某研究小组利用转基因技术，将绿色荧光蛋白基因（GFP，表达产物能发出绿色荧光）整合到野生型小鼠Gata3基因的一端，该过程未破坏Gata3基因，以此研究小鼠Gata3基因的表达情况，结果如图甲所示。回答下列问题：_____ 。若用质粒构建基因表达载体，则除了图甲中标出的结构，质粒还需要具备的结构有_____ （答出2点）。
(2)引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的_____ ，引物的作用是_____ 。构建重组质粒后，为了确定GFP是否成功整合到质粒中，需要进行PCR检测，若仅用一对引物，则最好选择图甲中的_____ 。
(3)科研人员实验培育得到能正常表达两种蛋白质的杂合子雌雄小鼠各1只，让这两只小鼠交配来获得Gata3—GFP基因纯合的小鼠。为了鉴定交配获得的4只新生小鼠的基因型，科研人员设计了引物1和引物2用于PCR扩增，PCR产物电泳结果如图乙所示。图中个体_____ （填数字）是Gata3—GFP基因纯合的小鼠。
(2)引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的
(3)科研人员实验培育得到能正常表达两种蛋白质的杂合子雌雄小鼠各1只，让这两只小鼠交配来获得Gata3—GFP基因纯合的小鼠。为了鉴定交配获得的4只新生小鼠的基因型，科研人员设计了引物1和引物2用于PCR扩增，PCR产物电泳结果如图乙所示。图中个体
更新时间：2024-05-03 07:38:45
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【推荐1】臭鳜鱼是利用新鲜鳜鱼为原料，配以食盐、花椒等辅料，由乳酸菌等多种微生物共同发酵制得的鱼制品。科研人员利用MRS-溴甲酚绿培养基（配方如表），从传统臭鳜鱼中分离筛选到一株乳酸菌，并研究其对多种微生物的抑菌能力。请回答下列问题：
注明：乳酸能与碳酸钙反应出现溶钙圈；溴甲酚绿为pH显色剂，酸性显示黄色、碱性显示蓝绿色。
(1)科研人员在无菌条件下，取臭鳜鱼鱼肉打成鱼糜，将其稀释至适当浓度，在MRS-溴甲酚绿平板上划线，在温度适宜且__________ （填“有氧”或“无氧”）的环境下倒置培养48h。挑取平板上__________ 的菌落进行重复划线培养，直至菌株纯化。
(2)用试剂盒提取该菌株的基因组DNA并以此为模板，加入__________ 等对菌株的16SrDNA序列进行定向扩增以确定该菌株的类型，常用__________ 来鉴定PCR的产物。
(3)为了检测该株乳酸菌代谢产物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、腐生葡萄球菌、丁香假单胞菌四种病原菌的抑制效果，科研人员将分别含有四种病原菌的培养基倒入A～D四个培养皿中，并使每个培养基上形成4个大小相同的小孔，标号为1～4。向1号孔中加入__________ 作为对照，向2～4号孔中分别加入100μL含有该株乳酸菌代谢产物的液体培养基，在适宜条件下静置培养24h，测量抑菌圈的直径，结果如图：
根据实验结果可以得出的结论是____________________ 。
物质 | 含量 |
胰蛋白胨 | 10g/L |
牛肉膏 | 10g/L |
酵母粉 | 10g/L |
番茄汁 | 200g/L |
葡萄糖 | 10g/L |
碳酸钙 | 20g/L |
溴甲酚绿 | 0.1g/L |
琼脂 | 18g/L |
(1)科研人员在无菌条件下，取臭鳜鱼鱼肉打成鱼糜，将其稀释至适当浓度，在MRS-溴甲酚绿平板上划线，在温度适宜且
(2)用试剂盒提取该菌株的基因组DNA并以此为模板，加入
(3)为了检测该株乳酸菌代谢产物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、腐生葡萄球菌、丁香假单胞菌四种病原菌的抑制效果，科研人员将分别含有四种病原菌的培养基倒入A～D四个培养皿中，并使每个培养基上形成4个大小相同的小孔，标号为1～4。向1号孔中加入
根据实验结果可以得出的结论是
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【推荐2】图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性内切核酸酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题：
(1)基因工程是在_____ 水平上的操作，其原理是_____ ，该技术所用的工具酶除限制酶外还需要_____ 。
(2)若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段，其产物长度为_____ bp。
(3)若图1中虚线方框内的碱基对被T—A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从隐性纯合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有_____ 种不同DNA片段。为了提高实验成功率，需要通过_____ 技术扩增目的基因，以获得目的基因的大量拷贝，该技术原理为_____ ，每次循环一般可以分为_____ 三步。
(4)若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是_____ 。在导入重组质粒后，为了筛选出含质粒的大肠杆菌，一般需要用添加_____ 的培养基进行培养。
(5)假设用BamHⅠ切割DNA获取目的基因，用MboⅠ切割质粒，然后形成重组质粒，若将插入在抗生素B抗性基因处的目的基因重新切割下来，能否再次用BamHⅠ_____ （填“可以”“不可以”或“不一定”），原因是_____ 。
(1)基因工程是在
(2)若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段，其产物长度为
(3)若图1中虚线方框内的碱基对被T—A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从隐性纯合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有
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【推荐3】当今社会发展倡导以绿色为核心的生态发展观，绿色农产品的生产是人们健康生活的源头。为降解农产品的农药（马拉硫磷）残留，科学家用基因工程技术生产了CarE（羧酸酯酶）制剂。生产过程如下：
(1)①过程需要__________ 酶参与，经①②得到的CarE基因与从基因组文库中获得的基因相比缺少___________ 。
(2)CarE基因与载体能够连接在一起的原因是__________ ，构建重组表达载体的目的是__________ 。
(3)③过程常用原核生物作为受体细胞，其优点有__________ ，大肠杆菌细胞最常用的转化方法为用__________ 处理细胞，使细胞处于感受态。
(4)CarE基因导入受体细胞后，检测目的基因是否发挥功能的第一步是__________ ，若需要从哺乳动物的乳汁中来提取CarE制剂，可将CarE基因与__________ 等调控组件重组在一起，导入哺乳动物的受精卵，使之发育成转基因动物。
(1)①过程需要
(2)CarE基因与载体能够连接在一起的原因是
(3)③过程常用原核生物作为受体细胞，其优点有
(4)CarE基因导入受体细胞后，检测目的基因是否发挥功能的第一步是
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【推荐1】2019年新冠疫情爆发以来，疫情防控成为社会关注的热点问题。下图所示某科研团队运用基因工程研制新冠病毒疫苗的过程。质粒中lacZ基因编码的酶可以分解X-gal产生蓝色物质，使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。回答下列问题：____ 过程获得cDNA（互补DNA），然后借助特异性引物进行扩增，PCR体外扩增的原理是____ ，其中PCR需要____ 酶。
(2)图中过程①有两种限制酶选择方案（注：图中几种限制酶切割产生的末端不同）：方案一：选用一种限制酶____ ；方案二：选用____ 两种限制酶；方案二优于方案一的原因是____ 。
(3)若将重组质粒导入大肠杆菌，需要用一定浓度的____ （离子）处理大肠杆菌，使细胞处于能吸收周围DNA分子的生理状态；若将重组质粒导入双子叶植物细胞和裸子植物，则最常用的方法是____ 。
(4)筛选含重组质粒的大肠杆菌时，须在培养大肠杆菌的通用培养基中加入____ ，培养一段时间后，挑选出____ 色的菌落进一步培养获得大量目的菌。若想在分子水平上检测目的基因是否翻译为蛋白质，则通常采用____ 方法。
(2)图中过程①有两种限制酶选择方案（注：图中几种限制酶切割产生的末端不同）：方案一：选用一种限制酶
(3)若将重组质粒导入大肠杆菌，需要用一定浓度的
(4)筛选含重组质粒的大肠杆菌时，须在培养大肠杆菌的通用培养基中加入
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【推荐2】干扰素是动物或人体细胞受到病毒侵染后产生的一种糖蛋白，它能够有效抑制病毒的增殖。为满足临床的大量需求，利用基因工程制备干扰素提供了新路径，其流程图如下。回答下列问题：
淋巴细胞
干扰素基因
酵母菌
大量干扰素
（1）过程a是获得目的基因，除此之外，要获得大量的目的基因，还可以采用____________ 进行体外扩增，此技术与细胞内DNA复制相比，所需酶必须具有____________ 的特点。
（2）b过程包括了基因表达载体的构建和导入受体细胞，其中____________ 是基因工程的核心步骤，为了提高导入受体细胞的成功率，通常用____________ 处理酵母菌，使其处于感受态，容易吸收外源DNA分子。
（3）该过程中，受体使用酵母菌比使用大肠杆菌好，原因是____________ 。
（4）人的干扰素基因能够成功植入酵母菌，是因为____________ 。
淋巴细胞
干扰素基因酵母菌大量干扰素（1）过程a是获得目的基因，除此之外，要获得大量的目的基因，还可以采用
（2）b过程包括了基因表达载体的构建和导入受体细胞，其中
（3）该过程中，受体使用酵母菌比使用大肠杆菌好，原因是
（4）人的干扰素基因能够成功植入酵母菌，是因为
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【推荐3】人腺病毒3型能引起人产生急性呼吸系统疾病（ARD），具有较高的发病率和一定的致死率。研究人员利用人腺病毒5型商品化的质粒P5和基因工程等技术，构建新型的复制缺陷型腺病毒3型疫苗，用于预防ARD.
（1）腺病毒衣壳的H蛋白能够刺激机体产生特异性抗体。研究人员通过同源重组的方法利用质粒p5和重组质粒p3构建重组腺病毒3型表达载体pr3，并获得重组腺病毒3型株。过程如下图。
①实验中利用___________ 技术扩增人腺病毒3型的H基因（H3），选用限制酶__________ 和DNA连接酶以确保H3基因能正确连接在p3质粒的特定位置。
②p5质粒上由于缺失E1基因，表现复制缺陷。P3质粒与p5质粒的左臂与右臂存在相同的硪基序列，易发生__________ ，有利于得到同源重组的pr3质粒，使之表现为与p5质粒相同的复制缺陷。pr3质粒经PacI酶处理后，将得到的DNA片段转染至A2细胞（能够表达E1蛋白）中，获得重组腺病毒3型株。转染至A2细胞中的DNA片段存在与_______________ 蛋白合成有关的基因。
（2）为评估重组腺病毒3型株作为抗原的有效性，研究人员使用抗H3单克隆抗体检测H3基因在A2细胞中的表达情况，结果如下图。
实验结果表明：_____________________________________________ 。
（3）为评估重组腺病毒3型株疫苗的安全性，分别用其感染A2细胞和A5细胞（与人体正常体细胞相同，不能表达E1蛋白），至少培养20代。在荧光显微镜下检测重组腺病毒3型株的繁殖情况，预期结果为________________ ，说明疫苗安全。
（1）腺病毒衣壳的H蛋白能够刺激机体产生特异性抗体。研究人员通过同源重组的方法利用质粒p5和重组质粒p3构建重组腺病毒3型表达载体pr3，并获得重组腺病毒3型株。过程如下图。
①实验中利用
②p5质粒上由于缺失E1基因，表现复制缺陷。P3质粒与p5质粒的左臂与右臂存在相同的硪基序列，易发生
（2）为评估重组腺病毒3型株作为抗原的有效性，研究人员使用抗H3单克隆抗体检测H3基因在A2细胞中的表达情况，结果如下图。
实验结果表明：
（3）为评估重组腺病毒3型株疫苗的安全性，分别用其感染A2细胞和A5细胞（与人体正常体细胞相同，不能表达E1蛋白），至少培养20代。在荧光显微镜下检测重组腺病毒3型株的繁殖情况，预期结果为
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【推荐1】科学家培育荧光鼠的设计思路可用下面的图解表示。
依据设计程序，回答下列问题：
（1）科学家在过程A中对天然质粒做的修饰改造是______________ 。B过程用到的工具酶有______________ 和 __________________ 。
（2）E过程为体外受精，卵子的状态应达到_____________ 期才能与获能后的精子完成受精。G过程应用的技术称为_________ ，该过程要用激素处理代孕成鼠，目的是让代孕成鼠____________________ 。
（3）检测荧光小鼠细胞内是否含有基因X，在分子水平上通常用______________________ 作探针；判断转基因荧光鼠荧光基因的表达是否成功，在个体水平上应检测_______________ 。
（4）如果想一次繁殖多只转基因鼠，则需要在过程G中实施______________ ，该操作一般在胚胎发育至_________________ 期进行。
依据设计程序，回答下列问题：
（1）科学家在过程A中对天然质粒做的修饰改造是
（2）E过程为体外受精，卵子的状态应达到
（3）检测荧光小鼠细胞内是否含有基因X，在分子水平上通常用
（4）如果想一次繁殖多只转基因鼠，则需要在过程G中实施
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【推荐2】转基因小鼠的过表达模型和基因敲除模型在人类疾病机理与治疗研究领域得到了广泛应用。研究表明，阿兹海默病（AD）发病与淀粉样前体蛋白（APP）基因突变等有关。请回答下列问题：
（1）通过___________ 方法将APP基因导入小鼠受精卵中，即可获得APP基因过表达的转基因小鼠模型。
（2）sgRNA可识别与之互补配对的DNA片段，我们可利用__________ 为模板设计sgRNA，再利用该sgRNA引导限制酶__________ ，从而获得APP基因敲除的转基因小鼠模型。
（3）为证明已获得APP基因敲除的转基因小鼠，需提取出该转基因小鼠的基因组DNA，并以________ 作为探针，进行DNA分子杂交。若__________ ，则说明已获得APP基因敲除的转基因小鼠。
（4）能否用抗原—抗体杂交的方法证明已获得APP基因敲除的转基因小鼠？____________ 。请说明理由：______________________________ 。
（5）经研究得知，某DNA存在一个能控制转录过程的特殊区段。科学家通过PCR技术获得了大量该区段。该技术操作流程的三个重要步骤是__________ 。
（6）人们发现小型猪的器官可用来替代人体器官进行移植，但小型猪器官表面的某些抗原决定蛋白仍可引起免疫排斥。科学家正试图利用基因工程对小型猪的器官进行改造，在改造中导入的小型猪基因组中的一些调节因子属于基因工程中的__________ ，作用是抑制__________ 的表达。
（1）通过
（2）sgRNA可识别与之互补配对的DNA片段，我们可利用
（3）为证明已获得APP基因敲除的转基因小鼠，需提取出该转基因小鼠的基因组DNA，并以
（4）能否用抗原—抗体杂交的方法证明已获得APP基因敲除的转基因小鼠？
（5）经研究得知，某DNA存在一个能控制转录过程的特殊区段。科学家通过PCR技术获得了大量该区段。该技术操作流程的三个重要步骤是
（6）人们发现小型猪的器官可用来替代人体器官进行移植，但小型猪器官表面的某些抗原决定蛋白仍可引起免疫排斥。科学家正试图利用基因工程对小型猪的器官进行改造，在改造中导入的小型猪基因组中的一些调节因子属于基因工程中的
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【推荐3】NK603是通过基因工程将抗草甘膦基因转入玉米体内获得的一种转基因玉米。这种玉米对草甘膦除草剂“Roundup”具有抗药性，因此种植这种转基因玉米的农民可以放心使用Roundup，既不会对作物造成影响，又能节省费用。根据所学知识回答下列问题：
(1)DNA重组技术的基本操作需要用到的工具酶有_____ 。
(2)基因工程的操作程序主要包括四个步骤，其核心步骤是_____ 。
(3)对玉米进行转基因时，可将目的基因插入到农杆菌Ti质粒的_____ 上，转化过程中添加_____ 化合物，以吸引农杆菌移向受体细胞，并将目的基因整合到受体细胞染色体的DNA上。
(4)选用玉米体细胞作为受体细胞而不选用玉米的受精卵作为受体细胞的原因是_____ 。
(5)在个体水平上鉴定转基因玉米NK603培育是否成功的措施是_____ 。
(1)DNA重组技术的基本操作需要用到的工具酶有
(2)基因工程的操作程序主要包括四个步骤，其核心步骤是
(3)对玉米进行转基因时，可将目的基因插入到农杆菌Ti质粒的
(4)选用玉米体细胞作为受体细胞而不选用玉米的受精卵作为受体细胞的原因是
(5)在个体水平上鉴定转基因玉米NK603培育是否成功的措施是
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