【推荐1】枯草芽孢杆菌可分泌纤维素酶。研究者筛选到一株降解纤维能力较强的枯草芽孢杆菌菌株（B菌），从中克隆得到了一种纤维素酶（C₁酶）基因。将获得的C₁酶基因与高效表达载体（HT质粒）连接，再导入B菌，以期获得降解纤维素能力更强的工程菌。
（1）纤维素属于_______糖，因此经过一系列酶催化最终可降解成单糖，该单糖是_______。
（2）对克隆到的C₁酶基因测序，与数据库中的C₁酶基因编码序列相比有两个碱基对不同，但两者编码出的蛋白的氨基酸序列相同，这是因为_______。
（3）C₁酶基因以B链为转录模板链，转录时mRNA自身的延伸方向为_______。为了使C₁酶基因按照正确的方向与已被酶切的HT质粒连接，克隆C₁酶基因时在其两端添加了Sma I 和BamH I的酶切位点。该基因内部没有这两种酶切位点。图1中酶切位点1和2所对应的酶分别是_______和_______。

（4）转化形成工程菌的过程中，枯草芽孢杆菌应先用_______处理，使其处于能吸收周围DNA的状态。
（5）将纤维素含量为20%的培养基分为三组，一组接种工程菌，对照组1不进行处理，对照组2进行相应处理。在相同条件下培养96小时，检测培养基中纤维素的含量。结果（图2）说明_______降解纤维素的能力最强。对照组2的处理应为_______。
（6）预期该工程菌在处理废弃物以保护环境方面可能的应用_______。（举一例）

【推荐2】基因工程将科学原理转化为工艺和产品，由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫重组DNA技术，回答下列问题：
(1)建立某种生物的cDNA文库时，用该生物发育的某个时期的_____________产生互补的DNA，与载体连接导入受体菌中，该文库中的基因_____________（填“有”或“无”）启动子，_____________（填“全部基因”或“部分基因”）可进行物种间的基因交流。
(2)PCR扩增目的基因时，若碱基G、C含量较高，所需的解旋温度_____________。PCR反应中的每次循环可分为变性、复性、延伸三步，其中复性的结果是_____________。
(3)基因工程的核心步骤是__________________________，将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是_______________，该方法中使目的基因得以稳定维持和表达的关键是________________________。

【推荐3】习近平总书记在参加十四届全国人大一次会议江苏代表团审议时强调，"农业强国是社会主义现代化强国的根基，推进农业现代化是实现高质量发展的必然要求”。目前，资源要素投入对粮食产量提升的驱动力明显减弱，亟须转基因等前沿技术新突破为保障粮食安全注入新动能。2023年，我国转基因大豆、转基因玉米的产业化试点已进一步扩大。如图1、2所示是转抗草甘膦基因—cp4-epsps大豆培育时利用的质粒和目的基因。回答下列问题:   

(1))已知质粒与含抗除草剂基因的DNA片段中限制酶的切割位点如图所示，处理质粒和目的基因时选用的限制酶为_____；构建重组质粒还需要_____酶；质粒中的抗性基因可用于____。
(2)若需要用PCR技术扩增抗除草剂基因，此过程需要用到____酶。连续扩增循环2次，需要的引物数为____个；延伸子链从引物的____端延伸。
(3)将重组质粒导入大豆体细胞常用____法。筛选出转化成功的细胞后进行植物组织培养时，在不同时期使用的培养基存在差异，不同培养基最大的区别是____。
(4)写出检验转基因抗除草剂大豆抗除草剂效果的详细实验思路____。

【推荐1】科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。下图是转基因抗冻番茄的培育过程示意图。

(1)若图中Ⅱ是科学家构建的鱼抗冻蛋白基因的表达载体，则该基因表达载体的组成通常应包括____________________等。
(2)科学家常采用________法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。通常采用________技术检测目的基因是否插入番茄的基因组。
(3)多聚半乳糖醛酸酶(PG酶)可将成熟的番茄果实细胞壁中的多聚半乳糖醛酸降解为半乳糖醛酸，从而导致果实软化。抑制PG酶的活性可以延长番茄果实储藏期，请用文字描述采用蛋白质工程技术降低该酶活性的一般过程。
___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。

【推荐2】某一质粒载体如图所示，外源DNA插入到Amp^r或Tet^r中会导致相应的基因失活（Amp^r表示氨苄青霉素抗性基因，Tet^r表示四环素抗性基因）。有人将此质粒载体用BamHⅠ酶切后，与用BamHⅠ酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连续反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌。结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因，含有质粒载体，含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题：

（1）质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有________（答出两点即可）。而作为基因表达载体，除满足上述基本条件外，还需具有____和_____。
（2）如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述四种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞是不能区分的，其原因是________；在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌单菌落，还需使用含有______的固体培养基。

【推荐3】凝血因子VIII，又名抗血友病球蛋白A，传统方法只能从人血浆中制备。现欲用基因工程等生物工程技术，获得转基因山羊，从其乳汁中分离获得凝血因子VIII。请回答下列问题：
（1）构建的基因表达载体应该包括，目的基因、启动子、终止子、_____等。其中启动子的作用是______。
（2）扩增凝血因子VIII基因，可使用PCR技术，使用此技术的前提是__________，以便根据这一序列合成引物。PCR技术所利用的关键酶是____________。
（3）目的基因导入绵羊受体细胞，采用最多也是最为有效的方法是_____________技术。为检测凝血因子VIII基因的表达情况，可提取受体细胞的_______________，用抗凝血因子VIII的抗体进行杂交实验。
（4）用限制酶A和限制酶B切割质粒和凝血因子VIII基因，在DNA连接酶的作用下可构建所需重组质粒，原因是 _____________ 。

【推荐1】阅读下面的材料，回答问题
胰岛素的应用是糖尿病治疗历史上的一个里程碑。胰岛素自1922年用于临床以来，就成为治疗糖尿病的特效药物。目前全世界糖尿病患者已超过四亿，为临床提供充足、质量可靠的胰岛素制剂是现代生物制药领域的一项重要工程。
人胰岛素由胰岛 β 细胞合成，核糖体上最初形成的是前胰岛素原单链多肽，进入内质网腔后，信号肽被切除，形成胰岛素原。高尔基体内的特异性肽酶将胰岛素原的 C 肽区域切除，A 链和 B 链通过二硫键形成共价交联的活性胰岛素（如图）。

最初用于临床的胰岛素几乎都是从猪、牛胰脏中提取的。猪、牛胰岛素与人胰岛素生理功能相似，但氨基酸序列有微小差异。接受动物胰岛素治疗的患者有5％～10％出现不同程度的过敏反应，抗动物胰岛素抗体还可能对患者的胰岛 β 细胞功能产生负面影响。
随着基因工程技术的发展，重组人胰岛素逐渐取代动物胰岛素。早期的重组人胰岛素生产，采用A、B链分别表达法。后来该方法被胰岛素原表达法取代，即由大肠杆菌合成胰岛素原，然后经细胞外酶切获得胰岛素。1987年用酵母菌生产重组人胰岛素的方法出现。重组人胰岛素的结构与人体自身分泌的胰岛素结构完全相同，但无法完全模拟生理胰岛素曲线，容易导致血糖波动，甚至导致低血糖发生。
上世纪90年代，科学家通过改变胰岛素的氨基酸序列和结构，研制出能更好模拟生理胰岛素分泌特点的胰岛素类似物，包括速效胰岛素和长效胰岛素类似物。例如，将人胰岛素 B 链第28位的脯氨酸替换为天门冬氨酸，可有效抑制胰岛素单体的聚合，皮下注射这种速效胰岛素类似物后，起效快（10-20分钟起效）、血药浓度峰值高、药效消失快，已经在临床上广泛应用。
（1）用猪胰岛素进行治疗，易诱导入体产生抗猪胰岛素抗体，原因是_____。
（2）人胰岛素基因有 2 个内含子。利用大肠杆菌通过胰岛素原法生产重组人胰岛素，获取目的基因时，不宜采用的方法是_____
a．直接从细胞内总 DNA 中分离目的基因
b．用化学方法直接人工合成目的基因
c．以 mRNA 为模板逆转录合成目的基因
d．利用 PCR 扩增人胰岛素原基因的编码序列
（3）与大肠杆菌相比，利用酵母菌生产胰岛素的优势有_____。
（4）重组人胰岛素工程菌构建完成后，还需要通过_____工程技术进行胰岛素的生产。
（5）正常人胰岛素的生理性分泌，可分为基础胰岛素分泌（24小时持续脉冲式分泌微量胰岛素，维持空腹状态下血糖稳定）和进餐后的胰岛素分泌。能更好地模拟餐时生理胰岛素曲线的是_____（选填速效或长效）胰岛素类似物。
（6）请写出通过蛋白质工程，构建胰岛素类似物工程菌的基本过程_______________________。

【推荐2】阅读如下材料：
材料甲：科学家将牛生长激素基因导入小鼠受精卵中，得到了体型巨大的“超级小鼠”；科学家采用农杆菌转化法培育出转基因烟草。
材料乙：T₄溶菌酶在温度较高时易失去活性，科学家对编码T₄溶菌酶的基因进行改造，使其表达的T₄溶菌酶的第3位的异亮氨酸变为半胱氨酸，在该半胱氨酸与第97位的半胱氨酸之间形成了一个二硫键，提高了T₄溶菌酶的耐热性。
材料丙：兔甲和兔乙是同一物种的两个雌性个体，科学家将兔甲受精卵发育成的胚胎移植到兔乙的体内，成功产出兔甲的后代，证实了同一物种的胚胎可在不同个体的体内发育。
请根据上述材料回答下列问题：
1．材料甲属于基因工程的范畴。将基因表达载体导入小鼠的受精卵中常用的方法是____________，构建基因表达载体常用的工具酶有_______________。在培育转基因植物时常用农杆菌转化法，农杆菌的作用是__________
2．材料乙属于_______工程范畴。在该实例中，引起T₄溶菌酶空间结构改变的原因是________________。
3．材料丙属于胚胎工程的范畴。胚胎移植是指将获得的早期胚胎移植到______种的、生理状况相同的另一个雌性动物体内，使之继续发育成新个体的技术。在材料丙的实例中，兔甲称为___________体，兔乙称为____________体。

【推荐3】目前，新型冠状病毒（属于RNA病毒）仍在全球肆虐横行，S蛋白是新冠病毒感染机体的关键组分，也是研制新冠疫苗的关键起点。我国目前获批使用的新冠病毒疫苗主要有：灭活疫苗、重组蛋白疫苗、腺病毒载体疫苗。这三种疫苗的生产技术路线如下表，回答下列问题：

疫苗种类	研制思路
灭活疫苗	活病毒→培养扩增→物理或化学方法灭活→纯化→灭活病毒颗粒→人体
腺病毒载体疫苗	S蛋白基因→腺病毒基因表达载体→人体
重组蛋白疫苗	S蛋白基因→基因表达载体→重组工程化细胞→S蛋白→人体

(1)新冠病毒灭活疫苗能激活人体产生体液免疫反应是由于所注射的疫苗保留了____________________。
(2)腺病毒载体疫苗是利用复制缺陷型腺病毒作为载体，即将腺病毒中负责__________________________的基因片段用限制酶剪切掉。若制备腺病毒载体新冠病毒疫苗，首先需要在逆转录酶的作用下，以__________________为模板经过逆转录获得含有S蛋白基因的DNA。对获得的重组腺病毒除用PCR检测S蛋白基因外，还需用________________________的方法检测S蛋白。
(3)生产重组蛋白疫苗，首先需要将编码S蛋白关键序列的基因克隆出来，插入到一个表达载体里面，该步骤在基因工程中被称为_________________________________________，最终将目的基因导入受体细胞的方法是_______________________________________________________________________。
(4)新冠疫苗也可能通过蛋白质工程来生产。蛋白质工程是在基因工程的基础上发展起来的，通过_______________________对现有蛋白质进行改造或制造一种新的蛋白质，以满足人类的需求。

【推荐1】HA蛋白是禽流感病毒的重要抗原。鸡卵清蛋白是由输卵管上皮细胞中卵清蛋白基因特异性表达后分泌至输卵管内，参与构成鸡蛋清的蛋白质。下图是利用基因工程技术制备HA蛋白鸡输卵管生物反应器的过程。几种可供选择的限制酶识别序列如下：

回答下列问题。
(1)①过程利用禽流感病毒的RNA进行逆转录，获得能表达出HA蛋白的目的基因，该过程需要使用的酶是____，原料是____。
(2)通过设计引物，可在PCR特异性扩增目的基因时，使目的基因两端加入相应的限制酶识别序列，进而使目的基因能够与鸡卵清蛋白基因启动子、载体正确连接，构建基因表达载体。为了实现上述目的，用于扩增目的基因的引物应具有____限制酶识别序列；此外，引物还需满足的条件有____。②过程需使用的限制酶有____。
(3)使用鸡卵清蛋白基因启动子的目的是____。
(4)上述过程获得的HA蛋白可作为疫苗的主要成分对鸡进行免疫，使鸡获得抵抗禽流感病毒的能力，这属于____（填“免疫预防”“免疫诊断”或“免疫治疗”）。