【推荐1】某猪场发现有因高热症死亡的仔猪，疑似是感染了P病毒引起的，科学家进行了一系列研究。回答下列问题：
(1)病毒的提取：取疑似感染P病毒的猪组织，经剪碎、研磨，加入动物细胞培养液制成细胞悬液，在-20℃反复冻融3次使细胞______，离心后取______，用______方法除菌后低温保存备用。
(2)病毒的培养与分离：MARC-145细胞（非洲绿猴胚胎肾细胞），是实验室常用的一种细胞系，在培养时通常需在合成培养基中加入一定比例的______，以补充某些未知的营养成分。取1mL经（1）过程处理的产物接种于含MARC-145细胞的培养瓶中， 37℃吸附1h，添加9mL的细胞培养液后，在______中培养４~７天 ，逐日观察记录细胞病变情况。无病变则可继续分瓶进行_______培养，有病变的细胞培养液则重复（1）步骤获得病毒，在_______下观察其形态结构以帮助确诊。
(3)病毒的遗传特性分析：将分离的病毒RNA提取后，利用RT-PCR技术（即利用逆转录和PCR技术）对其进行遗传特性分析。进行RT-PCR时，反应体系中需要加入_______酶；体系中加入的______可提供原料和能量。利用该技术，若在总cDNA中专一性的扩增出P病毒特定cDNA片段，则确认病猪感染了P病毒，原因是______。

【推荐3】肠道病毒71型（EV71）为单股正链RNA病毒，是引起手足口病的主要病原体之一，在EV71中，病毒结构蛋白1（VP1）为主要的中和抗原（中和抗原与中和抗体结合后能阻止病原体入侵与增殖）。下图为利用重组大肠杆菌表达VP1蛋白，并以VP1蛋白为抗原制备单克隆抗体的过程。回答以下问题。

(1)重组大肠杆菌中，由EV71病毒的RNA构建cDNA需经过_____过程，随后cDNA通过PCR技术扩增。将目的基因导入大肠杆菌需要构建表达载体，常用的表达载体是_____。
(2)在小鼠腹腔内注射VP1蛋白进行免疫，在35天获取B淋巴细胞悬液进行融合。在获取B淋巴细胞前3天需在腹腔再次注射VP1蛋白，这样做的原因是_____。
(3)缺失HPRT基因的细胞无法在HAT培养基中生存，HAT培养基可以筛选出骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合的杂交瘤细胞，其它细胞都会死亡。据此推测，在单克隆抗体制备过程中缺失HPRT基因的细胞是_____（填“大肠杆菌”“B淋巴细胞”“骨髓瘤细胞”）。
(4)在杂交瘤细胞筛选培养过程中需在培养基中添加胎牛血清，并置于37℃、50mL/LCO₂培养箱中培养。培养箱中CO₂的作用是_____。
(5)下图是研究人员对不同单克隆抗体（A/B）的检测结果。哪一种单克隆抗体适合进入下一步研制？判断并说出理由：_____。

(6)该单克隆抗体成功制备后，对于防治手足口病有什么作用？_____

【推荐1】干扰素是一类具有高效广谱抗病毒且有多种功能的活性蛋白质（主要是糖蛋白），是一种由单核细胞和淋巴细胞产生的细胞因子，可以增强吞噬细胞的吞噬活性以及淋巴细胞抗病毒活性等，是机体防御系统的重要组成部分。目前，原核表达系统生产干扰素的方法已经趋于成熟，但其活性受到宿主菌、表达载体、诱导表达条件及蛋白质修饰等多种不确定因素的影响。因此，研究和开发干扰素的真核表达系统则是一种安全可靠的途径。AH109酵母菌株本身是色氨酸（Trp）和亮氨酸（Leu）缺陷的菌株，无法在缺少色氨酸和亮氨酸的培养基中生长，可以用来进行转化筛选。

(1)为了通过PCR技术获取干扰素基因，设计了两种引物，在引物间和引物内的碱基都不能互补，其原因是___________。
(2)获得的干扰素基因片段纯化后用HindⅢ和SalI双酶切、真核表达载体用HindⅢ和XhoI双酶切并纯化，通过___________酶将干扰素基因插入载体。基因和载体均用双酶切的原因是__________，将连接产物转化至大肠杆菌，用菌落PCR和测序鉴定重组干扰素载体。将鉴定成功的干扰素载体转化至酵母菌株AH109，接种到___________培养基中筛选，提取其重组菌中质粒作PCR鉴定能够获得可表达干扰素的重组菌株。
(3)经检测发现，大肠杆菌无法将直接从人细胞中获取的干扰素基因表达出有生物活性的产物，从细胞结构角度分析，原因可能是_________________。
(4)根据以上研究通过构建鸡α干扰素基因的真核表达载体，并且以酵母AH109为宿主菌，实现鸡干扰素基因真核表达。酵母菌同时也是饲料的良好添加剂，构建高效表达鸡a干扰素基因的重组酵母菌株，将其添加至饲料中直接给鸡饲喂，其优点是___________。