DNA，骨髓瘤细胞缺乏催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷合成核苷酸的酶。
①图中筛选1利用DNA合成途径不同的特点配制的HAT培养基含有多种成分，其中添加的________________具有筛选杂交瘤细胞的作用。骨髓瘤细胞及其互相融合细胞不能在HAT培养基上增殖，其原因是______________________，。
②图中筛选2含多次筛选，筛选所依据的基本原理是___________，筛选的目的是___________。
（6）通常选用囊胚期的早期胚胎做雌雄鉴别，鉴别后的_________胚胎符合要求，可做胚胎移植。

【推荐2】I、由致病疫霉引起的晚疫病是造成马铃薯严重减产的毁灭性病害。马铃薯野生种中含有抗晚疫病基因，但由于存在生殖隔离，难以通过常规杂交育种方法将其导入栽培种中。科研人员利用抗病的二倍体马铃薯野生种（2n＝24）和易感病的四倍体马铃薯栽培种（4n＝48）进行体细胞杂交，培育抗晚疫病马铃薯。
II、EV71是引发手足口病的一种人肠道病毒。为制备抗EV71的单克隆抗体，科研人员用小鼠进行实验。
(1)将马铃薯野生种和栽培种的叶片用_________酶处理，获得有活力的原生质体，诱导原生质体融合。将融合细胞形成的愈伤组织接种到含有激素和营养的培养基上，发育形成完整的再生植株。该技术涉及的原理包括_________。
(2)科研人员借助流式细胞仪测定马铃薯野生种、马铃薯栽培种和再生植株的DNA相对含量，由结果推测再生植株为_________倍体。

(3)为确定该再生植株是否符合育种要求，还需对其进行_________鉴定。
(4)将EV71灭活病毒、EV71外壳蛋白VP1和VP2分别注射到3组小鼠体内，引发小鼠机体免疫，产生相应的抗体。多次免疫后，分别取上述3组小鼠的血清和未免疫小鼠血清，测定抗体与抗原的结合强度，结果如图所示。

   

EV71免疫的小鼠血清抗体_______（填“是”或“不是”）单一抗体。制备抗EV71单克隆抗体时，选用________免疫的小鼠脾脏细胞效果最佳。
(5)取相应免疫组小鼠的脾脏，剪碎并用________酶处理得到小鼠脾脏细胞，用灭活的病毒诱导，与_______细胞融合，筛选获得5个不同的杂交瘤细胞株。
(6)双抗体夹心法是医学上常用的定量检测抗原的方法，具体原理如下图：

   

固相抗体和酶标抗体均能与抗原结合，这是由于不同抗体与同一抗原表面的不同部位结合。该检测方法中，酶标抗体的作用是与待测抗原结合、_____。研究人员获得三种抗EV71单克隆抗体，分别记为A、B、C.为检测它们之中哪两种适合用于双抗体夹心法，科研人员需要进行______组实验，检测并比较各组实验的产物量。

【推荐3】多发性硬化症是一种由纤维蛋白渗入大脑引发的神经系统疾病。科研人员欲应用生物工程技术治疗该病。请回答下面有关问题。
（1）研究人员将纤维蛋白作为_________注射到小鼠体内，激活了小鼠的________免疫，进而制备出抗纤维蛋白的单克隆抗体（5B8）。该项技术属于_______范畴（填写下面正确选项）。
A．基因工程             B．细胞工程               C．胚胎工程            D．蛋白质工程
（2）制备5B8的基本流程如下：从注射了纤维蛋白的小鼠脾脏中获取________，与小鼠的骨髓瘤细胞进行融合。然后用特定的__________筛选符合要求的杂交瘤细胞后，再通过克隆、检测、筛选、培养等环节，最终从小鼠腹水中提取到5B8。
（3）活性氧（ROS）是氧分子正常代谢的副产物，当吞噬细胞中大量产生ROS并释放时，会毒害周围神经元。NADPH氧化酶是催化细胞内产生ROS的主要酶。为研究5B8的作用机制，研究者检测了经5B8处理后吞噬细胞中NADPH氧化酶和ROS的含量，结果如图一、图二。

① 作为标准参照的GADPH蛋白表达量稳定且含量丰富，可排除_________对实验结果的影响。
② 综合两幅图的检测结果，通过对比_______组可知，纤维蛋白可以______________，使其对神经元产生毒害；而通过对比______组结果发现: 5B8能_________。
③ 经临床实验证实，单克隆抗体5B8确实对多发性硬化症有明显疗效。请根据上述结果分析其具有疗效的原因____________________。

【推荐2】植物细胞壁中存在大量不能被猪消化的多聚糖类物质，如半纤维素多聚糖、果胶质（富含有半乳糖醛酸的多聚糖）等。研究人员通过基因工程、胚胎工程等技术培育出转多聚糖酶基因（manA）猪，主要流程如下图（neo为新霉素抗性基因）。请回答下列问题：

(1)利用PCR技术扩增manA时，需经过变性、复性、延伸等阶段。设计PCR过程所需引物的主要依据是________。复性时，引物与模板链发生________，其温度的设定与引物长度、碱基组成有关，长度相同但________的引物需要设定更高的复性温度。若PCR反应得不到任何扩增产物，原因可能有________（填序号）。
①变性温度过低                 ②复性温度过低                  ③缓冲液中Mg²⁺浓度过低
(2)据图1分析，BamHⅠ切割形成的黏性末端是________。图2中的步骤［   ］________过程，是基因工程基本操作程序中的核心步骤。
(3)通过①过程获得的重组质粒含有4.9kb（千碱基对），其中manA基因含有1.8kb。现将该重组质粒成功导入受体细胞后，却只有50％左右的细胞能正常表达目的基因产物，原因是________。若用BamHⅠ和EcoRⅠ联合酶切割其中一种重组质粒，只能获得1.7kb和3.2kb两种DNA片段，若用上述联合酶切割同等长度的另一种重组质粒，则可获得________kb长度两种的DNA片段。
(4)在进行④过程时，通常需要定期更换培养液，目的是________。与普通猪相比，该转基因猪的优势是________。

【推荐3】研究发现，拟南芥的ATMYB44 基因与ATMYB77基因均可以参与拟南芥耐旱性的调控。为提高水稻的耐旱性，科研工作者将一个拟南芥ATMYB44基因导入野生水稻的叶肉细胞中，经组织培养后获得了一株耐旱水稻植株M。让植株M自交得到 F₁，F₁中耐旱植株：不耐旱植株＝3：1。回答下列问题：
(1)科研人员提取拟南芥细胞中的ATMYB44基因的mRNA后通过逆转录可获得ATMYB44基因，通过该方法获得的ATMYB44基因与拟南芥细胞中的ATMYB44基因的DNA序列_____ （填“完全一致”或“不完全一致”），原因是________。
(2)科研工作者认为拟南芥ATMYB44基因已经成功导入了水稻细胞的染色体DNA上，根据题中信息分析，作出这一判断的依据是____。进一步研究发现该基因已经导入了水稻细胞的5号染色体上，科研人员通过反复自交，从中筛选出不发生性状分离的耐旱植株记作纯合品系甲。
(3)科研工作者采用相同的方法将一个拟南芥ATMYB77基因导入野生水稻的叶肉细胞中，获得了耐旱的纯合品系乙。为探究ATMYB77基因是否也位于水稻细胞的5号染色体上，以纯合品系甲和纯合品系乙为材料设计最简便的遗传实验来探究，写出实验思路及预期的结果和结论，不考虑染色体互换及其他变异。
实验思路：______________。
预期结果和结论：若___，则ATMYB77基因导入了水稻细胞的5号染色体上；若__________,则ATMYB77基因未导入水稻细胞的5号染色体上。