转基因技术的研发是加快农业现代化的重要途径，但转基因食品的安全性备受关注。研究者将水稻抗虫基因（crylC）和双T-DNA载体连接（图示连接后双T-DNA部分结构），利用其中的“Cre/LoxP”系统培育了安全可食用的转基因水稻。在“Cre/LoxP”系统中，Cre基因编码的Cre酶可特异性识别同一DNA两个同向的loxP序列并将两个loxP间的序列删除。
回答下列问题：
(1)Cre酶与基因工程中的______ （工具酶）作用类似。
(2)载体中，T-DNA的作用是转移到被侵染的细胞后__________________ ，hpt基因（潮霉素抗性基因）和gus基因（表达产物使无色底物显蓝色）有助于双T-DNA共转化植株的筛选，起到基因表达载体中____________ （填结构）的作用。
(3)筛选得到双T-DNA共转化成功的植株T0中，hpt基因对植物和环境具有潜在的危害，需设法将其删除。先从T0植株中筛选T-DNA1和T-DNA2都是单拷贝（单个）插入的植株GH-1、GH-2和GH-3，自交后得到T1代植株进行潮霉素抗性检测，选择抗性检测为阴性植株的叶片的gus基因进行PCR检测，产物的电泳结果如下图a。（不考虑减数分裂时发生互换）______ （填编号）是T-DNA1和T-DNA2以连锁形式在单一位点插入植株。
②在答题卡对应的图b中画出植株GH-2的T-DNA1和T-DNA2在染色体上的位置_____ （注：用圆点·表示T-DNA1和T-DNA2在染色体上的位置）
③GH-1的T0代自交的后代T1植株中，具有抗虫特性但不含hpt基因的植株的比例为______ 。这些植株自交后筛选即可获得稳定遗传的种子Tx。
(4)水稻种子主要包括胚和胚乳，其中胚乳被加工成精米食用。该“Cre/LoxP”系统，实现了______ ，培育了安全可食用的转基因水稻。Tx种子播种后获得的叶片______ （填“具有”或“不具有”）抗虫的性状。
回答下列问题：
(1)Cre酶与基因工程中的
(2)载体中，T-DNA的作用是转移到被侵染的细胞后
(3)筛选得到双T-DNA共转化成功的植株T0中，hpt基因对植物和环境具有潜在的危害，需设法将其删除。先从T0植株中筛选T-DNA1和T-DNA2都是单拷贝（单个）插入的植株GH-1、GH-2和GH-3，自交后得到T1代植株进行潮霉素抗性检测，选择抗性检测为阴性植株的叶片的gus基因进行PCR检测，产物的电泳结果如下图a。（不考虑减数分裂时发生互换）
②在答题卡对应的图b中画出植株GH-2的T-DNA1和T-DNA2在染色体上的位置
③GH-1的T0代自交的后代T1植株中，具有抗虫特性但不含hpt基因的植株的比例为
(4)水稻种子主要包括胚和胚乳，其中胚乳被加工成精米食用。该“Cre/LoxP”系统，实现了
更新时间：2024-06-03 23:20:04
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【推荐1】已知猫的双瞳同色和双瞳异色由一对位于常染色体上的基因T、t控制。耳朵形状由位于另一对常染色体上的基因D、d控制，折耳(DD)与立直耳(dd)杂交，子一代为折耳立(Dd)。甲、乙两个科研小组分别将多只折耳双瞳异色猫与多只折耳立双瞳同色猫作亲本杂交，甲组的F1为折耳双瞳同色：折耳立双瞳同色=1:1，乙组的F1为折耳双瞳异色：折耳双瞳同色：折耳立双瞳异色：折耳立双瞳同色=1：1：1：1。回答下列问题：
(1)根据____ 组的杂交结果可判断双瞳同色是____ 性状。
(2)乙组亲本中，折耳双瞳异色猫与折耳立双瞳同色猫的基因型分别是________ 。
(3)乙组子代中折耳立双瞳同色的雌雄猫相互交配，所得后代的表现型比例是________ 。
(4)现要选育出能稳定遗传的折耳双瞳同色猫，请利用甲、乙两组亲本及子代中现有的猫为材料，设计出所用时间最短的实验方案________ 。
(1)根据
(2)乙组亲本中，折耳双瞳异色猫与折耳立双瞳同色猫的基因型分别是
(3)乙组子代中折耳立双瞳同色的雌雄猫相互交配，所得后代的表现型比例是
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【推荐2】《史记》记载我国大禹时期曾广泛种植水稻。《夏本纪》记载：令益予众庶稻，可种卑湿。大禹命令伯益给大家分发水稻种子，种在水田里。近代中国科学家群体对水稻科研作出了突出贡献，让水稻产量大大提高。为了体验科学家的艰辛，进一步了解水稻的遗传规律，某兴趣小组在科研部门的协助下进行相关实验：取甲（雄蕊异常，雌蕊正常，表现为雄性不育）、乙（可育）两个品种的水稻进行相关遗传研究，实验过程和结果如表所示，回答下列问题：
注：水稻雄性育性由等位基因Aa控制，等位基因A对a为显性；B基因会抑制不育基因的表达，将不育反转为可育。
(1)控制水稻雄性不育的基因是__________________ 。
(2)亲本基因型为____________ 。F2中出现一半可育、另一半可育株∶雄性不育株=13∶3，这种差异的原因是_______________ ；
仅考虑F2中出现雄性不育株的那一半，该部分的可育植株中能稳定遗传的个体所占比例为______ 。
(3)为了确定某雄性不育水稻丙的基因型（已有各种基因型的可育水稻），请简要写出实验思路和预期实验结果和结论。_______________ 。
甲与乙杂交 | F1 | F1个体自交得到的F2 |
全部可育 | 一半全部可育 | |
另一半可育株∶雄株不育株=13∶3 |
注：水稻雄性育性由等位基因Aa控制，等位基因A对a为显性；B基因会抑制不育基因的表达，将不育反转为可育。
(1)控制水稻雄性不育的基因是
(2)亲本基因型为
仅考虑F2中出现雄性不育株的那一半，该部分的可育植株中能稳定遗传的个体所占比例为
(3)为了确定某雄性不育水稻丙的基因型（已有各种基因型的可育水稻），请简要写出实验思路和预期实验结果和结论。
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【推荐3】果蝇的红眼与白眼由一对等位基因（R、r）控制，有眼与无眼由另一对等位基因（E、e）控制。下表是两对果蝇的杂交实验和实验结果。
请回答下列问题：
（1）果蝇的有眼与无眼中，无眼属于________ 性状，甲果蝇的基因型是________ 。
（2）组合二亲本的杂交方式称为________ ，实验结果可反映________ 。
（3）组合一 F1 红眼雌果蝇的基因型有________ 种类型，其中杂合子占________ 。让 组合一 F1红眼雌果蝇与组合二的 F1白眼雄果蝇随机交配，得到 F2，选择 F2中的红眼雌雄 果蝇继续随机交配，在 F3 中红眼雌果蝇的概率________ 。
| 组合一 红眼♀(甲) x红眼♂ (乙) | 组合二 无眼♀ (丙) x红眼♂ (乙) | |
| 雌果蝇 | 红眼：无眼=3：1 | 红眼：无眼=1：1 |
| 雄果蝇 | 红眼：白眼：无眼=3：3：2 | 白眼：无眼=1：1 |
请回答下列问题：
（1）果蝇的有眼与无眼中，无眼属于
（2）组合二亲本的杂交方式称为
（3）组合一 F1 红眼雌果蝇的基因型有
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【推荐1】研究人员从分解纤维素的细菌（A菌）中提取出一种纤维素酶基因（CBHII）并进行PCR扩增，然后与高效表达载体DUT质粒（图1）连接构建成重组质粒并导入A菌，从而获得分解纤维素能力更强的工程菌（B菌），请回答下列问题：________ 对pUT质粒进行酶切，经酶切后形成了两个DNA片段（X和Y），X两端的黏性末端分别为-CTAG和-CAATG，则Y两端的黏性末端分别为-CTAG和_________ 。
(2)CBHII基因中无上述限制醇的酶切位点，两端需添加相关酶切位点才能在酶切后与pUT质粒连接，PCR扩增过程中，最早经过_________ 轮循环后，便可获得两端均携带限制酶识别序列的所需双链目的基因。PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定。为了能在波长为300nm紫外灯下检测出DNA分子，需要在琼脂糖溶液中加入适量的__________ 。
(3)为鉴定重组质粒是否构建成功以及是否成功导入A菌，将其接种在含抗生素_________ （填“M”或“N”）的培养基上培养，将3个不同菌落扩大培养后提取质粒分别进行双酶切并进行电泳，结果如图3所示（片段过小时检测不到条带）。据图分析，菌落________ 中成功导入了重组质粒。
(4)为检测B菌的纤维素分解能力，将含有20%纤维素的培养基分为三组，进行不同处理后，在相同条件下培养一段时间，测定培养基中纤维素含量，结果如图4所示，对照组2的处理为接种________ ，说明________ 。
(2)CBHII基因中无上述限制醇的酶切位点，两端需添加相关酶切位点才能在酶切后与pUT质粒连接，PCR扩增过程中，最早经过
(3)为鉴定重组质粒是否构建成功以及是否成功导入A菌，将其接种在含抗生素
(4)为检测B菌的纤维素分解能力，将含有20%纤维素的培养基分为三组，进行不同处理后，在相同条件下培养一段时间，测定培养基中纤维素含量，结果如图4所示，对照组2的处理为接种
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【推荐2】现阶段新冠病毒抗原检测试剂盒开始广泛投入使用，各地区也在广泛进行核酸检测。为了探究这两种检测方式的准确性（结果以阳性比例为指标）随感染天数的变化规律，进行了以下实验。
(1)实验思路：选取健康未感染过新冠病毒的小鼠100只，分别标号1-100；并同时进行病毒感染处理，然后______________________ ，计算小鼠的抗原检测阳性和核酸检测阳性比例。
(2)实验分析：
①该实验选取数量较多的小鼠进行实验目的是______________________ 。
②原理分析：
抗原检测（原理见上图）往往是通过鼻拭子采集细胞及粘液样本，在缓冲液里进行___________ 处理，释放出各种物质，然后加入样品槽中，与样品槽中的新冠病毒蛋白单抗混合后，利用___________ 法进行分离，从而确定是否为抗原阳性。
核酸检测往往是通过咽拭子采集细胞及粘液样本，经一定的处理后得到病毒遗传物质，然后经过___________ 扩增，通过检测产物量（与荧光强度呈正比）来确定是否为核酸阳性。
③结果分析：
若抗原检测阳性，则会在___________ 线上出现阳性标记，而无效检测会在T线和C线上都不出现阳性标记。
实验结果发现核酸检测阳性结果的出现早于抗原检测，且核酸检测阳性的小鼠比例都高于抗原检测阳性比例，可能的原因是___________ 。
(3)实际应用：
与核酸检测相比，抗原检测虽然不够灵敏，但是有___________ 的优点；实际使用中发现，若人体感染了其他病毒，不会造成抗原检测假阳性，原因是______________________ ；若某个人从中风险地区回家后，自行进行抗原检测，结果呈阴性，但是防疫部门仍建议居家隔离一段时间，原因是___________ 。
(1)实验思路：选取健康未感染过新冠病毒的小鼠100只，分别标号1-100；并同时进行病毒感染处理，然后
(2)实验分析：
①该实验选取数量较多的小鼠进行实验目的是
②原理分析：
抗原检测（原理见上图）往往是通过鼻拭子采集细胞及粘液样本，在缓冲液里进行
核酸检测往往是通过咽拭子采集细胞及粘液样本，经一定的处理后得到病毒遗传物质，然后经过
③结果分析：
若抗原检测阳性，则会在
实验结果发现核酸检测阳性结果的出现早于抗原检测，且核酸检测阳性的小鼠比例都高于抗原检测阳性比例，可能的原因是
(3)实际应用：
与核酸检测相比，抗原检测虽然不够灵敏，但是有
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【推荐3】水稻在长日照和短日照下都能开花，开花起始时间影响其地区适应性和最终产量。为了研究水稻响应光周期调控开花的机制，科研人员在突变库中筛选到一个在长日照下晚开花的突变体L、并对该突变体L株系进行了相关研究。
(1)正常开花和晚开花由一对等位基因控制，科研人员利用突变体L与野生型水稻进行杂交实验，在长日照条件下，F1都现为正常开花，F2出现1/4晚开花，说明晚开花的性状是由_________ （填“显性”或“隐性”）基因控制。
(2)水稻的染色体上有短串联重复序列（SSR），非同源染色体上的SSR、不同品种的同源染色体上的SSR都不同，因此SSR技术可用于基因在染色体上的定位。科研人员先提取不同水稻个体的DNA，再利用特定的引物对9号染色体上特异的SSR进行PCR扩增并电泳分析，结果如图：
①野生型和突变体L的9号染色体的SSR扩增结果_________ （填“相同”或“不同”）。
②若控制晚开花的基因在9号染色体上，推测F2中晚开花个体SSR扩增结果，请在答题卡对应的图中画出4、5、41号个体的电泳条带；
若控制晚开花的基因不在9号染色体上，则F2中晚开花个体SSR扩增结果有__________ 种类型，比例是_________ ；
③根据电泳结果科研人员判断控制晚开花的基因在9号染色体上。
(3)进一步研究发现，突变体L的9号染色体上的S基因缺失。S基因编码组蛋白甲基转移酶，可以将甲基基团转移到组蛋白上。科研人员检测了突变株系L和野生型植株的开花期及开花相关基因（T和R基因）的相对表达量，结果如表所示。其它研究表明H基因可以激活T基因和R基因的转录，H基因组蛋白的甲基化水平受S基因的控制。请分析突变体L响应长日照光周期调控晚开花的机理是__________ 。
注：开花期指从播种到抽穗10%的时间
(4)有研究表明：水稻延迟开花有利于籽粒长度和质量的增加。综合以上信息，请提出突变株系L在农业生产中的应用前景：__________ 。
(1)正常开花和晚开花由一对等位基因控制，科研人员利用突变体L与野生型水稻进行杂交实验，在长日照条件下，F1都现为正常开花，F2出现1/4晚开花，说明晚开花的性状是由
(2)水稻的染色体上有短串联重复序列（SSR），非同源染色体上的SSR、不同品种的同源染色体上的SSR都不同，因此SSR技术可用于基因在染色体上的定位。科研人员先提取不同水稻个体的DNA，再利用特定的引物对9号染色体上特异的SSR进行PCR扩增并电泳分析，结果如图：
①野生型和突变体L的9号染色体的SSR扩增结果
②若控制晚开花的基因在9号染色体上，推测F2中晚开花个体SSR扩增结果，请在答题卡对应的图中画出4、5、41号个体的电泳条带；
若控制晚开花的基因不在9号染色体上，则F2中晚开花个体SSR扩增结果有
③根据电泳结果科研人员判断控制晚开花的基因在9号染色体上。
(3)进一步研究发现，突变体L的9号染色体上的S基因缺失。S基因编码组蛋白甲基转移酶，可以将甲基基团转移到组蛋白上。科研人员检测了突变株系L和野生型植株的开花期及开花相关基因（T和R基因）的相对表达量，结果如表所示。其它研究表明H基因可以激活T基因和R基因的转录，H基因组蛋白的甲基化水平受S基因的控制。请分析突变体L响应长日照光周期调控晚开花的机理是
| 条件 | 材料 | 开花期 | S基因 | T基因 | R基因 |
| 长日照 | 野生型 | 78天 | 0.07 | 1.37 | 0.027 |
| 突变体L | 98天 | 0 | 0.76 | 0.001 | |
| 短日照 | 野生型 | 60天 | 0.07 | 1.51 | 0.034 |
| 突变体L | 60天 | 0 | 1.58 | 0.033 |
注：开花期指从播种到抽穗10%的时间
(4)有研究表明：水稻延迟开花有利于籽粒长度和质量的增加。综合以上信息，请提出突变株系L在农业生产中的应用前景：
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【推荐1】研究人员用粗糙脉孢菌对有性生殖过程中同种基因之间的关系进行研究。粗糙脉孢菌的菌丝体每个细胞核中具有1个染色体组（n）。有性生殖时，菌丝体产生分生孢子（n）后，两个分生孢子融合成为合子（2n），合子减数分裂产生4个单倍体核（n），之后经过一系列过程发育为新的子代菌丝体（n）。
（1）若某菌丝体的基因型是A，另一菌丝体的基因型是a，在不考虑变异的情况下，二者杂交产生的后代菌丝体的基因型为_________ 种，比例为_________ 。
（2）将2个A基因（存在于一个DNA分子上）同时转入A基因缺失的菌株中，将转基因菌株与A基因缺失菌株进行杂交。杂交后代均未出现A基因所决定的表现型。对亲本菌体及减数分裂产生的4个单倍体核对应的后代进行A基因及表现型检测，结果如下所示。
①根据图1结果可以看出，后代1、2 各自的左右两条带的电泳结果不同，表明_________ ；右侧的条带中，后代1、2与转A基因亲本不同，表明后代中A基因_________ 。
②后代3、4均未出现A基因决定的表现型的最可能原因是_________ 。
（3）亲本1与亲本2杂交，对亲本菌体及某一合子产生的4个单倍体核对应的后代进行A基因及表现型检测（处理和检测方法与（2）相同）。亲本菌体中的基因分布及检测结果如下图2所示（亲本1与亲本2所示两条染色体相同）。
①减数分裂过程中，染色体的行为包括_________ 之间交叉互换，同源染色体分离和非同源染色体自由组合等。若仅考虑染色体的上述行为，不考虑其他变异情况，同时所有基因均可正常表达，理论上二者后代会出现_________ 基因型，均__________ （填能或不能）出现A基因决定的性状。
②据图2可知，实际二者杂交时，在后代中来自亲本_________ 的A基因没有发生改变。杂交后每个合子产生的后代为有A基因表现型∶无A基因表现型为1∶1的现象，出现这一现象的原因是，_________ 。
（4）综合上述可以推测，在_________ 情况下后代中会出现基因发生改变的现象。
（1）若某菌丝体的基因型是A，另一菌丝体的基因型是a，在不考虑变异的情况下，二者杂交产生的后代菌丝体的基因型为
（2）将2个A基因（存在于一个DNA分子上）同时转入A基因缺失的菌株中，将转基因菌株与A基因缺失菌株进行杂交。杂交后代均未出现A基因所决定的表现型。对亲本菌体及减数分裂产生的4个单倍体核对应的后代进行A基因及表现型检测，结果如下所示。
①根据图1结果可以看出，后代1、2 各自的左右两条带的电泳结果不同，表明
②后代3、4均未出现A基因决定的表现型的最可能原因是
（3）亲本1与亲本2杂交，对亲本菌体及某一合子产生的4个单倍体核对应的后代进行A基因及表现型检测（处理和检测方法与（2）相同）。亲本菌体中的基因分布及检测结果如下图2所示（亲本1与亲本2所示两条染色体相同）。
①减数分裂过程中，染色体的行为包括
②据图2可知，实际二者杂交时，在后代中来自亲本
（4）综合上述可以推测，在
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【推荐2】甜柿鲜果肉中含有可溶性糖、微量元素、维生素和β一胡萝卜素等多种成分，营养价值高，深受消费者的喜爱。甜柿的自然脱涩与乙醛代谢关键酶基因（PDC）密切相关，推测涩味程度可能与PDC基因的表达情况有关。为筛选PDC基因的调控蛋白，科研人员进行了下列实验。回答下列问题。
(1)启动子位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的位点，同时启动子区域存在着许多调控蛋白的结合位点，RNA聚合酶和调控蛋白共同影响了基因的______ 水平。
(2)PDC基因的启动子序列未知，为获得大量该基因启动子所在片段，可利用限制酶将基因组DNA进行酶切，然后在___________ 的作用下将已知序列信息的接头片段连接在PDC基因的上游，根据接头片段和PDC基因编码序列设计引物进行__________ 扩增，在扩增过程中使用的酶称为____ ，在该酶的作用下可以将4种脱氧核苷酸加到引物____ 的一端。
(3)AD基因表达出的AD蛋白与启动子足够靠近时，能够激活后续基因转录，据此可利用与AD蛋白形成的融合蛋白来筛选待测蛋白。利用质粒A构建含有PDC基因启动子片段的重组质粒并导入代谢缺陷型酵母菌，用不含__________ 的培养基可筛选出成功转化的酵母菌Y1H；将从甜柿中提取的RNA逆转录形成的各种cDNA与质粒G连接后导入酵母菌，此时应选择质粒G中的位点__________ （填序号1～5）作为cDNA的插入位点，最终获得携带不同cDNA片段的酵母菌群Y187。
(4)重组酵母Y1H与Y187能够进行接合生殖，形成的接合子含有两种酵母菌质粒上的所有基因。若接合子能在含有__________ 的培养基中生存，则推测待测蛋白是PDC基因的调控蛋白。
(1)启动子位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的位点，同时启动子区域存在着许多调控蛋白的结合位点，RNA聚合酶和调控蛋白共同影响了基因的
(2)PDC基因的启动子序列未知，为获得大量该基因启动子所在片段，可利用限制酶将基因组DNA进行酶切，然后在
(3)AD基因表达出的AD蛋白与启动子足够靠近时，能够激活后续基因转录，据此可利用与AD蛋白形成的融合蛋白来筛选待测蛋白。利用质粒A构建含有PDC基因启动子片段的重组质粒并导入代谢缺陷型酵母菌，用不含
(4)重组酵母Y1H与Y187能够进行接合生殖，形成的接合子含有两种酵母菌质粒上的所有基因。若接合子能在含有
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【推荐3】经研究发现，将PVY﹣CP基因导入马铃薯，使之表达即可获得抗PVY病毒马铃薯，而PVY﹣CP基因位于某种环状DNA分子中．如图1表示获得抗病毒马铃薯的操作过程，其中①﹣⑧表示步骤，NPTⅡ基因是卡那霉素抗性基因，图中农杆菌不含此基因．表是图中限制酶识别序列和切割位点．
（1）步骤②中Klenow酶能将DNA片段的黏性末端变成平末端，且DNA长度不变，据此推测，其功能与下列酶的功能相同的是_____
A．限制性核酸内切酶 B．解旋酶 C．DNA连接酶 D．DNA聚合酶
（2）由步骤②所获取的片段中，图1中BamHⅠ的酶切位点位于_____ ．
（3）由步骤③获取的目的基因有_____ 个黏性末端；步骤④中选用的限制酶是_____ ；经步骤⑤所形成的结构是_____ ．
（4）为了筛选农杆菌，可以在培养基中加入_____ 进行筛选．利用农杆菌转化法获得含目的基因的马铃薯细胞，进而通过_____ 技术获得抗PVY病毒马铃薯苗，最后进行相关的鉴定．
（1）步骤②中Klenow酶能将DNA片段的黏性末端变成平末端，且DNA长度不变，据此推测，其功能与下列酶的功能相同的是
A．限制性核酸内切酶 B．解旋酶 C．DNA连接酶 D．DNA聚合酶
（2）由步骤②所获取的片段中，图1中BamHⅠ的酶切位点位于
（3）由步骤③获取的目的基因有
（4）为了筛选农杆菌，可以在培养基中加入
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【推荐1】谷氨酸脱羧酶能以谷氨酸钠为前体产生γ-氨基丁酸，蛋白质复合物SNOI-SNZI能提高谷氨酸脱羧酶的活性。将谷氨酸脱羧酶基因gadB(1401bp)和基因SNOI(675bp) 、SNZI (894bp)（括号内数字为距启动子的位置） 导入大肠杆菌， 以探究该复合物对其生产能力的影响。请回答下列问题：
(1)构建基因表达载体前，需先通过PCR 分别扩增目的基因片段，扩增反应体系应添加引物、模板、_____ 、缓冲液等，添加引物量不宜过多，原因主要是_____ 。
(2)表1 是相关基因扩增所用引物的部分序列，表2是多种限制酶的识别序列和切割位点。构建重组质粒时，先将gadB 和 pTrc99a质粒(4176bp)分别用限制酶_____ 进行双酶切， 并连接得到重组质粒 pTrc99a-gadB。将基因 SNOI 和基因SNZI 分别连接到重组质粒 pTrc99a-gadB 上时， 均需用_____ (填限制酶)和DNA 连接酶处理，最终得到重组质粒 pTrc99a-gadB-SNOI-SNZI，如图1所示。
(3)采用电泳的方法对 pTrc99a 质粒、重组质粒 pTrc99a-gadB 和重组质粒 pTrc99a-gadB-SNO1-SNZI 进行鉴定。若构建成功， 用限制酶KpnI单酶切后电泳获得图2-A，则可推测泳道2是_____ 的电泳结果；用限制酶_____ 酶切后电泳可获得图2-B泳道3 结果。_____ 的大肠杆菌细胞中，分别获得菌株R1、R2、R3，培养后分别接种于含一定量_____ 的发酵培养基中，一段时间后测定γ-氨基丁酸含量。结果如图3所示。结果表明，与导入谷氨酸脱羧酶基因的菌株比，SNOI-SNZI基因的导入_____ 了其生产γ-氨基丁酸的能力，从能量代谢的角度分析，其原因有_____ 。
(1)构建基因表达载体前，需先通过PCR 分别扩增目的基因片段，扩增反应体系应添加引物、模板、
(2)表1 是相关基因扩增所用引物的部分序列，表2是多种限制酶的识别序列和切割位点。构建重组质粒时，先将gadB 和 pTrc99a质粒(4176bp)分别用限制酶
表1 | ||
| 基因 | 引物1部分序列(5'→3') | 引物2部分序列(5'→3') |
| gadB | TCGCCCATGGCCATGATAAG | CTTCGGTACCTTAGGTATGT |
| SNZ1 | CTAAGGATCCGAAGGAGATA | CCTTCTCTAGATTACCACCC |
| SNO1 | TCGCGGTACCAAGGAGATAT | CTTCGGATCCTTAATTAGAA |
表2 | |
| 限制酶 | 识别序列 和酶切位点 |
| Xba Ⅰ | T↓CTAGA |
| Kpn Ⅰ | GGTAC↓C |
| Nco Ⅰ | C↓CATGG |
| BamH Ⅰ | G↓GATCC |
(3)采用电泳的方法对 pTrc99a 质粒、重组质粒 pTrc99a-gadB 和重组质粒 pTrc99a-gadB-SNO1-SNZI 进行鉴定。若构建成功， 用限制酶KpnI单酶切后电泳获得图2-A，则可推测泳道2是
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【推荐2】近年来，生物柴油作为新型能源已经成为世界上应用最广泛、发展迅猛的可再生能源之一、研究人员利用基因工程的方法将油料作物紫苏DGAT1基因导入四尾栅藻（操作过程如下图），获得转基因的产油微藻，并利用地热废水培养，不仅能生产生物柴油，还能治理地热废水。请回答：
表 限制酶及其识别序列
注：LacZ基因可使细菌利用加入培养基的物质X﹣gal，从而使菌落显现出蓝色。若无该基因或该基因被破坏，则菌落成白色。
(1)将经过处理的连接产物导入到经CaCl2处理后的处于感受态的大肠杆菌细胞，并接种到添加_____ 的培养基上培养，一段时间后，挑选颜色为_____ 的菌落用液体培养基培养，提取质粒pMD19-DGAT1。
(2)用限制酶酶切pMD19-DGAT1获得DGAT1基因，并与酶切后的载体pBI121连接得到_____ ，并导入到四尾栅藻。DGAT1基因序列两端无限制酶酶切位点，由上表中信息推测扩增DGAT1基因时所用一对引物的一端分别加上的限制酶识别序列是_____ 。
(3)为了判断DGAT1基因是否导入四尾栅藻细胞，可利用PCR技术进行检测，已知紫苏DGAT1基因部分序列如下（左侧为基因的首端）：
5'…CCGTGT……ATGCCT…3'
3'…GGCACA……TACGGA…5'
根据上述序列选择引物_____（填字母）进行PCR。
(4)研究人员利用地热废水培养转基因四尾栅藻并检测其油脂含量，结果如下图。结果显示：_____ 。
(5)为检测转基因四尾栅藻对地热废水的去污能力，研究人员设计实验并得到相应实验结果如下表。
该实验不能说明转DGAT1基因显著提高了四尾栅藻的去污能力。请进一步完善实验设计：_____ 。
表 限制酶及其识别序列
| 限制酶 | 识别序列 |
| BamHⅠ | 5’﹣G↓GATCC﹣3’ 3’﹣CCTAG↑G﹣5’ |
| HindⅢ | 5’﹣A↓AGCTT﹣3’ 3’﹣TTCGA↑A﹣5’ |
| EcoRⅠ | 5’﹣G↓AATTC﹣3’ 3’﹣CTTAA↑G﹣5’ |
| XbaⅠ | 5’﹣T↓CTAGA﹣3’ 3’﹣AGATC↑T﹣5’ |
(1)将经过处理的连接产物导入到经CaCl2处理后的处于感受态的大肠杆菌细胞，并接种到添加
(2)用限制酶酶切pMD19-DGAT1获得DGAT1基因，并与酶切后的载体pBI121连接得到
(3)为了判断DGAT1基因是否导入四尾栅藻细胞，可利用PCR技术进行检测，已知紫苏DGAT1基因部分序列如下（左侧为基因的首端）：
5'…CCGTGT……ATGCCT…3'
3'…GGCACA……TACGGA…5'
根据上述序列选择引物_____（填字母）进行PCR。
| A．引物：5'-GGCACA-3' | B．引物：5'-AGGCAT-3' |
| C．引物：5'-CCGUGU-3' | D．引物：5'-CCGTGT-3' |
(5)为检测转基因四尾栅藻对地热废水的去污能力，研究人员设计实验并得到相应实验结果如下表。
| 指标 | 总氮（mg/L） | 总磷（mg/L） | 氟化物（mg/L） |
| 废水培养基 | 23．2 | 4．32 | 4．56 |
| 培养转基因四尾栅藻11天后 | 1．9 | 0．45 | 0．84 |
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非选择题-实验题
|
较难
(0.4)
【推荐3】Ⅰ.在以鸡血为实验材料的DNA进行粗提取的实验中，若需进一步提取杂质较少的DNA，可以依据的原理是( )
A.DNA不溶于酒精,而细胞中的某些蛋白质则溶于酒精
B.在沸水浴的条件下，DNA与二苯胺试剂反应呈现蓝色
C.大多数蛋白质不能忍受60-80℃的高温，而DNA能忍受
D.DNA在浓度为0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最小
Ⅱ.基因工程疫苗是把天然的或人工合成的遗传物质定向插入细菌、酵母菌或哺乳动物细胞中，使之充分表达，经纯化后而制得的疫苗。例如将乙型肝炎病毒表面抗原的基因插入酵母菌基因组中，可制成DNA重组乙型肝炎疫苗。请回答下列问题：
（1）获取乙型肝炎病毒表面抗原基因的方法有多种。例如，可根据表面抗原蛋白质的结构推测________ ，进而推测目的基因的脱氧核苷酸序列，再进行人工合成。目的基因合成后可在Taq酶的作用下通过PCR技术大量扩增，该技术的原理是________________________ ，PCR扩增前要根据一段已知目的基因的核苷酸序列合成____________ 。
（2）目的基因在导入酵母菌细胞之前需要构建基因表达载体，该过程需要的工具酶有____________ 。基因表达载体中应有RNA聚合酶识别和结合的部位，该部位称为____________ 。
（3）目的基因在受体细胞内是否翻译出蛋白质，可用____________ 技术来检测。若研究人员将目的基因导入酵母菌细胞后，未能稳定维持和表达其遗传特性，分析其原因可能是：________________________ （答出两点即可）。
（4）实验证明，一定时间内间隔注射该疫苗3次效果更好，其主要原因是________________________ 。
A.DNA不溶于酒精,而细胞中的某些蛋白质则溶于酒精
B.在沸水浴的条件下，DNA与二苯胺试剂反应呈现蓝色
C.大多数蛋白质不能忍受60-80℃的高温，而DNA能忍受
D.DNA在浓度为0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最小
Ⅱ.基因工程疫苗是把天然的或人工合成的遗传物质定向插入细菌、酵母菌或哺乳动物细胞中，使之充分表达，经纯化后而制得的疫苗。例如将乙型肝炎病毒表面抗原的基因插入酵母菌基因组中，可制成DNA重组乙型肝炎疫苗。请回答下列问题：
（1）获取乙型肝炎病毒表面抗原基因的方法有多种。例如，可根据表面抗原蛋白质的结构推测
（2）目的基因在导入酵母菌细胞之前需要构建基因表达载体，该过程需要的工具酶有
（3）目的基因在受体细胞内是否翻译出蛋白质，可用
（4）实验证明，一定时间内间隔注射该疫苗3次效果更好，其主要原因是
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