【推荐2】目前，常用PCR技术对病原体进行核酸检测，该技术通过放大或复制人的样本中存在的遗传物质来发挥作用。回答下列问题：
(1)PCR技术是一项根据__________原理，在体外对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。
(2)进行检测时，需要进行以下操作：①从病人组织样本中提取DNA；②分析PCR扩增结果；③采集病人组织样本；④利用PCR扩增DNA片段。若要得到正确的检测结果，正确的操作顺序应该是___________（用数字序号表示）。
(3)为了做出正确的诊断，PCR反应所用的__________应该能与病原菌的两条单链DNA特异性结合，在反应过程中，使用DNA聚合酶能够从其____________端开始连接脱氧核苷酸，快速扩增目的基因。
(4)PCR反应中的每次循环可分为变性、复性、__________三步，其中变性的结果是__________。PCR产物常用__________鉴定。

【推荐3】基因工程在农业中的应用发展迅速，基因可导入农作物中，用于改良该农作物性状。通过多重PCR技术可扩增并检测转基因农作物的外源基因成分。多重PCR是在一个PCR反应体系中加入多对引物，针对多个DNA模板或同一模板的不同区域，扩增多个目的基因的PCR技术。请回答下列问题：
(1)我国科学家将Bt毒蛋白基因、鱼的抗冻蛋白基因、控制果实成熟的基因导入农作物，可获得____、____、延熟的转基因作物。
(2)每种基因扩增需要一对引物的原因是____。下表是AB、C三种基因的引物，据表分析，引物特异性主要体现在____。

A基因	引物1	5′－GCTCCTACAAATGCCATCATTGC－3′
	引物2	5′－GATAGTGGGATTGTGCGTCATCCC－3′
B基因	引物1	5′－TGAATCCTGTTGCCGGTCTT－3′
	引物2	5′－AAATGTATAATTGCGGGACTCTAATC－3′
C基因	引物1	5′－CCTTCATGTTCGGCGGTCTCG－3′
	引物2	5′－GCGTCATGATCGGCTCGATG－3′

(3)PCR过程中温度从90 ℃以上降到55 ℃左右的目的是____。
(4)检测人员通过多重PCR技术确定农作物中是否含有A、B、C三种转基因。将A、B、C三种基因和待测的农作物基因样品进行PCR，扩增后的产物再进行电泳，结果如图。

1为已知A、B、C三种基因对照，2、3、4为待测农作物样品，据图分析：含有三种转基因的农作物是____，判断依据是____。
(5)与PCR技术相比，多重PCR技术的优势是____。

【推荐1】人呼吸道合胞病毒（HRSV）是一种单链RNA病毒，下图是构建人呼吸道合胞病毒基因组载体的示意图，下表是相关限制酶的识别序列及切割位点，请回答：

限制酶	BclI	EcoRI	XbaI	Sau3AI	BamHI
识别序列及切割位点	T↓GATCA	G↓AATTC	T↓CTAGA	↓GATC	G↓GATCC

(1)HRSV的基因组为﹣RNA，入侵细胞后在________的催化下以________为原料合成+RNA。
(2)为了使目的基因和质粒A定向连接，选择用________酶切割质粒A，过程②设计引物时，在两种引物的________端（选填“3’”或“5’”）分别添加_______酶的识别序列。
(3)过程④将质粒B导入大肠杆菌，需要用________处理大肠杆菌。
(4)为制备减毒突变株，科研人员将单个突变碱基引入HRSV基因组cDNA质粒克隆中，流程如下图。已知在细菌体内合成的DNA分子有甲基化修饰，通过PCR扩增的DNA链无甲基化修饰。

①据图分析，DpnI能将________（选填“有”或“没有”）甲基化的DNA链水解消化掉。在大肠杆菌细胞内完成缺刻修复需要________酶。
②已知质粒B为m个，经过程①扩增15个循环，需要突变引物________个，再将经过程②形成的产物全部转入大肠杆菌后复制三轮，得到双链突变的DNA________________个。

【推荐2】下图是转基因抗冻番茄培育过程示意图（为氨苄青霉素抗性基因），其中①～④是该过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞。请据图作答（题中四种限制酶切割产生的末端不相同）：

（1）在构建基因表达载体时，可用一种或多种限制酶进行切割，为了避免目的基因和载体在酶切后发生任意连接，在此实验中应该选用__________分别对含鱼抗冻蛋白基因的DNA片段和质粒进行切割，含目的基因的DNA片段和质粒切割后产生的DNA片段分别有__________、__________个。
（2）基因工程的核心步骤是__________（填序号），该步骤的目的是____________________。为了使目的基因正常表达，其首端必须有启动子，它是__________识别和结合的部位。若限制酶切出了平末端，要选择__________（填“E·coli DNA连接酶”或“T₄ DNA连接酶”）进行连接。
（3）图中将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞的方法一般为____________________。该方法用到的Ti质粒中含有__________，可以将目的基因转移至受体细胞并整合到受体细胞的染色体上。
（4）检测番茄植株细胞中鱼抗冻蛋白基因是否成功表达，分子水平上常采用的方法是__________。

【推荐3】下图表示利用小鼠胚胎干细胞（ ES细胞）做研究、探索癌症治疗的方法。

回答下列问题。
(1)图示研究过程中使用的技术有________（至少答出3个）。
(2)a所示过程的核心步骤是________。b 过程的目的是_____，若要达成此目的，可将早期胚胎培养至_____期。d过程移入的胚胎能够存活，是因为代孕子宫不会对其发生______，且能与受体子宫建立正常的___________________联系。
(3)用肝癌细胞作抗原刺激B淋巴细胞，再将此淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合后获得细胞代谢产物_________，该产物与抗癌药物结合制成“生物导弹”，从而定向杀死小鼠体内的肝癌细胞。
(4)若要培养试管动物，除以上技术外，还需要运用_______技术。实施过程中选择去核卵母细胞作为受体细胞的原因是__________________。

【推荐1】目前国内的新型冠状肺炎疫情的形势严峻复杂，我们应提高自我防范意识，做好常态化疫情防控，在必要时需要接种加强剂疫苗。新型冠状病毒的疫苗可以通过基因工程技术制备，回答下列问题：
(1)新型冠状病毒通过其表面的S蛋白与宿主细胞表面的ACE2蛋白结合完成感染。在研制疫苗时需要以病毒的RNA为模板，通过逆转录合成相应S蛋白的基因，可利用PCR技术扩增目的基因，该技术的原理是__________，此过程每次循环分为3步，其中复性时将温度冷却至55-60℃的目的是__________，然后在_________酶作用下进行延伸。基因工程的基本操作流程中最核心的步骤是_________。
(2)制备基因工程疫苗时选择大肠杆菌等原核生物作为受体细胞，因为原核生物具有一些其他生物没有的特点：_________（写出三点），但在此过程中要先用Ca²⁺处理大肠杆菌，使其变成_________细胞。最后，检测目的基因是否翻译成蛋白质的方法是_________。

【推荐2】农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞采用最多的一种技术方法。：科研人员从某种荒漠植物细胞中提取抗旱基因，拟用来改良作物抗旱能力，从而利用大面积荒地以提高农业发展。请回答下列问题：
（1）单子叶植物中常用____________法将目的基因导入受体细胞，不用农杆菌的原因是__________。
（2）抗旱基因若是从____________（填“基因组文库”或“CDNA文库”）中获取，则不能用PCR技术扩增，是因为利用PCR技术的前提是要有________________________。
（3）用农杆菌转化法改良作物时，先将抗旱基因和农杆菌的Ti质粒连接构建表达载体，再将重组载体转入农杆菌中，该过程__________________（填“是”或“不是”）转化，理由是____________。
（4）科研人员将长势一致的转入抗旱基因的作物（实验组）和非转入抗旱基因的作物（对照组）进行____________处理，如果____________，则获得了抗旱作物。

【推荐3】水稻胚乳中含直链淀粉和支链淀粉，直链淀粉所占比例越小糯性越强。科研人员将能表达出基因编辑系统的DNA序列转入水稻，实现了对直链淀粉合成酶基因（Wx基因）启动子序列的定点编辑，从而获得了3个突变品系。
   
(1)基因工程的核心工作是
____。将能表达出基因编辑系统的DNA序列插入Ti质粒，常用Ti质粒做载体的原因是
____。
(2)根据启动子的作用推测，Wx基因启动子序列的改变影响了
____，从而改变了Wx基因的转录水平。与野生型水稻相比，3个突变品系中Wx基因控制合成的直链淀粉合成酶的氨基酸序列没有发生改变，推测原因是
____。
(3)为检测启动子变化对Wx基因表达的影响，科研人员需要检测Wx基因转录产生的mRNA （Wx mRNA）的量。检测时分别提取各品系胚乳中的总RNA，经
____过程获得总cDNA。为了确保PCR扩增出的是Wx基因的cDNA，关键操作是
____。
(4)各品系Wx mRNA量的检测结果如图所示，据图推测糯性最强的品系为
____，原因是
____。

【推荐1】接种疫苗是预防传染病的一项重要措施，乙肝疫苗的使用可有效阻止乙肝病毒的传播，降低乙型肝炎发病率。乙肝病毒是一种DNA病毒。重组乙肝疫苗的主要成分是利用基因工程技术获得的乙肝病毒表面抗原（一种病毒蛋白）。回答下列问题。若要通过实验检测目的基因在酵母细胞中是否表达出目的蛋白，请简要写出实验思路。_____

【推荐2】作为21世纪发展最快的学科，生物技术已日益影响和改变着人们的生产和生活方式：
Ⅰ．糖尿病发病率在我国近30年来增长极为迅速，发病的年龄大大提前。生产速效胰岛素以及利用转基因技术实现胰岛素的批量生产成为了目前治疗糖尿病的新思路，回答有关问题：
（1）速效胰岛素的获得是科学家将胰岛素B链的第28与第29个氨基酸的调换顺序实现的。该过程中，需要对____________（填“胰岛素”、“胰岛素基因”或“胰岛”）进行定向改造。
（2）利用转基因技术实现胰岛素的批量生产，其核心操作步骤是________________________。
Ⅱ．艾滋病（AIDS）是一种危害性极大的传染病，由感染艾滋病病毒（HIV）引起。目前医学上检测HIV的方法主要有两种：HIV核酸检测、HIV抗体检测。回答下列问题：
（1）HIV侵染人体后，病毒RNA比抗体早出现约1—2周，可通过核酸检测是否早期感染。通常是先提取疑似患者血清中的RNA通过逆转录得到____________，用于PCR扩增。PCR技术需用到的关键酶是____________。
（2）对扩增产物进行分析常采用特异性探针检测，通常采用带有标记的DNA单链作为探针。探针与（1）中得到的核酸杂交，若观察到____________显示结果为阳性，则表明疑似患者体内有HIV。
Ⅲ．第三代试管婴儿技术也称胚胎植入前遗传学诊断（PGD），是在试管婴儿技术基础上出现的。
目前PGD能诊断一些单基因缺陷引发的疾病，如血友病等。回答有关问题：
（1）试管婴儿技术操作时，首先要采集“卵子”。在采集“卵子”之前，需要给母亲注射适量的促性腺激素，目的是____________________________________。从母亲的卵巢中采集的“卵子”____________（填“能”或“不能”）直接参与受精作用。
（2）在精子入卵后，会立即产生________________________反应，拒绝其他精子再进入卵内。

【推荐3】大丽轮枝菌（一种丝状真菌）是引起棉花黄萎病的主要病原菌。为观察大丽轮枝菌对棉花根的侵染路径，研究人员利用绿色荧光蛋白基因（sGFP）转染大丽轮枝菌，培育出表达绿色荧光蛋白的转基因菌株，主要过程如下。分析回答下列问题：
   
(1)PCR扩增sGFP需要根据______设计特异性引物序列外，为保证sGFP正确插入到质粒中，还需要在目的基因两端添加图中______限制酶的识别序列。
(2)过程②需要的工具酶是______。研究中将sGFP插入启动子和终止子之间的目的是______。
(3)选择过程③筛选培养得到的不同农杆菌菌落，分别提取细菌质粒DNA，并用BamHI和HindIII完全酶切，可以得到______种长度不同的DNA片段。
(4)将导入重组质粒的农杆菌加入大丽轮枝菌的孢子细胞悬液中，在适宜条件下完成转染后利用滤膜过滤得到孢子细胞，再在真菌培养基上培养获得菌落，最终通过检测____________，筛选出绿色荧光蛋白旺盛表达的大丽轮枝菌。