【推荐1】为增强番茄的抗冻能力，研究人员从鱼中获取抗冻蛋白基因并将其导入番茄细胞中，下图是上述所采用的质粒和鱼的抗冻蛋白基因的示意图，Amp^r是氨苄青霉素抗性基因，AluⅠ、SmaⅠ、PstⅠ、HindⅢ是限制酶。回答下列问题：

(1)研究人员利用PCR获取抗冻蛋白基因时，需要在缓冲溶液中进行，同时提供DNA模板、耐高温的DNA聚合酶、引物以及___等，其中耐高温的DNA聚合酶的作用是___。
(2)据图分析，在构建基因表达载体时，最好选择限制酶___和___切割抗冻蛋白基因与质粒，这样做的好处是___（答出1点）。
(3)研究人员将抗冻蛋白基因导入番茄中获得甲、乙两品系，并对甲、乙两品系和非转基因番茄中的抗冻蛋白表达情况进行了检测，其中非转基因番茄中未检测到抗冻蛋白，而甲、乙品系中均检测到抗冻蛋白，上述过程通常采用的检测方法是___，该检测结果说明___。

【推荐2】基因驱动是指特定基因有偏向性地遗传给下一代的自然现象。研究发现，叶用莴苣（俗称生菜）细胞中的FANCM蛋白能够阻止减数分裂过程中交叉互换的发生，科学家借助CRISPR/Cas9基因编辑技术（原理如图1所示），研发出人工FANCM基因驱动系统，从而在叶用莴苣中实现了外部引入的基因多代遗传。图2表示利用基因驱动技术获得FANCM突变基因的过程，利用同源定向修复功能，可以使另一条同源染色体上也插入基因驱动元件，从而获得FANCM基因纯合突变体。

(1)图1中组成gRNA的单体是，gRNA的作用是_____________，为确定图2中基因驱动元件是否完整插入FANCM基因，最好选择的两组引物是_____________（从图2中P1-P4四种引物中选择）进行PCR。
(2)图2中科研人员首先构建了基因驱动元件，将其导入叶用莴苣细胞中，需要将其DNA序列插入到Ti质粒的T-DNA内部，原因是_____________，为提高导入成功率，常利用_____________处理农杆菌。
(3)用FANCM基因纯合突变体作为母本与野生型父本杂交，F₁中有多达7%的植株为纯合突变体。请解释纯合突变体产生的原因是_____________。
(4)利用基因驱动技术获得FANCM基因突变纯合体，在叶用莴苣遗传育种中的应用价值是_____________。
(5)遗传学家研究发现，基因驱动技术几乎可以百分之百地使突变基因在该种群群体之间传播，某些生物学家曾提出把这种技术应用于消灭一些入侵物种，从而保护那些濒危物种，一些遗传学家立即呼吁增强这种技术的管制。请从生物技术安全性的角度简要谈谈你对该技术的看法。____________________。

【推荐3】【生物——选修3：现代生物科技专题】
回答利用农杆菌转化法培育转基因植物的相关问题：

（1）培育转基因植物过程的核心步骤是构建基因表达载体，其目的是使目的基因在受体细胞中_____，并且可以通过复制遗传给下一代，同时，使目的基因表达和发挥作用。
（2）构建基因表达载体时，可利用_____酶连接被限制酶切开的______键。
（3）组成基因表达载体的单体是_____。基因表达载体中的启动子是_____识别和结合的部位，这种结合完成后才能驱动目的基因通过_____（填过程）合成mRNA。目的基因表达的翻译过程的终止信号是______。
（4）用两种限制酶Xba I和Sac I（两种酶切出的黏性末端不同）切割某DNA，获得含目的基因的片段。若利用该片段构建基因表达载体，应选用下图中的何种Ti质粒？___________。

【推荐1】甜柿鲜果肉中含有可溶性糖、微量元素、维生素和β一胡萝卜素等多种成分，营养价值高，深受消费者的喜爱。甜柿的自然脱涩与乙醛代谢关键酶基因（PDC）密切相关， 推测涩味程度可能与PDC 基因的表达情况有关。为筛选PDC 基因的调控蛋白，科研人员进行了下列实验。回答下列问题。

(1)启动子位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的位点，同时启动子区域存在着许多调控蛋白的结合位点，RNA聚合酶和调控蛋白共同影响了基因的_______________水平。
(2)PDC基因的启动子序列未知，为获得大量该基因启动子所在片段，可利用限制酶将基因组 DNA 进行酶切，然后在_______________的作用下将已知序列信息的接头片段连接在PDC 基因的上游，根据接头片段和 PDC基因编码序列设计引物进行_______________扩增，在扩增过程中使用的DNA聚合酶具有_______________的特点，在该酶的作用下可以将4种脱氧核苷酸加到引物的一端。
(3)AD基因表达出的 AD蛋白与启动子足够靠近时，能够激活后续基因转录，据此可利用与AD蛋白形成的融合蛋白来筛选待测蛋白。利用质粒A构建含有PDC基因启动子片段的重组质粒并导入代谢缺陷型酵母菌，用不含__________的培养基可筛选出成功转化的酵母菌Y1H；将从甜柿中提取的RNA逆转录形成的各种cDNA与质粒G连接后导入酵母菌，此时应选择质粒 G 中的位点__________（填序号 1～5）作为cDNA 的插入位点，最终获得携带不同cDNA片段的酵母菌群Y187。
(4)重组酵母Y1H 与Y187 能够进行接合生殖，形成的接合子含有两种酵母菌质粒上的所有基因。若接合子能在含有_______________的培养基中生存，则推测待测蛋白是 PDC基因的调控蛋白。
(5)筛选出 PDC 基因的调控蛋白后，为满足生产上的需要对其进行改良，这种技术属于__________工程，该工程的起点是________________________。

【推荐2】自20世纪80年代初，第一种基因工程药物－重组人胰岛素投放市场以来，据不完全统计，目前利用转基因工程菌生产的药物已有百余种，包括细胞因子、抗体、疫苗、激素等。这些药物可以用来预防和治疗人类肿瘤、心血管疾病、遗传病、传染病等。回答以下有关问题。
（1）基因工程药物的化学本质通常为___________，利用基因工程生产药物通常是把基因表达载体导入微生物细胞，原因是微生物___________
（2）利用工程菌生产乙肝疫苗时，除了可以从基因文库提取目的基因外，还可以利用PCR技术扩增出目的基因，但该方法的前提是___________。构建基因表达载体时需要在目的基因上游和下游分别添加特定的___________和终止子，以便目的基因可以正常___________。利用基因工程生产的乙肝疫苗与传统的疫苗在结构成分上有何差别？_________________________________。
（3）若上述过程生产的疫苗结构不够稳定，可通过___________技术对其进行改造，该技术的直接操作对象是___________。

【推荐1】雌性哺乳动物在早期胚胎发育过程中 1 条 X 染色体会发生整体范围内的沉默（“非逃逸”基因转录活性被抑制），X 染色体失活（XCI），仅有少数“逃逸”基因仍能正常表达。XCI能保证雌、雄间 X 染色体上基因表达水平的一致，也会造成体外受精胎儿性别比例的失衡。
(1)为制备体外受精（IVF）的胚胎，研究人员采用超数排卵方法采集小鼠______期卵母细胞，另一方面，将成年健康公鼠的精子在体外条件下进行______处理，将二者置于适当的培养液中完成体外受精。收集早期胚胎，移植到经过______处理的代孕母鼠中，获得的胚胎含有______（填“单”“双”或“三”）亲的遗传物质。
(2)研究人员对体外受精胎儿性别进行鉴定，表中数据显示正常胎儿性别比例（雄/雌）______自然生产（IVO）胎儿的性别比例。

组别	胚胎数	活仔率（%）	雄/雌
自然生产（IVO）	81	56.25	1.08
体外受精（IVF）	82	45.58	1.48

(3)为进一步揭示体外受精的胎儿性别比例失衡的原因，研究人员剖取第 7.5 天的小鼠胚胎进行胎儿发育情况统计，结果如图 1：

①结果显示 IVO 组形态异常的胎儿的雌、雄比率相当，而在 IVF 组中，__________________。
②研究人员收集不同组别的胚胎细胞，定量检测具代表性的“非逃逸”基因，结果显示这些基因的表达在 IVF 雌性胚胎中显著______（填“低于”“等于”或“高于”）IVO 雌性胚胎，说明 IVF雌性胚胎 XCI 不足。
③已有研究表明，XCI 高度依赖激活因子 RNF12，研究人员利用免疫荧光技术检测 RNF12 蛋白的表达量如图 2，结果为________________________。

(4)综上所述，XCI 造成体外受精的胎儿性别比例失衡的可能原因是________________________。

【推荐2】CRISPR-Cas9技术又称为基因编辑技术，该技术在基因的上下游各设计一条向导RNA（向导RNA1，向导RNA2），将其与含有Cas9蛋白编码基因的质粒一同转入细胞中，向导RNA（gRNA）通过碱基互补配对可以定位与靶向基因结合，Cas9蛋白会使该基因上下游的DNA双链断裂，断裂的基因上下游两端的序列连接起来，从而实现了细胞中目标基因的敲除。回答下列问题：
（1）CRISPR-Cas9系统广泛存在于细菌体内，推测该系统在细菌体内的作用是___________________。
（2）基因表达载体的启动子位于________________，是RNA聚合酶识别和结合的部位。目的基因导入受体细胞后，成功产生了Cas9蛋白和gRNA。gRNA能够定位靶向基因的原理是________________。
（3）Cas9蛋白会使该基因上下游的DNA双链断裂，由于________________，会将断裂上下游两端的序列连接起来，从而实现了细胞中目标基因的敲除。从根本上剔除老鼠细胞中的目标基因（肥胖基因），常选用________________作为改良对象，理由是________________________________________________。
（4）科学家从癌症患者血液中提取某种细胞，利用基因编辑技术加入一个帮助这种细胞定向清除癌细胞的新基因序列，然后再把这些细胞注入患者血液中，以达到杀死癌症细胞的目的，这些细胞是人体的________________细胞，由于该细胞中的PD-1蛋白会引起免疫耐受，减弱对癌细胞的定向清除作用，临床上可以通过 CRISPR-Cas9技术剔除________________，从而重新激活淋巴细胞对肿瘤细胞的攻击能力。