【推荐1】为大量生产人血清白蛋白，科学家将人血清白蛋白基因（HSA基因）导入到动物体内获得动物乳腺生物反应器。回答下列问题：
(1)以mRNA为模板可合成HSA基因，与从基因组文库获取目的基因相比，该方法获得的HSA基因中不包含____至少答出2项）序列。
(2)用PCR技术扩增HSA基因时，设计引物的依据是______。为使PCR产物能被限制酶切割，需在引物上添加相应的限制酶识别序列。下图为所用载体结构示意图，载体中限制酶的识别序列及切割位点见下表（HSA基因序列中无图中限制酶的识别序列）。

限制酶	HindⅢ	EcoRI	PvitⅡ	PstI	KpnI	BamHI
识别序列及切割位点	A↓AGCTT TTCGA↑A	G↓AATTC CTTAA↑G	CAG↓CTG GTC↑GAC	CTGC↓AG GA↑CGTC	G↓GTACC CCATG↑G	G↓GATCC CCTAG↑G

则应在扩增的HSA基因两端分别引入_____________两种不同限制酶的识别序列。连接经过这两种酶切割的HSA基因和载体进行时，选用_____________（填“E.ColiDNA连接酶”或“T4DNA连接酶”）。
(3)为保证HSA基因成功表达，应将HSA基因与_______等调控组件重组在一起。将构建含有HSA基因的表达载体导入_____中，利用_________（答出2项）等胚胎工程的技术手段获得动物乳腺生物反应器。
(4)为获得更多动物乳腺生物反应器，科研人员采用细胞核移植克隆乳腺生物反应器。发现囊胚细胞核移植比体细胞核移植更有优势，其原因是________。

【推荐2】基因工程中可以通过PCR技术扩增目的基因。回答下列问题。
(1)基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括________和________。
(2)生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是________。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是________。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的氢键。
(3)目前在PCR反应中使用Taq酶而不使用大肠杆菌DNA聚合酶的主要原因是________。

【推荐2】图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，amp^R为青霉素抗性基因，tct^R为四环素抗性基因，P为启动子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。据图13回答下列问题：

（1）若要构建重组质粒，需要对目的基因进行测序，并将测序结果与___________酶的识别序列进行对比，以确定选用何种酶。该类酶作用的部位是____________键。
（2）若用EcoRI酶对目的基因和质粒进行酶切，再用DNA连接酶处理，则由两个DNA片段连接形成的产物有______种。用上述几种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是_____________。
（3）为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是__________________________________。
（4）酶与底物能特异性结合。以下研究利用了生物分子间的特异性结合的有___
A.分离得到核糖体，用蛋白酶酶解后提rRNA
B.用无水乙醇处理菠菜叶片，提取叶绿体基粒膜上的光合色素
C．通过分子杂交手段，用荧光物质标记的目的基因进行染色体定位
D．将抑制成熟基因导入番茄，其mRNA与催化成熟酶基因的mRNA互补结合，终止后者翻译，延迟果实成熟。
（5）从变异的角度看，基因工程的原理是_____________；而植物细胞杂交的原理是_______________________。

【推荐3】内皮素ET是一种含21个氨基酸的多肽。内皮素主要通过与靶细胞膜上的内皮素受体结合而发挥生物学效应。ET_A是内皮素的主要受体，科研人员试图通过构建表达载体，实现ET_A基因在细胞中高效表达，为后期ET_A的体外研究奠定基础。其过程如图（图中SNAP基因是一种荧光蛋白基因，限制酶ApaⅠ的识别序列为 ，限制酶XhoⅠ的识别序列 。请分析回答：

（1） 完成过程①需要的酶是_____。
（2） 过程③中，限制酶XhoⅠ切割DNA，使_____键断开，形成的黏性末端是_____ 。
（3）用两种不同的限制酶切割质粒和目的基因，目的是防止_____，从而提高目的基因和质粒的连接效率。
（4）过程④中用到的工具酶是_____。如果将受体细胞换成植物细胞，则过程⑥常用的方法是_____；该方法常将目的基因先插入到_____上，然后导入受体细胞，以便得到能稳定遗传的转基因植物。
（5）过程⑥和⑦是否顺利完成，常用的分子水平上的检测方法分别是：_____和_____。

【推荐1】研究人员利用乳腺生物反应器生产人乳铁蛋白，基本流程如图，①、②表示过程。

回答下列问题：
(1)从生物组织中提取少量含目的基因的DNA片段后，可通过_________技术扩增出大量目的基因。
(2)构建重组载体时应选择图中限制酶_________和_________切割含有目的基因的DNA片段和质粒。
(3)为保证在供体牛的乳汁中提取到人乳铁蛋白，重组载体中人乳铁蛋白基因的启动子是_________。
(4)①需要使用_________技术将载体导入供体受精卵。
(5)进行②之前，需要用激素对代孕母牛进行_________处理，并且完成②操作后还需对代孕牛进行__________检查。为获得母牛，需对已成功转入目的基因的胚胎进行

【推荐2】某团队通过构建融合表达蛋白M和tag标签的质粒，利用大肠杆菌高效表达真菌基因m产生蛋白M。请结合实验流程回答下列问题：

(1)目的基因的扩增：提取真菌细胞RNA，经____获得足量基因m片段。为了获得含有融合tag标签的蛋白M，设计引物P2扩增基因m时，不能包含____的相应序列，否则将导致蛋白M上不含tag标签。为方便基因m插入质粒的相应位置，需在引物的5′端分别引入限制酶____的酶切位点。
(2)重组质粒的构建：将限制酶处理过的基因m与质粒A（图示质粒A上未标记的有：____）混合，用DNA连接酶处理一段时间，用____电泳，切下相应位置凝胶处理得到____。
(3)将目的基因导入大肠杆菌：将重组质粒A-m与处理过的大肠杆菌混合，将菌液通过____接种到含____的培养基上筛选。
(4)菌种的纯化和鉴定：一般通过____实验检测酵母蛋白中含tag标签。若检测到tag标签，说明____。
(5)融合蛋白的表达和分离：将纯化的菌种接种到____（填“固体”、“半固体”或“液体”）培养基中扩大培养，借助tag标签进行蛋白M的分离纯化。能将tag标签和蛋白M进行分离的酶属于一种____酶。

【推荐3】β—1，3葡聚糖酶可以水解许多病原真菌细胞壁外层的β—1，3葡聚糖和几丁质，降解真菌细胞壁，从而抑制真菌的生长与繁殖。研究人员在植物中克隆到β—1，3葡聚糖酶基因（BG2）并转入苹果主栽品种，以减少苹果真菌病害、实现无公害生产。下图为利用PATC940（经农杆菌Ti质粒改造获得）构建BG2抗病质粒的过程。回答下列问题：

(1)图中Xba I酶切后的末端与Spe I酶切后的末端能连接是因为__________。
(2)研究人员将转入BG2抗病质粒的农杆菌与苹果外植体共培养，该过程称为___________。目的基因BG2将随着___________转移到被侵染的细胞，并随其整合到该细胞的___________上。
(3)在完成遗传转化后，选择培养基中至少要加入两种抗生素，推测其作用分别是：一种用于___________，另一种用于___________。
(4)需要不断观察和检测转基因苹果植株在田间的生长状态，以确定目的基因是否赋予了苹果植株___________。

【推荐1】抗除草剂转基因作物的推广可有效减轻除草劳动强度、提高农业生产效率。图1为抗除草剂转基因玉米的技术流程，报告基因GUS只能在导入真核细胞后正确表达，在农杆菌中不能正确表达。报告基因GUS(含有内含子)，表达产物能催化无色物质K呈现蓝色。

(1)基因工程的原理是____，基本操作步骤有____。
(2)科研人员研发了新的DNA重组方法——无缝克隆In-Fusion技术，如图2所示。In-Fusion酶能够识别任何具有相同15bp末端序列的线性DNA分子并使其形成黏性末端，据此实现目的基因和载体的连接。和传统方法比，无缝克隆In-Fusion技术的优点是____。

(3)农杆菌转化愈伤组织时，常用含除草剂的选择培养基筛选转化的愈伤组织。由于愈伤组织表面常残留农杆菌，导致未成功转化的愈伤组织也可能在选择培养基上生长。针对上述现象，可以在选择培养基中同时加____进行筛选，其中周围的培养基____（“显”或“不显”）蓝色的愈伤组织是转化成功的，原因是____。

【推荐2】[生物──选修3现代生物科技专题]（15分）
应用生物工程技术可以获得人们需要的生物新品种或新产品。请据图回答下列问题：

（1）①过程用到的工具是_____________、_______________、____________。
在培育转入生长激素基因牛过程中，要检测受精卵染色体的DNA上是否插入了目的基因可采用____________技术，②过程常用的方法是_________________。③过程采用的技术有_____________________、________________。
（2）转入生长激素基因牛可通过分泌的乳汁来生产人生长激素。在基因表达载体中，人生长激素基因的末端必须含有____________。③过程培养到桑椹胚或囊胚阶段，可以采用
____________和___________技术，培育出多头相同的转基因犊牛。受体母牛在接受转入生长激素基因牛胚胎之前须经过___________处理，使其具备一定的生理环境。
（3）有人发现prG能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，Ⅱ最可能是________细胞，Ⅲ代表的细胞具有_________的特点。
（4）在抗虫棉培育过程中，④过程中的受体细胞如果采用愈伤组织细胞，与采用叶肉细胞相比较，其优点是________________，⑤采用的技术是__________________。

【推荐3】基因工程中pIJ702是一种常用质粒（如图），其中tsr为硫链丝菌素（一种抗生素）抗性基因，mel是黑色素合成基因，其表达能使白色的链霉菌菌落变成黑色菌落；而限制酶CLaⅠ、BglⅡ、PstⅠ、SacⅠ、SphⅠ在pIJ702上分别只有一处识别序列。

（1）以SacⅠ和SphⅠ切取的目的基因置换pIJ702上0.4kb（1kb＝1000对碱基）的SacⅠ/SphⅠ片段，构成重组质粒pZHZ8．上述两种质粒的限制酶酶切片段长度列在表1中．由此判断目的基因的片段长度为_____kb，以上的操作还需要的一种工具酶是_____。
（2）已知pIJ702上含mel基因的ClaⅠ/PstⅠ区域长度为2.5kb，参照表1数据，以下关于重组质粒pZHZ8上酶切位点和酶切的叙述，正确的是_____
A．用PstⅠ和ClaⅠ同时酶切可得到1.3kb的片段
B．用PstⅠ和ClaⅠ同时酶切可得到四种不同长度的片段
C．用PstⅠ和ClaⅠ同时酶切可得到最小的片段长度为0.3kb
D．重组质粒上的目的基因中不再含有Bg/Ⅱ酶切点
（3）此基因工程中所提及的黑色素是一种_____．
A．蛋白质             B．DNA               C．RNA          D．小分子有机物
（4）目的基因模板链中的TGA序列对应一个密码子，翻译时识别该密码子的tRNA上相应的碱基序列是_____．
（5）重组质粒pZHZ8上的标记基因是_____，在含硫链丝菌素固体培养基上培养后，筛选过程中要淘汰_____色的菌落。